Противовоспалительное действие экстракта сухого из семикомпонентного сбора "Наркофит"

Фармакологическая регуляция процессов воспаления является одной из важнейших проблем медицины. К сожалению, в настоящее время недостаточно применяются противовоспалительные средства из лекарственных растений, отличающиеся лучшей переносимостью, меньшей токсичностью. Поэтому поиск новых растительных средств, обладающих противовоспалительным действием, является актуальной задачей.

Цель работы – определение противовоспалительной активности экстракта сухого из семикомпонентного сбора, условно названного «наркофит», состоящего из плодов шиповника иглистого (Rosa) – 200 г, плодов боярышника кроваво-красного (Crataegus) – 200 г, корневищ с корнями девясила высокого (Inula helenium L.) – 250 г, листьев мяты перечной (Mentha piperita L.) –100 г, травы сушеницы топяной (Gnaphalium uliginosum L.) – 50 г, листьев брусники обыкновенной (Vaccinium vitis – ideae L.) - 100 г, корневищ с корнями элеутерококка колючего (Eleutherococcus senticosus L.) – 100 г [5].

Материалы и методы исследования

Исследования проведены в летне-осенний период на 238 белых крысах линии Wistar обоего пола с исходной массой 160-170 г, которых содержали в условиях естественного светового режима и на стандартной диете при свободном доступе к воде и пище. Из эксперимента животных выводили в соответствии с «Правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей».

При определении противовоспалительной активности данного средства использовали классические модели асептического воспаления, позволяющие оценить влияние экстракта сухого (ЭС) «Нар-кофит» на основные стадии этого процесса, а также выявить некоторые аспекты механизма его противовоспалительного действия.

О характере влияния испытуемого средства на альтерацию тканей и интенсивность процессов регенерации судили по динамике заживления кожно-мышечного дефекта у крыс, индуцированного подкожным введением 0,5 мл 9 %-ной уксусной кислоты с одновременным введением раствора декстрана в дозе 300 мг/кг массы животного [6]. Первое введение водного раствора экстракта сухого

«Наркофит» в дозе 200 мг/кг осуществляли внутрижелудочно за 1 час до введения флогогенных агентов, а затем ежедневно 1 раз в сутки на протяжении всего эксперимента (29 дней). Животные контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды по аналогичной схеме.

В качестве препарата сравнения другой группе крыс вводили калефлон в изоэффективной дозе 100 мг/кг массы животного. Площадь некротизированной ткани оценивали планиметрическим методом на 9-е и 29-е сутки эксперимента.

Оценку влияния ЭС «Наркофит» на экссудативную фазу воспалительной реакции проводили на моделях острого асептического воспаления у животных с использованием флогогенных агентов с различными механизмами противовоспалительного действия (формалин, декстран, гистамин). Асептическое воспаление у крыс в соответствующих группах вызывали путем однократного субплантарного введения в заднюю конечность 0,1 мл 3 %-ного раствора формалина [9], 6 %-ного водного раствора декстрана в объеме 0,1 мл [1] и 0,1 %-ного раствора гистамина гидрохлорида в объеме 0,1 мл [9]. ЭС «Наркофит» и калефлон в соответствующих группах животных вводили внутрижелудочно за 1 час до инъекции, а затем через 5 и 18 часов. Оценку антиэкссудативного действия вычисляли, рассчитывая процент угнетения отека по отношению к контролю. Влияние «Наркофита» на образование фиброзно-грануляционной ткани осуществляли по методу Ф. Тринус и соавт. [8]: стерильные ватные шарики массой 15 мг имплантировали белым крысам под кожу в области спины в асептических условиях. Испытуемое средство и препарат сравнения вводили крысам внутрижелудочно с 1-го дня опыта в указанном объеме и дозах 1 раз в сутки в течение 7 дней. После этого образовавшиеся гранулемы взвешивали на аналитических весах в сыром виде (сразу после извлечения) и после высушивания (при 70 oС в течение 24 часов до постоянного веса).

Острый перитонит воспроизводили по методу П.Н. Александрова с соавт. [1], путем внутрибрюшинного введения лабораторным животным 1 мл 0,2 %-ного раствора серебра нитрата. ЭС «Нарко-фит» и калефлон вводили животным опытных групп за 30 мин и через 1 час после инъекции серебра нитрата. Критерием выраженности острого воспалительного процесса являлись объем экссудата в брюшной полости и процент дегранулированных тучных клеток в брыжейке.

