Разработка комбинированной лекарственной формы «спирулина-спрей» как перспективного препарата для лечения экологически обусловленных заболеваний верхних дыхательных путей

заболевания

Одной из важных задач современной фармацевтической технологии является создание эффективных и безопасных лекарственных средств, в том числе и для лечения воспалительных заболеваний верхних дыхательных путей. Вместе с тем неблагоприятная экологическая обстановка, увеличение числа респираторных вирусных заболеваний и снижение иммунного статуса способствует росту ринитов, синуситов, тонзиллитов. Перечисленные патологии органов дыхания, по оценкам специалистов, являются распространенной группой заболеваний. По данным Европейского респираторного общества за 2008 г. более чем 25% больных ежедневно обращаются к врачам в связи с заболеваниями верхних дыхательных путей [1].

Создание новых лекарственных препаратов для оториноларингологии является актуальным не только вследствие распространенности патологии, но и в связи с тем, что воспаление слизистой оболочки неблагоприятно отражается на состоянии нервной и сердечнососудистой систем, способствует аллергической перестройке организма, изменению факторов

Тархова Марина Олеговна, главный технолог ООО «НЕОФИТ», г.Самара

Маркова Ирина Игоревна, аспирант естественного иммунитета. Для лечения указанных заболеваний целесообразно применять средства комплексного воздействия, обладающие антимикробным, противовоспалительным, ранозаживляющим и иммуномодулирующим действием [2]. Однако в настоящее время наблюдается дефицит лекарственных средств для оториноларингологии, сочетающих в себе такую комплексную терапевтическую активность. В этом аспекте перспективными в фармакотерапии воспалительного процесса ЛОР-органов являются лекарственные препараты растительного происхождения, в которых удачно сочетается высокая фармакологическая активность с минимальными побочными эффектами.

Ценными источниками биологически активных соединений с широким спектром фармакологического действия являются биомасса сине-зеленой микроводоросли спирулины платенсис (Spirulina platensisS и трава чистотела большого (Chelidonium majus). Уникальное сочетание биологически активных соединений (белки, витамины группы В, С, Е, полинена-сыщенные жирные кислоты, каротиноиды, хлорофилл, фикоцианин) в биомассе спирулины обеспечивает противовоспалительные и антиоксидантные свойства, ускоряет заживление, регенерацию и эпителизацию тканей [3]. Ряд алкалоидов чистотела большого характеризуется антимикробным и противовоспалительным действием [4].

Цель нашего исследования — разработка состава и технологии спрея на основе биомассы спирулины платенсис и настойки чистотела большого с антимикробным, противовоспалительным, ранозаживляющим действием, предназначенного для лечения заболеваний верхних дыхательных путей.

В качестве объектов исследования были выбраны следующие фитообъекты: биомасса сине-зеленой микроводоросли спирулины, настойка чистотела большого 10% на 70% спирте этиловом, разработанная учеными СамГМУ (профессор В.А. Куркин, профессор СВ. Пер-вушкин, А.А. Сохина) [4]. В качестве вспомогательных веществ использовали метилцеллю-лозу, натрий карбоксиметилцеллюлозу, карбопол, глицерин медицинский, воду очищенную.

Исследование состояния Самарского фармацевтического рынка лекарственных препаратов для лечения заболеваний верхних дыхательных путей показало преобладание препаратов импортного производства (более 65%) и преимущественно резорбтивного действия (более 67%). В данной группе преобладают лекарственные препараты синтетического происхождения (70,9%). Препараты местного действия растительного происхождения на фармацевтическом рынке Самарской области представлены в основном таблетками для рассасывания и пастилками, а спреи и аэрозоли - всего 0,2%. Вместе с тем выбор лекарственной формы в виде спрея обусловлен еще и тем, что она является дозированной, безопасной и простой в применении.

Спрей - жидкая многодозовая лекарственная форма, предназначенная для обеспечения местного или системного эффекта путем высвобождения лекарственного средства (раствора, эмульсии, суспензии) из специального вида упаковки в виде капель, размер которых соответствует отверстию распыляющего устройства (пульверизатора). Спрей, обладая преимуществами аэрозольной упаковки (удобство применения, быстрота эффекта), лишен недостатков, связанных с применением флаконов под повышенным давлением (высокая стоимость, сложность изготовления, опасность взрыва). При использовании спрея средний размер распыляемых частиц составляет - 5-50 мкм, в то время как у аэрозоля - 0,1-0,5 мкм. Таким образом, при распылении аэрозоля образуется тончайшее облако, которое при вдохе попадает в основном в бронхи, а при применении спрея оседает в верхних отделах - глотке, гортани и слизистой носа.

Разрабатываемый спрей является гетерогенной (суспензионной) системой, следовательно, размеры частиц суспензии должны укладываться в требуемый диапазон. Для этого необходимо было выбрать способы дезинтеграции и фракционирования, которые бы позволили получить и требуемый размер частиц, и максимальный выход БАС из биомассы спирулины. В результате полученных данных установлено, что сочетание механической дезинтеграции и центрифугирования при 6000 об/мин в течение 10 минут позволяет полностью освободиться от неразрушенных клеток. На основании полученных результатов разработана технологическая схема производства лекарственного препарата «Спирулина-Спрей».

