Результаты изучения некоторых показателей иммунореактивности у хирургических больных инфекционным эндокардитом

Проблема инфекционного эндокардита ИЭ на Украине является ведущей при приобретенных пороках сердца (ППС). Проведенный нами анализ поступления больных в клинику выявил неуклонный рост ИЭ. Удельный вес по Украине возрос с 1986 по 1996 гг. в 9 раз. Изучение ИЭ на протяжении этого ряда лет позволило выявить этиологический фактор, при котором доминирующим является стафилококк (эпидермальный или золотистый). Частота встречаемости его у больных составила 78,3% [1].

Ведущее место в патогенезе ИЭ занимают нарушения клеточного и гуморального звена иммунитета [2, 4].

Целью работы является изучение особенностей иммунологического состояния больных ИЭ и возможность формирования у них аутоиммунных процессов.

Материалы и методы

Иммунологический статус изучали у 264 больных ИЭ, поступивших на хирургическое лечение: мужчин — 79,3%, женщин—19,7%, в возрасте от 20 до 58 лет. У всех больных имелся в наличии выраженный порок сердца. Поражение митрального клапана — 22%, аортального —

38%, трикуспидального — 8%. Остальные страдали комбинированными митрально-аортальными пороками — 32%.

Лимфоциты выделяли из периферической крови по общепринятой методике. Количественные показатели субпопуляций лимфоцитов определяли методом непрямой иммунофлюоресценции с использованием МКА. Учет показателей проводили с помощью люминесцентного микроскопа «Люмам» И-1 (АО «ЛОМО»). Исследованы количественные показатели Т-лимфоцитов (СД5) (ИКО-80), Т-хелперов/индукто-ров (СД4) (ИКО-86), Т-супрессоров (СД8) (ИКО-31), НК-клеток (СД16) (ИКО-116), В-лимфоцитов (СД22) (ИКО-91), лимфоцитов с рецепторами к ИЛ-2 (СД25) (ИКО-105), лимфоцитов, экспрессирующих антигены HLADR (ИКО-1) и антигены HLAABC (ИКС-63).

Определение циркулирующих иммунных комплексов (ДИК) в сыворотке крови проводили методом преципитации комплексов антиген-антитело в 3,75% растворе полиэтиленгликоля-6000 с последующим фотометрическим определением плотности преципитата по методу Н.А.Константиновой [3].

Функциональную активность Т-лимфоцитов оценивали с помощью реакции бласттранс-

Уровень лимфоцитарных субпопуляций при различных поражениях структур сердца больных ИЭ

Лимфоцитарные Контрольная		1 Поражение аортального клапана (п=19)	2 Поражение митрального клапана (п=16)	3 Сочетанные поражения клапанов (п=12)	Достоверность различий
рецепторы (СД%)	группа доноры (п=35)
СД4	23,2±4,3	23,5+1,2	18,8±1,4	19,5±1,6	Р4<0,05
СД5	39,7±2,3	38,0±2,4	34,5±2,4	31,6±2,1	Р <0,1 Р2,Р5<0,2
СД8	24,0±4,3	21,2±1,7	19,0±1,5	16,5±2,0	Р3<0,05 Р3, Р <0,2
СД4/СД8	0,97±0,09	1,10±0,07	0,99±0,06	1,20±0,08	Р3,Р6<0,1
СД16	22,2±4,2	39,7±1,8	34,1 ±2,0	34,5±4,3	Р,, Р2<0,001
HLADR	22,1±3,2	24,1±1,2	22,4±1,0	20,9±1,5	Р3,Р4<0,1 Р5<0,2
HLAABC	39,5±2,1	35,9±2,8	35,0±2,5	30,0±3,1	Р2, Р5<0,2
СД22	23,2±4,0	23,4±1,9	21,5±1,0	17,5±1,3	Р3<0,05 Рр Р3<0,1
СД5/СД22 СД25	1,71±0,11 3,8±1,1	1,62±0,13 6,5±0,7	1,60±0,21 5,4±0,8	1,80±0,12 6,0±0,5	Р5, Р6<0,05 РрР3<0,1

Р, - I-я группа больных ИЭ и контрольная группа;

Р2 - 2-я группа больных ИЭ и контрольная группа;

Р; - 3-я группа больных ИЭ и контрольная группа;

Р4- 1 и 2-я группы;

Р5- 1 и 3-я группы;

Р6~ 2 и 3-я группы.

формации лимфоцитов с лимфоцитарным митогеном, ФГА и аллергеном золотистого стафилококка [4].