Оценку влияния испытуемого средства на сосудистую проницаемость у крыс проводили на модели 24-часового иммобилизационного стресса с использованием метода «меченых» сосудов [2]. Животным опытной группы внутрижелудочно вводили ЭС «Наркофит» в дозе 200 мг/кг веса животного в виде водного раствора, однократно за 1 час до исследования. По аналогичной схеме в изоэффектив-ной дозе использовали препарат сравнения калефлон в отдельной группе животных. Крысы контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды. Нарушение сосудистой проницаемости оценивали по числу «меченых» сосудов в каждом из 10 просмотренных окон брыжейки, а также по интенсивности метки. Для оценки достоверности различий использовали t- критерий Стьюдента [4].

Результаты исследований и их обсуждение

Как следует из данных, приведенных в таблице 1, ЭС «Наркофит» в указанном объеме оказывает противовоспалительное действие, о чем свидетельствуют уменьшение степени альтерации тканей и повышение интенсивности регенераторных процессов в очаге воспаления. Введение белым крысам ЭС «Наркофит» оказывает антиальтеративное действие, снижая степень деструкции ткани при воздействии флогогенного агента. Так, на 9 и 29-е сутки эксперимента площадь повреждения тканей снижается на 34 и 47 % соответственно по сравнению с контролем (табл. 1).

Таблица 1

Влияние экстракта сухого «Наркофит» на альтерацию и регенерацию при остром асептическом воспалении у белых крыс

Группы животных	Площадь альтерации, см2
	9 сутки	29 сутки
Контрольная (СН3СООН+дист. Вода) (n=18)	5,25±0,30	2,72±0,10
СН3СООН +ЭС «Наркофит» (n=20)	3,45±0,26*	1,45±0,10*
СН3СООН+калефлон (n=20)	4,00±0,24*	1,95±0,14*

Примечание: * – здесь и далее значения, отличающиеся от данных животных контрольной группы при Р≤0,05

ЭС «Наркофит» оказывает существенное антиэкссудативное действие, о чем свидетельствует уменьшение выраженности отека конечности животных при асептическом воспалении, индуцированном формалином – на 30,5%, декстраном – на 21,8% и гистамином – на 20% по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольной группы (табл. 2).

Таблица 2

Влияние экстракта сухого «Наркофит» на экссудативную фазу воспаления у белых крыс

Группы животных	Разность между объемами воспаленной и невоспаленной лапок, мл	% угнетения отека
Формалиновый отек
Контрольная (формалин+дист. вода) (n=12)	1,15±0,05	-
формалин+ ЭС «Наркофит» (n=10)	0,80±0,05*	30,5
формалин+калефлон (n=10)	0,82±0,05*	28,7
Декстрановый отек
Контрольная (декстран+дист. Вода) (n=10)	1,15±0,1	-
декстран +ЭС «Наркофит» (n=10)	0,90±0,1*	21,8
Декстран +калефлон(n=10)	1,10±0,1*	4,4
Гистаминовый отек
Контрольная (гистамин+дист. вода) (n=10)	0,50±0,01	-
Гстамин + ЭС «Наркофит» (n=10)	0,40±0,01*	20
Гистамин +калефлон (n=10)	0,45±0,01*	10

При этом антиэкссудативная активность ЭС «Наркофит» превосходит таковую у препарата сравнения – калефлона.

При определении влияния исследуемого средства на пролиферативную стадию воспаления установлено, что масса соединительнотканной капсулы в очаге воспаления возрастает на 12,7% по сравнению с показателями у животных контрольной группы (табл. 3), т.е. обладает умеренным пролиферативным действием.

Таблица 3

Влияние сухого экстракта «Наркофит» на образование грануляционно-фиброзной ткани в очаге воспаления у белых крыс

Группы животных	Масса влажной гранулемы, мг	Масса сухой гранулемы, мг	Разница от исходной массы, мг
Контрольная (дист. вода) (n=8)	178,0±2,42	28,8±1,12	13,8±1,20
ЭС «Наркофит» (n=8)	144,2±0,62*	30,8±0,70*	15,8±0,80
Калефлон (n=8)	147,4±36,0*	21,4±1,45*	6,40±0,60*

Инъекция крысам раствора серебра нитрата сопровождается развитием острого асептического воспаления, о чем свидетельствует выраженная экссудация в брюшную полость животных контрольной группы большого количества жидкости красновато-бурого цвета, обусловленного присутствием в ней значительного количества эритроцитов (табл. 4).

