Противовоспалительная активность растительного средства «Панкреофит»

Острый панкреатит – это первично асептическое воспаление демаркационного типа, характеризующееся каскадной активацией ферментов поджелудочной железы и их аутоагрессией, замещением паренхимы органа соединительной тканью и развитием недостаточности экзо- и эндокринной функций железы [5]. В связи с этим актуальным является поиск панкреопротекторных препаратов, обладающих противовоспалительной активностью.

В Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН разработано комплексное растительное средство, условно названное «Панкреофит», представляющее собой сумму экстрактивных веществ из 7 видов растительного сырья: трава череды трехраздельной Bidens tripartita L. (10 ч.), сушеницы топяной Gnaphalium uliginosum L. (10 ч.) и зверобоя продырявленного Hypericum perforatum L. (5 ч.), соцветия календулы лекарственной Calendula officinalis L. (20 ч.), корни девясила высокого Inula helenium L. (15 ч.), побеги пятилистника кустарникового Pentaphylloides fruticosa L. (10 ч.) и черники обыкновенной Vaccínium myrtíllus L. (30 ч.). Ранее в экспериментах на животных установлено, что «Пан-креофит» обладает выраженной панкреопротекторной активностью при остром панкреатите [2]. Способ получения данного средства защищен патентом [4].

Целью работы явилось определение противовоспалительной активности комплексного растительного средства «Панкреофит».

Материал и методы исследований

Экспериментальная работа выполнена на 85 крысах обоего пола линии Wistar с исходной массой 180-200 г. Содержание животных осуществлялось в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и научных целей.

Экстракт растительного средства «Панкреофит» вводили животным внутрижелудочно в дозе 300 мг/кг в виде взвеси с дистиллированной водой. В качестве препарата сравнения использовали известное анальгезирующее, жаропонижающее и противовоспалительное средство - бутадион в изоэффективной дозе 10 мг/кг. Продолжительность введения «Панкреофита» и бутадиона, а также сроки исследования варьировали в зависимости от цели и продолжительности экспериментов. Животные контрольной группы получали дистиллированную воду в соответствующем объеме по аналогичным схемам введения лекарственных средств на всех этапах исследования.

Экссудативную фазу воспалительной реакции у крыс вызывали путем субплантарного введения в заднюю конечность крысы 0,1 мл 3%-ного раствора формалина [7]. «Панкреофит» и бутадион в иссле- дуемых дозах вводили животным внутрижелудочно трехкратно: за 3 часа до введения формалина и через 5 и 18 часов после. Оценку антиэкссудативной активности фитоэкстракта «Панкреофит» осуществляли онкометрическим методом через 24 часа после введения формалина, вычисляя процент угнетения отека лапки по отношению к контролю.

Альтеративную фазу воспалительной реакции у крыс воспроизводили путем подкожного введения 0,5 мл 9%-ного раствора уксусной кислоты в область спинки [3]. Одновременно внутрибрюшинно вводили раствор декстрана в дозе 300 мг/кг. «Панкреофит» и бутадион вводили за 1 час до введения раствора уксусной кислоты, а затем ежедневно 1 раз в сутки в течение 21 дня. Антиальтеративное действие «Панкреофита» оценивали по степени развития некроза и регенерации тканей планиметрическим методом на 7-, 14- и 21-е сутки эксперимента.

Влияние «Панкреофита» на пролиферативную стадию воспалительного процесса изучали на модели «ватной гранулемы» [7] . Крысам, находящимся под барбамиловым наркозом (50 мг/кг, внутрибрюшинно, однократно), в области спины имплантировали стерильный ватный тампон весом 15 мг, после чего рану послойно ушивали. «Панкреофит» и бутадион вводили внутрижелудочно 1 раз в сутки в течение 7 дней. Исследования проводили через 7 суток от начала эксперимента. Гранулемы извлекали, проводили их взвешивания в сыром виде (сразу после извлечения) и после высушивания (t=700С, в течение 24 часов) до постоянной массы. О пролиферативной активности «Панкреофита» судили по разности сухих гранулем животных опытной и контрольной групп.

Асептический перитонит вызывали внутрибрюшинным введением крысам 1 мл 0,2 %-ного раствора нитрата серебра [1]. «Панкреофит» и бутадион вводили животным опытных групп 1 раз в сутки в течение 5 дней, последний раз за 30 минут до введения нитрата серебра. Через 3 часа после введения нитрата серебра животных декапитировали под легким эфирным наркозом. Брыжейку белых крыс фиксировали смесью Карнуа, окрашивали 0,05 %-ным раствором толуидинового синего. Критерием развития и выраженности перитонита являлись количество жидкости в брюшной полости лабораторных животных и процент дегранулированных тучных клеток в брыжейке.

