Результаты микробиологического мониторинга поверхности кожи клинически здоровых рептилий, находящихся в условиях неволи

В современных условиях содержания рептилий в неволе неправильный уход за ними приводит к снижению естественной резистентности их организма, что является одной из причин их заболеваемости или бактерионосительства. В ряде случаев именно обычная микрофлора приобретает большое значение в возникновении или развитии болезни. Иногда обычная микрофлора становится источником тех патогенных или условно-патогенных заразных агентов, которые обуславливают эндогенное инфицирование, проявление секундарных инфекций. Однако существуют ситуации, когда многие бактериальные и грибковые агенты вызывают заболевания даже в оптимальных условиях содержания животных [3, 8, 10–12].

Сложившиеся в процессе эволюции микробные биоценозы в разных системах организма животных поддерживают их нормальные физиологические функции и играют определенную роль в иммунитете. Изменения в микробных биоценозах во многих случаях приводят к возникновению патологических процессов в соответствующих органах.

При рассмотрении способов борьбы со многими инфекционными болезнями бактериальной и вирусной этиологии чаще сосредотачивают основное внимание на патогенных микроорганизмах – возбудителях этих заболеваний, реже обращают внимание на сопутствующую микрофлору тела животных [4].

Вопросы здорового бактерионосительства до настоящего времени очень плохо освещены в специальной научной литературе, это касается как сельскохозяйственных, домашних, так и экзотических животных, в том числе рептилий. В современных условиях мегаполисов бактерионосительство у животных, как форма проявления инфекции, недостаточно изучено с позиций потенциальной опасности этого достаточно распространенного явления, как для людей, так и для других животных.

Согласно последним исследованиям установлено, что кожа рептилий чаще всего может быть контаминирована стафилококками, стрептококками, микрококкам, а также палочковидными микроорганизмами, при этом чаще всего встречаются:

• •    грамположительные : Staphylococcus epidermidis, Staphilococcus aureus, Streptococcus, Micrococcuslu-teus, Коринеморфные бактерии, Corinebacterium tuberculostearicum;

• •    грамотрицательные бактерии: Klebsiella, Enterobacter, Proteus spp., Escherichia coli [2].

Степень патогенности и вирулентности этих микроорганизмов на организм, как самих рептилий, так и теплокровных животных и человека, требует уточнения. По той причине животные, которые продаются в зоомагазинах, не подвергаются ветеринарному клиническому и лабораторному исследованию на предмет, как планового обследования, так и скрытого бактерионосительства. В связи с этим, риск инфицирования будущих владельцев такой «экзотики» от своих питомцев может быть потенциально очень высок. В первую группу риска входят дети, имеющие слабый иммунитет и больший по времени контакт с животным. По статистике, которую приводит Elliot Jacobson в свой книге «Infectious diseases and pathology of reptiles», с 1970

по 1971 год в США было зарегистрировано 280000 случаев заражения сальмонеллами у людей, причиной которых являлся контакт людей с черепахами, содержащимися в домашних коллекциях [9].

Целью нашей работы явилось проведение микробиологического мониторинга кожных покровов рептилий, содержащихся в неволе, в частности, в помещении лаборатории кафедры паразитологии и эпизоотологии КрасГАУ и в домашних коллекциях жителей города Красноярска.

Задачами исследования являлось:

• 1.    Проведение бактериологического исследования поверхности кожи клинически здоровых рептилий, находящихся в условиях неволи.

• 2.    Изучение морфологических, культуральных, биохимических и биологических свойств микроорганизмов, контаминирующих организм пресмыкающихся, а также проведение идентификации выделенных микроорганизмов.

• 3.    Определение антибиотикочувствительности выделенных микроорганизмов.

Материалы и методы. Настоящая работа выполнена на базе кафедры эпизоотологии и паразитологии Института прикладной биотехнологии и ветеринарной медицины ФГОУ ВПО КрасГАУ в 2011 году. Работа проводилась в соответствии с планом научно-исследовательской работы и является частью комплексных исследований по эпизоотологическому мониторингу животных по заразным болезням животных в условиях Красноярского края.

Объектом исследований служили рептилии, находящиеся в условиях неволи на кафедре эпизоотологии и паразитологии КрасГАУ, а также в частных коллекциях жителей г. Красноярска:

• 1.    Отряд Чешуйчатые ( Squamata ), подотряд Ящерицы ( Lacertilia ).