В условиях естественного хранения изучена стабильность лекарственного препарата «Спирулина-Спрей» по критериям: однородность, подлинность, числовые показатели, микробиологическая чистота. Установлена стабильность препарата в течение 20 месяцев. В опытах на биологических тест-объектах (дафнии) [5] и лабораторных животных (белых беспородных крысах) проведено изучение острой токсичности разработанного лекарственного препарата. В опытах не выявлено гибели животных при пероральном введении спрея даже в дозе 15000 мг/кг, т.е. LD50>15000 мг/кг, что позволяет считать «Спирулина-Спрей» нетоксичным средством.

Антиоксидантную активность исследовали по методике, основанной на аутоокислении низких концентраций адреналина в щелочной среде [6]. Признаком аутоокисления является нарастание оптической плотности с максимумом при 347 нм в течение 2-х минут. О величине антиоксидантной активности объектов судили по степени ингибирования ими процесса аутоокисления адреналина: 0% - отсутствие антиоксидантной активности, 100% -полное ингибирование процесса аутоокисления. Разработанный препарат «Спирулина-Спрей» и извлечение из биомассы спирулины платенсис обладают выраженной антиоксидантной активностью. При определении микробиологической активности разработанного препарата методом колодцев установлено, что «Спирулина-Спрей» обладает антимикробным действием в отношении тест-штаммов Staphylococcus aureus ATCC 25923.

В условиях естественного хранения изучена стабильность лекарственного препарата «Спирулина-Спрей» по критериям: однородность, подлинность, числовые показатели, микробиологическая чистота. Установлена стабильность препарата в течение 20 месяцев.

На основании спектра поглощения разработанного лекарственного препарата, представленного на рис. 1, были выбраны ключевые длины волн для определения биодоступности: фикоцианин - характерный максимум при 620 нм; низкомолекулярные белки - 263 нм; алкалоиды чистотела - 336 и 364 нм.

Рис. 1. Спектр поглощения раствора спрея (разведение 1:100)

Исследования биодоступности разработанного препарата-спрея на основе биомассы Spirulina platensis и настойки Chelidonium majus производили методом диализа через полупроницаемую мембрану. В качестве диализных жидкостей использовались: ацетатный буфер (рН=5,56), фосфатный буфер (рН=7,45), боратный буфер (рН=8,85). Выбор данных значений рН был обусловлен необходимостью исследования высвобождения БАС в средах, близких по рН к физиологическим средам, так как рН ротовой полости и слизистой носа в норме составляет 7,2. При этом реакция среды при воспалительных и инфекционных заболеваниях может снизиться и стать слабокислой. Максимальная концентрация биологически активных веществ наблюдается через 25 минут при рН=7,45 и находится на постоянном уровне в течение 5 часов, что может свидетельствовать о пролонгированном действии лекарственного препарата.

Для лечения хронического тонзиллита использовали метод промывания миндалин под отрицательным давлением антисептическими растворами на 10 пациентах и исследуемым препаратом в двух концентрациях 2% (10 мл в 500 мл воды очищенной) и 5% (10 мл в 200 мл воды очищенной) на 10 добровольцах в возрасте от 18 до 20 лет. У всех были взяты общий анализ крови, общий анализ мочи, со-скоб с миндалин на флору, проведен полный отоларингологический анализ [7]. На основе проведенных лабораторных исследований мы провели сравнительный анализ двух схем консервативного лечения. Эффект применявшихся схем лечения оценивался по способности вызывать клиническое улучшение (уменьшение рецидивов ангин и других проявлений декомпенсации). Отдаленные клинические результаты рассматривались в трех параметрах: 1 -отсутствие эффекта, 2 - уменьшение числа рецидивов ангин, 3 - отсутствие рецидивов ангин в течение года.

При промывании миндалин под отрицательным давлением раствором фурациллина у

10 пациентов полное отсутствие наблюдалось в 22% случаев, уменьшение рецидивов - 51%, отсутствие рецидивов ангин - в 27% случаев. Продолжительность наблюдения составляла 1 год. При промывании миндалин под отрицательным давлением у 10 добровольцах 2% раствором спрея на основе биомассы Spirulina platensis и травы Chelidonium majus 7-10 дней каждый день в сочетании с ежедневным полосканием 5% раствором спрея на основе биомассы Spirulina platensis и травы Chelidonium majus 2 раза в день в течение 20 дней обнаружено, что ангины прекратились в 35% процентов случаев наблюдений, количество рецидивов ангин уменьшилось у 48% пациентов, клинический эффект отсутствовал у 17%.

Первый опыт испытания спрея, разработанного на кафедре фармацевтической технологии СамГМУ на основе биомассы Spirulina platensis, настойки Chelidonium majus на добровольцах дает основание считать этот препарат перспективным и обосновывает продолжение исследований в выбранном направлении.

Вывод: нами разработана лекарственная форма - спрей, перспективная для лечения экологически обусловленных заболеваний верхних дыхательных путей.