Введение на этом фоне другой группе крыс ЭС «Наркофит» в вышеуказанной дозе оказывало противовоспалительное действие, на что указывало более чем 2-кратное уменьшение объема перитонеальной жидкости по сравнению с данными у животных контрольной группы. При этом внутрибрюшинная жидкость у животных, получавших испытуемое средство, имела светло-серый цвет с опалесцирующим оттенком, свидетельствующим о практически полном отсутствии в ней эритроцитов. Наряду с этим в брыжейке крыс опытной группы, получавших ЭС «Наркофит», наблюдали снижение количества дегранулированных тучных клеток – в среднем на 35% по сравнению с данными у крыс контрольной группы (табл. 4). Препарат сравнения оказывал однонаправленный менее выраженный эффект.

Таблица 4

Влияние экстракта сухого «Наркофит» на объем внутрибрюшинной жидкости и дегрануляцию тучных клеток в брыжейке при остром перитоните у белых крыс

Группы животных	Объем внутрибрюшинной жидкости, мл	Дегрануляция тучных клеток, %
Интактная (n=10)	-	3,0±0,2
Контрольная (AgNO 3 +дист. вода) (n=8)	0,7±0,1	82,5±5,2
AgNO 3 +ЭС «Наркофит» (n=8)	0,3±0.1*	54,1±4,5*
AgNO 3 +калефлон (n=8)	0,5±0.1*	70,5±5,1*

При исследовании влияния ЭС «Наркофит» на проницаемость сосудов установлено наличие у испытуемого сбора сосудоукрепляющего действия. Так, у животных, получивших ЭС «Наркофит», количество брыжеечных окон без метки увеличивалось почти в 2 раза по сравнению с контролем, также наблюдали существенное уменьшение количества окон с более 10 «мечеными» сосудами и некоторое увеличение количества брыжеечных окон от 1 до 10 «меченых» сосудов (табл. 5). При исследовании проницаемости сосудов по интенсивности метки количество животных с самыми интенсивными метками, соответствующими III и IV степеням проницаемости, у группы крыс, получавшей ЭС «Нарко-фит», уменьшалось соответственно на 20 и 100% по сравнению с контролем. При этом препарат сравнения калефлон несколько уступал по эффективности ЭС «Наркофит».

Таблица 5

Влияние экстракта сухого «Наркофит» на проницаемость сосудов

Группы животных	Количество брыжеечных окон в % ко всем просмотренным			Число крыс с различными степенями метки ( % от всего числа крыс в опыте)
	Без метки	1-10 меченых сосудов	Более 10 меченых сосудов	0	I	II	III	IV
Контрольная (иммобилизация+ дист. вода ) (n=10)	29	15	58	0	100	100	100	40
иммобилизация+ ЭС    «Наркофит» (n=10)	53	21	28	0	100	100	80	0
иммобилизация+ калефлон (n=10)	49	17	32	0	100	100	90	0

Таким образом, внутрижелудочное введение ЭС «Наркофит» в дозе 200 мг/кг массы крысам при остром асептическом воспалении оказывает антиальтеративное и антиэкссудативное действие, а также способствует ускорению регенерации, в результате чего наблюдается заживление ткани на более ранних сроках патологического процесса. Кроме того, на фоне введения ЭС «Наркофит» отмечается уменьшение проницаемости сосудов, а также снижение дегрануляции тучных клеток с блокированием высвобождения из них гистамина. Указанные эффекты также подтверждают наличие у испытуемого средства выраженной противовоспалительной активности.

Очевидно, что реализация указанного действия ЭС «Наркофит» обеспечивается высоким содержанием в нем биологически активных веществ, таких как флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты, дубильные вещества, органические кислоты, тритерпеноиды, антоцианы, полисахариды и другие водорастворимые вещества. Известно, что указанные биологически активные вещества оказывают антиоксидантное, мембраностабилизирующее, противовоспалительное действие. Этим можно объяснить указанное выраженное противовоспалительное действие ЭС «Наркофит».

Выводы

• 1.    Внутрижелудочное введение крысам линии Wistar ЭС «Наркофит» в дозе 200 мг/кг массы при остром асептическом воспалении сопровождается антиальтеративным и антиэкссудативным действием, а также ускорением регенерации.

• 2.    На фоне введения животным ЭС «Наркофит» наблюдается уменьшение проницаемости сосудов, а также снижение дегрануляции тучных клеток с блокированием высвобождения из них гистамина.