Разработка метода иммунотерапии (CAR-T терапии) для лечения солидных опухолей

Материалы и методы: Мононуклеарные клетки были получены из образцов периферической донорской крови методом лейкофереза, трансфекцию плазмидных конструкций CAR-CA125 или CAR-CEA проводили методом электропорации (Amaxa Nucleofector (Lonza)). Исследования эффективности в условиях in vitro проведены на СА125 позитивных культурах клеток рака яичника (OVCAR-3, OVKATE) и на СЕА позитивных культурах рака толстой кишки (НСТ116 и НТ29), в качестве контрольных моделей были использованы НЕК293 (линия не экспрессирующая СЕА) и MCF-7 (не экспрессирующая СА125). Цитотоксические эффекты оценивали методами МТТ-теста, проточной цитофлуориметрии (Cytomix FC 500 (Beckman Coulter) и с использованием динамической системы мониторинга iCelligence. Контролем специфичности являлись ЛАК-клетки (лимфокинактиви-рованные киллеры). Исследования эффективности in vivo были проведены на моделях опухолей человека (OVCAR-3, НТ29), пассируемых на бестимусных мышах. Оценивались параметры роста опухоли и продолжительность жизни животных при введении генно-модифицированных лимфоцитов в дозах 1 × 10⁵, 5 × 10⁵ и 1 × 10⁶ один раз в неделю. Основные параметры фармакокинетики были исследованы на двух видах животных — мышах и кроликах. Исследования токсичности включали оценку острой, подосторой и специфических видов токсичности.

Результаты: Для обеих CAR-Т конструкций в исследованиях in vitro показана эффективность в отношении опухолевых клеток, экспрессирующих специфический антиген. Генно-модифицированные лимфоциты вызывали гибель опухолевых клеток в среднем 72,2 %± 6,1 %, преимущественно путем апоптоза (40,2%±4,8%). Исследования эффективности in vivo выявили достоверное торможение роста опухоли и увеличение продолжительности жизни животных при разовых дозах 5 × 10⁵ и 1 × 10⁶ клеток.

Исследования фармакокинетики показали, что CAR-T лимфоциты обладают способностью к циркуляции в периферической крови с сохранением в них плазмидной ДНК и продуктов экспрессии (CAR) до 30 суток. Максимальная концентрация наблюдается в периферической крови. Токсикологические исследования показали, что тестируемые CAR-Т при однократном внутривенном и внутрибрюшинном введении в исследуемых эффективных дозах имеют минимальную токсичность.

Заключение: По результатам проведенного комплекса доклинических исследований сделан вывод о безопасности и эффективности разработанной технологии и возможности проведения первой фазы клинических испытаний.

ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЕ ОПУХОЛИ

Российское общество клинической онкологии том / vol. 10 № 3s1 • 2020

MALIGNANT TUMOURS

Russian Society of Clinical Oncology