Роль периферического бензодиазепинового рецептора в развитии злокачественных новообразований кожи
Автор: Рукша Т.Г.
Журнал: Сибирский онкологический журнал @siboncoj
Рубрика: Материалы конференции
Статья в выпуске: S2, 2007 года.
Бесплатный доступ
Короткий адрес: https://sciup.org/14054809
IDR: 14054809
Текст статьи Роль периферического бензодиазепинового рецептора в развитии злокачественных новообразований кожи
Материал и методы. Больные с базальноклеточным раком (n=139), плоскоклеточным раком кожи (n=31), меланомой кожи (n=34), здоровые добровольцы (n=14), клеточные линии: клетки плоскоклеточного рака кожи (А431), меланомы кожи (SK-MEL-2), нормальные кера-тиноциты человека (NHEK), нормальные меланоциты (НЕМ). Биоптаты кожи фиксировались в 10% нейтральном формалине с последующей заливкой в парафин. Иммуногистохимическое исследование с антителами к ПБР проводилось согласно стандартным протоколам, с использованием системы детекции Ready-to-Use (Novoc-astra) и диаминобензидина в качестве хромогена (BD). Определялось число ПБР+ клеток на 100 клеток эпидермиса в нормальной коже и количество ПБР+ клеток на 100 опухолевых клеток при злокачественных новообразованиях кожи. Иммуноцитохимическое исследование выполнялось с антителами к ПБР (Trevigen) и вторичными антителами, меченными FITC (Zymed Laboratories, Inc.).
Нормальные кератиноциты, нормальные меланоциты, клетки плоскоклеточного рака кожи и меланомы кожи облучались с помощью источника ультрафиолетового излучения с максимумом длины волны 302 нм (модель UVM-57 (San Gabriel) с фильтором Kodacel (Eastman Kodak Co.). Уровень экспрессии ПБР определялся с помощью иммуноблоттинга. Время облучения 30 с соответствовало дозе 120 Дж/мІ, 60 с – 240 Дж/мІ, 90 с – 360 Дж/мІ, 120 с – 480 Дж/мІ. Для подтверждения идентичного содержания белка в каждом образце при проведении электрофореза в дальнейшем мембраны реинкубировались с антителами к GAPDH (глицеральдегидфосфат-дегидрогеназа) (1:10000, Trevigen Inc.).
Результаты. Было определено достоверное снижение экспрессии ПБР при всех исследуемых типах злокачественных новообразований по сравнению с нормальной кожей, регистрируемое как снижение числа ПБР+ клеток при базально-клеточной карциноме и меланоме кожи и как снижение интенсивности окраски ПБР+ клеток при плоскоклеточном раке кожи. В эксперименте на культурах клеток в малигнизированных кератиноцитах и меланоцитах при иммуноцитохимическом исследовании определялось достоверное снижение числа ПБР+ клеток по сравнению с нормальными кератиноцитами и меланоцитами.
При иммуноблоттинге было определено преобладание полимерных форм рецептора в клетках плоскоклеточного рака кожи по сравнению с нормальными кератиноцитами. Воздействие ультрафиолетовым излучением вызывало разнонаправленный эффект в нормальных и малигнизированных кератиноцитах: облучение в дозе 480Дж/м2 индуцировало снижение экспрессии ПБР в нормальных кератиноцитах и увеличение экспрессии рецептора в клетках плоскоклеточ- ного рака кожи. В клетках меланомы кожи ПБР с помощью иммуноблоттинга выявлялся в виде мономера и полимеров с молекулярным весом 36 кДа, 54 кДа и 90 кДа. При ультрафиолетовом облучении в дозе 120Дж/мІ происходило исчезновение мономера ПБР, но появлялись полимеры рецептора с молекулярным весом 54 кДа и 90 кДа. Помимо этого, происходило увеличение уровня димера ПБР. Ультрафиолетовое облучение в дозе 240Дж/мІ также вызывало исчезновение мономера ПБР и увеличение уровня димера ПБР. Повышение дозы ультрафиолетового облучения до 480Дж/мІ вело к появлению мономера ПБР, снижению уровня димера и исчезновению полимеров рецептора с молекулярным весом 54 кДа и 90 кДа. Изменение соотношения мономер: полимеры ПБР напрямую коррелировало с интенсивностью клеточной пролиферации в клетках меланомы, определяемое по уровню включения бромодезоксиуридина, а также по уровню экспрессии PCNA.
Выводы. Проведенное исследование позволяет резюмировать, что при злокачественных новообразованиях кожи происходит изменение уровня экспрессии ПБР в коже. Ультрафиолетовое излучение вызывает ПБР-опосредованное изменение уровня клеточной пролиферации в клетках кожи.