Прогностическая значимость маркера TMPRSS2-ERG для диагностики рака предстательной железы



ПРОГНОСТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

МАРКЕРА TMPRSS2-ERG ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ РАКА ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

Д. А. Викторов, А. Н. Тороповский, А. Г. Никитин,

Г. Р. Садртдинова

Цель: Исследование экспрессии химерного гена TMPRSS2-ERG в моче пациентов с подозрением на рак предстательной железы и определение диагностических показателей данного молекулярно-генетического маркера путём сравнения с заключением гистологических исследований. Материалы и методы: Объектом исследования являлись образцы клеточного осадка мочи, полученной после пальцевого ректального массажа предстательной железы от пациентов с подозрением на рак предстательной железы и направлением на первичную или повторную биопсию. Образцы были предоставлены ГАУЗ «Республиканский клинический онкологический диспансер МЗ РТ» (г. Казань) и ГУЗ «Областной клинический онкологический диспансер» (г. Ульяновск). Всего было исследовано 68 образцов, из которых для 37 был подтверждён рак предстательной железы с помощью гистологического исследования, для 31 образца было получено отрицательное заключение гистологического исследования. Клеточные осадки получали путём центрифугирования мочи объёмом 20–50 мл. Выделение РНК из клеточных осадков мочи весом 50–300 мг осуществляли с помощью набора реагентов «Проба-НК» производства ООО «ДНК-Технология».Исследование экспрессии химерного гена TMPRSS2-ERG выполнялось с помощью набора реагентов, разработанного коллективом авторов и основанного на методе обратной транскрипции с последующей полимеразной цепной реакцией с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени. Праймеры и зонды для амплификации химерного гена TMPRSS2-ERG подбирались авторами работы на переход между образующими данный ген экзонами исходных генов TMPRSS2 и ERG, благодаря чему обеспечивалась строгая специфичность в отношении транскрипта TMPRSS2-ERG и отсутствие спе- цифичности как по отношению к транскриптам исходных генов TMPRSS2 и ERG, так и по отношению к геномной ДНК, что подтверждалось экспериментально. Для контроля взятия материала, выделения РНК и прохождения реакции обратной транскрипции, параллельно с реакцией на химерный ген TMPRSS2-ERG с тем же образцом кДНК ставилась реакция на простат-специфичный транскрипт гена KLK3, специфичные праймеры для которой также подбирались авторами работы на экзон-экзонный переход. Для приготовления реакционных смесей для обратной транскрипции использовали Diamant RevertM РНК-зависимую ДНК-полимеразу с 10-кратным буфером, MgCl2, и dNTP производства ООО «БелБиоЛаб», а также рандомные 6-мерные праймеры производства ООО «ДНК-Синтез». Для приготовления ПЦР-смесей использовали Diamant TaqD ДНК полимеразу с 10-кратным буфером, MgCl2 и dNTP производства ООО «БелБиоЛаб». Оптимальные концентрации MgCl2, праймеров, а также параметры обратной транскрипции и протокол ПЦР устанавливались экспериментально. Для амплификации использовали прибор DTprime производства ООО «ДНК-Технология». Оценку экспрессии химерного гена TMPRSS2-ERG осуществляли качественным способом на основе наличия графика накопления флуоресцентного сигнала с пороговым циклом (Cp) не позднее 40. При отсутствии прохождения реакции по контрольному гену KLK3 результат для данного образца оценивали как невалидный. Результаты: Из 37 образцов с подтверждённым гистологически раком предстательной железы у 9 была выявлена экспрессия химерного гена TMPRSS2-ERG (истинноположительные результаты), у 28 экспрессия отсутствовала (ложноотрицательные). Из 31 образца с отрицательным результатом биопсии у 30 экспрессия TMPRSS2-ERG также отсутствовала (истинноотрицательные), в 1 образце обнаружилась экспрессия химерного гена (ложноположительный). Таким образом изучаемый молекулярно-генетический маркер рака предстательной железы имеет следующие диагностические показатели: чувствительность — 24,3%, специфичность — 96,8%, положительная прогностическая ценность — 90%, отрицательная прогностическая ценность — 51,7%, диагностическая точность — 57,4%.

Заключение: Проведённое исследование показало, что выявление экспрессии химерного гена TMPRSS2-ERG с большой вероятностью (90%) указывает на рак предстательной железы. С другой стороны, у 75,7% пациентов с подтверждённым раком экспрессия данного химерного гена не выявлялась в момент исследования, что ставит под вопрос возможность использования TMPRSS2-ERG как самостоятельного молекулярно-генетического маркера для диагностики. Тем не менее, благодаря высокой специфичности (96,8%) он может быть использован как дополнительный маркер куже зарекомендовавшему себя PCA3, экспрессия которого так же определяется по моче пациента, например, с помощью существующего набора реагентов «Проста-Тест» производства ООО «ТестГен», что позволит увеличить прогностическую значимость полученной комплексной тест-системы.