Значимость различий между указанными параметрами среди экспериментальных групп оценивали с помощью непараметрического U-критерия Манна-Уитни [6]. Различия считали существенными при Р<0,05.

Результаты и обсуждение

Результаты исследований показали, что введение белым крысам «Панкреофита» в дозе 300 мг/кг и бутадиона в дозе 10 мг/кг оказывает выраженное антиэкссудативное действие, угнетая развитие формалинового отека на 33 и 29 % соответственно по сравнению с аналогичным показателем у животных контрольной группы (табл.1).

Таблица 1

Влияние «Панкреофита» и бутадиона на степень экссудации при «формалиновом» отеке лапки у белых крыс

Группы животных	Количество животных	∆ V, мл	% угнетения отека
Контрольная	10	1,30±0,03	-
«Панкреофит»	10	0,87±0,04*	33
Бутадион	10	0,92±0,07*	29

Примечание. ∆ V – разность между объемами отечной и неотечной лапок белых крыс; * - здесь и далее разница достоверна по сравнению с показателями в контроле при p <0,05.

Как следует из данных, представленных на рисунке, «Панкреофит» оказывает противовоспалительное действие на альтеративной стадии воспалительного процесса, о чем свидетельствуют уменьшение степени альтерации тканей и усиление регенераторных процессов в очаге воспаления. Так, у животных, получавших «Панкреофит» в дозе 300 мг/кг, площадь деструкции на 7-, 14- и 21-е сутки наблюдения была ниже такового показателя у крыс контрольной группы на 20, 24 и 29 %, у животных, получавших бутадион, - на 20, 33 и 22 % соответственно.

Рис.1. Влияние «Панкреофита» и бутадиона на процессы альтерации у белых крыс

При моделировании пролиферативной стадии воспалительного процесса (табл.2) было установлено, что введение животным фитоэкстракта «Панкреофит» в дозе 300 мг/кг не оказывает существенного влияния на процесс пролиферации.

Таблица 2

Влияние «Панкреофита» и бутадиона на процессы пролиферации при асептическом воспалении у белых крыс

Группы животных	Количество животных	Масса сухих гранулем, мг	Степень образования гранулемы, %
Контрольная	10	5,9±0,2	-
«Панкреофит»	10	6,4±0,3	8
Бутадион	10	6,6±0,4	10

На фоне введения нитрата серебра у животных контрольной группы отмечались увеличение количества внутрибрюшной жидкости и тотальная дегрануляция тучных клеток по сравнению с данными у животных интактной группы (табл.3), что свидетельствует о выраженном воспалительном процессе. На фоне введения «Панкреофита» и бутадиона у животных опытных групп объем внутрибрюшинной снижался на 33 и 44 %, количество дегранулирующих тучных клеток – в 2,0 и 2,4 раза соответственно по сравнению с показателями у контрольных животных.

Таблица 3

Влияние «Панкреофита» и бутадиона на объем внутрибрюшинной жидкости и количество дегранулирующих тучных клеток у белых крыс при асептическом перитоните

Группы животных	Количество животных	Объем внутрибрюшинной жидкости, мл	Количество дегранулирующих тучных клеток, %
Интактная	7	0,2±0,01	5,4 ±0,20
Контрольная	6	0,9±0,03	87,2 ±3,21
«Панкреофит»	6	0,6±0,04*	42,1±2,34
Бутадион	6	0,5±0,02*	35,6±3,01

Таким образом, комплексное растительное средство «Панкреофит» в дозе 300 мг/кг оказывает выраженное антиэкссудативное, антиальтеративное действие и ускоряет репаративные процессы при остром асептическом воспалении, а также уменьшает объем перитонильной жидкости и снижает количество дегранулирующих тучных клеток при остром асептическом перитоните. Следовательно, механизм противовоспалительной активности «Панкреофита» связан как с его неспецифическим противовоспалительным действием, так и со способностью блокировать высвобождение медиаторов воспаления тучными клетками за счет выраженного мембраностабилизирующего действия [8]. Противовоспалительный эффект «Панкреофита» обусловлен наличием в нем комплекса биологически активных веществ: флавоноидов, полисахаридов, эфирных масел, витаминов, органических кислот и других соединений. На основании полученных данных можно рекомендовать применение «Панкреофита» в комплексном лечении и профилактике острых панкреатитов.