Для выявления циркулирующих противо-тканевых аутоантител использовали реакцию потребления комплемента [5], сердечный антиген готовили по методике А.И.Николаева [6].

Результаты исследований

Сравнительный анализ количественных показателей субпопуляций лимфоцитов у больных ИЭ выявил у больных ИЭ достоверное повышение уровня НК-клеток (естественных киллеров) (СД-16) — клеток первой линии иммунологической защиты, составляющей соответственно (39,7±1,8)% в первой группе, (34,1 ±2,0)% во второй группе, (34,5±4,3)% в третьей группе при (22,2±4,2)% в контрольной группе (Р(<0,001, Р2<0,05, Р3<0,1) (табл. 1), что свидетельствует об активации этих клеток вследствие инфекционного процесса в организме больных ИЭ. Это согласуется с гипергаммаглобулинемией, свидетельствующей о высокой степени инфицирования организма больных. Так, уровень IgA повышен до (2,42±0,13) г/л, в контроле (1,96±0,07) г/л,

IgM — до (1,15±0,07) г/л при (0,92±0,05) г/л в контроле. Уровень СЗ-компонента комплемента составляет (0,92±0,09) г/л при (0,78+0,06) г/л в контроле, что свидетельствует в свою очередь о наличии значительного воспалительного процесса у больных ИЭ. Наблюдается значительное — в 23 раза — повышение уровня ЦИК, составляющее (1,02±0,08) Ед при норме (0,34±0,02) Ед.

Исследования по изучению клеточного и гуморального ответа больных ИЭ показали достоверное снижение как Т-лимфоцитов (СД-5), так и В-лимфоцитов (СД-22) во всех трех группах, наиболее выраженное в третьей группе.

Соотношение клеточных субпопуляций СД-4/СД-8 и СД-5/СД-22 отличаются от контрольных показателей низкой степенью достоверности, однако можно говорить о тенденции к изменению соотношений лимфоцитарных субпопуляций, влияющих на кооперативные взаимодействия лимфоцитов и их функциональное состояние. Функциональное состояние отражает снижение показателей уровня экспрессии рецепторов к ИЛ-2 и уровня экспрессии антигенов гистосовместимости первого и второго класса у больных ИЭ.

Пролиферативная активность лимфоцитов в РБТЛ при ИЭ

РБТЛ	Контрольная группа доноры (п=40)	Поражение аортального клапана (п=78)	Поражение митрального клапана (п=17)	Сочетанные поражения клапанов (н=28)	Достоверность различий
Спонтанная	7,5±0,6	6,7±0,5	6,2±0,8	6,5±0,3	Р<0,5 Р<0,5
ФГА	48,8±2,3	26,5±1,5	31,2±3,0	36,1+5,7	Р<0,001 Р<0,05 Р<0,5
Лимфоцитарный митоген	39,7±2,0	33,1±1,5	33,1+2,6	32,7±3,0	Р<0,05 Р<0,1 Р>0,5
Стафилококковый аллерген	29,3±2,0	35,1±1,6	39,1±1,3	33,6±2,3	Р<0,05 Р<0,01 Р<0,1 Р>0,5

1БРЕГЕННЫЕ ПОРОКИ СЕРДЦА

Изменения функциональной активности лимфоцитов нами выявлены также при сравнительном изучении РБТЛ на лимфоцитарный митоген, ФГА, стафилококковый аллерген в вышеописанных группах.

Как было отмечено выше, у больных ИЭ (62,1% случаев) обнаружены микроорганизмы стафилококковой группы (St.epidermidis, St.aureus), и поэтому в работе был использован для исследований в РБТЛ аллерген золотистого стафилококка. Проведенные исследования выявили значительную сенсибилизацию организма больных ИЭ к антигенам микроорганизмов стафилококковой группы.

Данные пролиферативной активности лимфоцитов в РБТЛ при ИЭ приводятся в табл. 2. Видно угнетение функционального состояния лимфоцитов в РБТЛ на ФГА и лимфоцитарный митоген и скрытая сенсибилизация организма на стафилококковый аллерген, подтверждающего инфекционную природу ИЭ.

О наличии персистирующих антигенов, стимулирующих иммунную систему больных ИЭ, свидетельствует повышение уровня ЦИК в сыворотке крови этих больных.

При сопоставлении полученных данных было выявлено, что среднее значение ЦИК в сыворотке крови больных ИЭ по сравнению с группой доноров в 2,8 раза выше и носит достоверный характер (Р<0,05), а уровень ЦИК у больных с первичной формой ИЭ несколько ниже, чем у больных с вторичной формой ИЭ, хотя эти различия статистически недостоверны (Р>0,05).