• •    Семейство вараны (Varanidae), род Варанус (Varanus), Капский варан ( Varanus exanthematicus ).

• •    Семейство Настоящие ящерицы (lacertidae), Подсемейство ( Lacertinae), род Лесные ящерицы ( Zootoca ), вид Живородящая ящерица ( Zootoca vivipara ).

• 2.    Отряд Черепахи (Testudines), подотряд Скрытошейные черепахи (Cryptodira).

• •    Семейство сухопутные черепахи (Testudinidae), род среднеазиатские черепахи (Agrionemys), вид среднеазиатская черепаха (Agrionemys horsfieldii).

• •    Семейство Американские пресноводные черепахи (Emydidae), род Trachemys, вид Красноухая черепаха (Trachemys scripta).

Предметом для бактериологического метода исследования служили образцы смывов, взятые с кожи рептилий. Исследованию были подвергнуты животные в следующем количестве: красноухая черепаха – 2 головы, варан капский – 1 голова, среднеазиатская черепаха – 8 голов, живородящая ящерица – 1 голова. Средний возраст рептилий 5 лет.

Смывы брались специальным стерильным тупфером с транспортной средой Amies. Бактериологические исследования проводили общепринятыми методами с использованием коммерческих дифференциально-диагностических сред и тест-систем [1].

Идентификацию выделенных культур осуществляли при помощи микроскопических методов исследования и биохимического тестирования бактерий, а также с использованием официальных бактериологических определителей [7]. Выделенные культуры были изучены на чувствительность к антибиотикам разных фармакологических групп. Работа проводилась в соответствии с методикой [5] и практикой определения ан-тибиотикочувствительности микроорганизмов, разработанной компанией HIMEDIA [6] .

Результаты исследования. В процессе бактериологического исследования были выделены разнообразные микробные культуры, которые отличались по культуральным, биохимическим свойствам, а также по биологической активности. Так, культуральные свойства микроорганизмов оценивали по стандартным критериям, характерным для различных видов микроорганизмов, выросших на обычных, специальных и дифференциально-диагностических питательных средах согласно определителю Д. Берджи.

Культуры, выросшие на мясопептонном бульоне (МПБ), оценивались по интенсивности помутнения бульона, характеру поверхностной пленки, наличию осадка и пристеночного кольца. Особенности роста на мясопептонном агаре (МПА) оценивались по характерным свойствам колоний: размеру колонии, форме, цвету, характеру поверхности, рельефу и констистенции колонии. В результате было исследовано в общей сложности 12 проб. Учитывая характер роста, морфологические особенности и тинкториальные свойства, была проведена первичная дифференциация бактерий. Видовой состав микроорганизмов, выделенных с кожи пресмыкающихся животных, представлен в таблице 1.

Таблица 1

Материалы проб	ко о о. с о о	о. 1— q О 5 m	В том числе
			Staphilo-cocus aureus		Staphilo-cocus epedermidis		Streptococcus pyogenes		Escherichia coli		Pseudomonas aer-oginosa		Proteus vulgaris
			Кол-во	%	Кол-во	%	Кол-во	%	Кол-во	%	Кол-во	%	Кол-во	%
Поверхность кожи	12	30	4	13	10	33	4	13	7	2 3	2	7	3	11

Видовой состав микрофлоры поверхности кожи пресмыкающихся

Изучались биохимические свойства выделенных микроорганизмов. Проведя анализ культуральных признаков, а также биохимических свойств, были определены основные виды бактерий с помощью определителя Берджи (табл. 2).

Таблица 2

Биохимические свойства выделенных микроорганизмов

Вид

Ферментизация

Утилизация цитрата

Образование индола

Гидролиз мочевины

Образование Н 2 S

РМК

ФП

ФА

NO 3

глюкт.

лакт.

маннит

сахароза

Esherichia Coli

+

+

+

-

-

+

-

-

+

+

Proteus vulgaris

+

+

+

+

+

+

+

+

+

Pseudomonas aeruginosa

+

Staphiloc-cocos aureus

+

+

+

+

+

Staphylococcus epidermid-is

+

-

+

+

+

Streptococcus piogenes

+

-

-

По результатам исследования установлено, что выделенные микробные культуры с проверхности кожи идентифицированы следующим образом: Staphilococus aureus (13%). Staphilococcus epidermidis (33%), Streptococcus piogenes (13%), Escherichia coli встречается в 23% случаев, Pseudomonas aeruginosa (7%) Proteus в 11% (см. табл. 1).