Сравнение групп больных с гр.(+) и гр.(-) гемокультурой показало, что уровень ЦИК у больных с гр.(-) гемокультурой на 0,25% выше, чем у больных с гр.(+) гемокультурой, повышение недостоверно (Р>0,05).

Наиболее высокий уровень ЦИК был зарегистрирован у двух больных со стафилококковой инфекцией и у одного больного с синегнойной инфекцией.

Наши исследования показали, что уровень ЦИК при пороках трикуспидального и смешанного поражения клапанов несколько выше (на 0,7%), чем при пороках митрального и аортального клапанов (повышение носит недостоверный характер, Р>0,05). Самый высокий уровень ЦИК наблюдается при пороке трикуспидального клапана (1,13 ±0,13), хотя эта патология встречается в 5 раз реже, чем патология аортального клапана.

Уровни ЦИК у больных ИЭ с вегетациями, вегетациями + перфорации на клапанах и без них практически одинаковы, Р>0,05.

Уровень ЦИК после операции снижается по сравнению с дооперационными показателями на 0,9%, снижение носит недостоверный характер, и уровень ЦИК остается в сыворотке крови повышенным в 2,1 раза по сравнению с контрольной группой.

По результатам исследований можно отметить тенденцию к повышению уровня ЦИК у больных ИЭ, особенно при поражении трикуспидального и смешанного поражения клапанов, а также у больных с гр.(-) гемокультурой, что свидетельствует о длительной антигенной стимуляции в организме больного при персистирующей бактериальной инфекции в эндокарде. Это все позволяет предположить, что персистенция значительных количеств ЦИК, способных поддерживать и усиливать воспалительный процесс, является механизмом, который результи-рует действие врожденных и приобретенных дефектов иммунной системы, а содержание ЦИК в периферической крови отражает особенности динамики иммунного ответа.

Было проведено обследование больных ИЭ на наличие в сыворотке крови циркулирующих противотканевых антител. Аутоантитела к эндокарду обнаружены у 63% обследованных больных ИЭ, из них у 67% больных иммунные комплексы увеличены в 1-1,5 раза по сравнению с нормой. Аутоиммунизация в 80% случаев развивается вследствие дефицита по Т-супрессорам, в результате чего В-клетки начинают реагировать на тканевые антигены, и выработавшиеся аутоантитела приводят к развитию аутоиммунного процесса.

Таким образом, проведенные нами исследования иммунного статуса у больных ИЭ подтверждают наличие активного инфекционного процесса, сопровождающегося значи тельным дисбалансом показателей клеточного и гуморального иммунитета с выраженными изменениями функционального состояния иммунокомпетентных клеток, сопровождающегося развитием аутоиммунного процесса у больных ИЭ.

Выводы

• 1.    У 89,7% больных ИЭ выявлены разной степени нарушения иммунологического статуса.

• 2.    При ИЭ наблюдается дисбаланс факторов гуморального иммунного ответа. В 2,8 раза повышен уровень ЦИК в сыворотке крови больных ИЭ с одновременным повышением содержания IgG, IgA, IgM и СЗ компонента комплемента.

• 3.    На фоне вторичного иммунодефицита была обнаружена сенсибилизация к антигенам стафилококковой группы, проявляющаяся выраженной пролиферативной активностью лимфоцитов в РБТЛ.

• 2.    Окунева Г.Н., Бушманова Г.М., Велътмандер Н.Н., Бредихина И.Ю. Иммунный статус больных хроническим септическим эндокардитом в клинике приобретенных пороков сердца//Тез. науч.-практ. конф. Новосибирск, 1986. С. 17-22.

• 3.    Насонов Е.Л., Буткевич О.М., Виноградова Т.Л., Тимофеева Е.Б., Корешков Г.Г, Сура В.В. Клиническая оценка ЦИК при инфекционном эндокардите//Клиническая медицина. М., 1984. С. 76.

• 4.    Мешалкин Е.Н., Сергиевский В. С., Приходченко И.А., Девятъяров Л.А. Бласттрансформациялимфоцитов в условиях хирургического вмешателъства//Кард1олог1я. 1986. Т.26. №3. С. 104—106.

• 5.    Кондрашова Н.И. Реакция потребления комплемента в новой постановке для выявления противотканевых антител в сыворотке крови//Лабораторное дело. М., 1974. С.9.

• 6.    Николаев А.И. Аспекты общей аутоиммунопатологии. М., 1977. 158 с.