Для изучения биологической активности, кишечной и синегнойной палочки, протея, выделенных в процессе бактериологического исследования, и подтверждения его результатов была проведена биопроба на белых мышах массой 15–20 г путем их инфицирования кратными дозами по стандарту мутности 18-часовой бульонной культурой в дозе 1 мл3 внутрюбрюшино. Каждой культурой было заражено 3 мыши. В общей сложности было заражено 36 мышей. На второй день был отмечен падеж 6 мышей, зараженных синегнойной палочкой (100%). На четвертый день 3 культуры (42%) кишечной палочки проявили патогенность – пало 9 зараженных мышей. На 6-й день пало еще 2 мыши, зараженные 4-й культурой кишечной палочки (14%). На 10-й день была отмечена гибель одной мыши, зараженной культурой Proteus vulgaris. Гибель больше двух белых мышей свидетельствовала о патогенности культур: 4 культуры Escherichia coli и 2 культуры Pseudomonas aeruginosa являются патогенными штаммами. Патогенность Proteus vulgaris не потвердилась.

В отношении стафилококковых культур были проведены тесты на плазмокоагулирующую и гемолитическую активность. В результате две культуры Staphilococus aureus (50%) и четыре Staphilococus epedermidis (40%) обладали плазмакоагулирующей активностью, образовывали сгусток при смешивании с 0,5 мл плазмы крови кролика и вызывали ß-гемолиз на 5% мясопептонном кровяном агаре, при исследовании на гемолитическую активность. В отношении культур стрептококка был проведен тест на фибринолизин. Для этого культуру микроорганизма высевали на агар с 12% цитрированной плазмы. Посевы инкубировали при температуре 37°С 24 ч. По истечении суток при осмотре только лишь в одной чашке (25%) была отмечена зона просветления вокруг колонии микроорганизма, что подтверждало действие фермента фибринолизина.

Учитывая потенциальную опасность выделенных бактерий для организма рептилий, а также для теплокровных животных, было принято решение о проведении исследования по изучению их чувствительности к антибиотикам. Результаты антибиотикочувствительности выделенных микроорганизмов представлены в таблице 3.

Таблица 3

Результаты исследования на антибиотикочувствительность.

Препарат	Количество проб
	устойчивых	малочувствительных	чувствительных
Цефазолин	4	0	8
Ципрофлаксацин	0	0	12
Гентамицин	0	0	12
Амоксициллин	4	3	5
Сумамед	8	0	4

По результатам анализа было установлено, что наиболее активным препаратом, к которому оказалось чувствительным наибольшее количество бактерий, оказался антибиотик ципрофлоксацин (ДЗЗР>21 мм в 100 %) и гентамицин (ДЗЗР>15 мм в 100%). Картина эффективности остальных препаратов выглядит следующим образом: цефазолин (ДЗЗР>18 мм в 67%), амоксициллин (ДЗЗР>20 мм в 41%). Эффективность су-мамеда оказалась наиболее низкой (ДЗЗР>18 мм в 33%).

Выводы

• 1.    При отсутствии клинических симптомов у рептилий обнаружение синегнойной палочки и золотистого стафилококка свидетельствует о здоровом бактерионосительстве – одной из форм инфекционного процесса, при которой наступает равновесие между микро- и макроорганизмом.

• 2.    Среди потенциально опасных микроорганизмов, контаминирующих поверхность кожи рептилий, наиболее часто выделяются следующие виды бактерий: Staphilococcus epidermidis (33%), Staphilococcus aureus (13%), Streptococcus pyogenes (13%), Escherichia coli (23%), Pseudomonas aeruginosa (7%), Proteus (11%).

• 3.    Высокий процент патогенных культур Staphilococcus aureus (50%), Staphilococcus epidermidis (40%), Streptococcus pyogenes (25%), доказанный путем проведения тестов, и Pseudomonas aeruginosa (100%), Escherichia coli (56%), выявленный методом биологической пробы на лабораторных животных, свидетельствует о том, что теплокровные животные могут быть чувствительны к инфицированию.

• 4.    Наиболее эффективными препаратами выбора для лечения у рептилий заболеваний кожи являются гентамицин (группа аминогликозидов) и ципрофлоксацин (группа фторхинолов). Наименее эффективным препаратом выбора является сумамед (макролиды).