Слеза как источник иммунных биомаркеров при лимфомах слезной железы

Лимфомы придаточного аппарата глаза составляют примерно 8% экстранодальных лимфом, а на долю поражения слезной железы приходится 7–26%. Лимфома слезной железы (ЛСЖ) преимущественно встречается у пожилых пациентов, чаще у женщин. При данной локализации преобладает В-клеточная природа процесса, а наиболее частым подтипом является MALT-лимфома – медленно прогрессирующее новообразование, развивающееся из мукозоассо-циированной лимфоидной ткани, которая накапливается в результате хронического воспаления, длительной антигенной стимуляции и/или аутоиммунных механизмов. Более редкими подтипами являются фолликулярная лимфома, лимфома маргинальной зоны и диффузная В-крупнокле-точная лимфома [1–3]. Диагностика ЛСЖ затруднена из-за клинической и лучевой мимикрии: хронический дакриоаденит, идиопатическое воспаление и ряд эпителиальных опухолей могут иметь схожую симптоматику и частично совпадающие признаки по данным визуализирующих методов исследования. На этом фоне изучение локальных медиаторов иммунного ответа в слезной жидкости (СЖ) приобретает прикладную значимость. СЖ доступна для неинвазивного стандартизированного забора и находится в непосредственной близости от зоны поражения, что позволяет рассматривать ее как матрицу для оценки микросреды опухоли в формате «жидкостной биопсии» глаза.

Цель исследования – изучить профиль 7 ключевых цитокинов (IL-6, TNF- α , IL-2, IFN- γ , IL-17A, IL-4 и IL-10) в СЖ пациентов с ЛСЖ и оценить их диагностическую информативность.

Материал и методы

Группу патологии составили 8 пациентов с гистологически верифицированной ЛСЖ. Средний возраст составил 56,5 ± 10,6 лет (39–70), преобладали женщины (75%). По данным клинико-инструментального обследования у 2 пациентов (25%) выявлен двусторонний процесс, у 1 (12,5%) – генерализованное поражение. В 5 случаях диагностирована MALT-лимфома, в остальных – фолликулярная лимфома (n = 2) и мантийноклеточная лимфома (n = 1). Группу контроля составили 10 здоровых добровольцев. Все пациенты прошли комплексное офтальмологическое обследование с оценкой орбитального статуса и осмотром на предмет поражения регионарных лимфатических узлов. Из визуализирующих методов применяли компьютерную томографию и комплексное ультразвуковое исследование орбит. Для минимизации физиологических суточных колебаний уровней цитокинов забор СЖ проводили в утренние часы на этапе предоперационной подготовки, до какого-либо офтальмологического вмешательства и инстилляций лекарственных средств. СЖ получали из обоих глаз пациентов с ЛСЖ и из одного глаза здоровых добровольцев в объеме не менее 50 мкл с использованием спринцовки со стерильным наконечником. До проведения исследований пробы хранились при температуре – 70°C. Всем пациентам впоследствии выполнена орбитотомия. Всего в иммунологические исследования включены 26 проб СЖ. Определение качественного и количественного содержания цитокинов выполняли методом проточной цитофлу-ориметрии на BD FACSCanto II (Becton Dickinson, США) с использованием набора IFN- γ /IL-2/IL-4/IL-6/IL-10/IL-17A/TNF α Multiplex Detection Kits (Immunofluorescence Luminescence, Китай) согласно инструкции производителя. Первичную обработку данных проводили в программе FACSDiva, расчет концентраций по калибровочным кривым – в FlowCytomix Pro 2.3. Качественные данные представлены в процентах, количественные – в виде медианы и диапазона. Для сравнения групп применяли непараметрические критерии Манна-Уитни, Уилкоксона, Крускала-Уоллиса ( χ ²) и их значимость. Статистическая значимость принималась при p<0,05.

Результаты и обсуждение

Нами выявлено, при ЛСЖ в СЖ пораженного глаза отмечается рост частоты выявления всех исследованных цитокинов по сравнению с контролем, при этом для IL-6, IL-2 и IL-17A частота достигает 100%. На контралатеральной, клинически здоровой стороне, увеличивается лишь частота выявления IL-6 и IFN- γ , а для IL-17A наблюдается умеренный прирост. Примечательно, что в группе контроля IFN- γ не определялся вовсе, тогда как при ЛСЖ его детекция составила 60%, а на противоположной стороне – 30% (Таблица 1).

По уровням цитокинов отмечено повышение всех исследованных показателей в СЖ пораженного глаза по сравнению с контролем. На контралатеральной стороне

Табл. 1. Частота выявления и концентрация цитокинов, определяемых в СЖ при ЛСЖ по сравнению с контрольной группой

Примечание : *– статистически значимые значения (p<0,05), ** (б) – сторона патологии, *** (з) – здоровая сторона.

наибольший прирост относительно контроля продемонстрировал IL-6, тогда как изменения остальных маркеров были минимальными. Статистический анализ выявил значимые различия между группой ЛСЖ и контролем для всех цитокинов на стороне патологии, а также между пораженной и здоровой сторонами для IL-6, TNF- α , IL-2 и IL-4 (p<0,05).

Полученные данные отражают локальную активацию воспалительных и иммунорегуляторных путей в СЖ при ЛСЖ. Вероятными источниками цитокинов являются опухолевые В-клетки и реактивные иммунные клетки микросреды, активируемые хронической антигенной стимуляцией с вовлечением путей NF-kB/JAK-STAT [4]. Инфильтрация слезной железы нарушает функцию ацинарно-протокового эпителия и микрососудов, усиливая транзит медиаторов в СЖ и поддерживая воспалительноангиогенный контур.

Исследование цитокинового профиля приобретает все большее значение как инструмент персонализированной онкологии. Определение уровней ключевых про-воспалительных и иммуномодулирующих молекул в СЖ

пациента может позволить более точно охарактеризовать биологические свойства опухоли, выявить прогностически значимые иммунные сигнатуры, а также предсказать эффективность проведения иммунотерапии, включая ингибиторы контрольных точек, препараты на основе Т-клеток и антицитокиновую терапию [5]. В литературе встречается ряд исследований, посвященных изучению цитокинового профиля в СЖ, но меньшая часть из них посвящена диагностике офтальмопатологии, а также воспалительным и аутоиммунным заболеваниям орбиты. Так, в исследовании, посвященном изучению пациентов с увеальной меланомой, отмечено повышение концентраций 12 провоспалительных цитокинов, среди которых IL-6, IL-17A и TNF- α играли ведущую роль. Кроме того, зафиксировано увеличение уровней VEGF-A и SDF-1 α , что свидетельствует об активации ангиогенеза и ремоделирования сосудистой сети в условиях опухолевого воспаления [6]. В исследовании, посвященном анализу цитокинового профиля СЖ пациентов с В-клеточной лимфомой придаточного аппарата глаза из экстрано-дальной маргинальной зоны (включая лимфому конъюнктивы и слезной железы), выявлено значительное повышение концентраций таких цитокинов, как IL-1RA и IL-8. Кроме того, установлена положительная корреляция между уровнем IL-8 и поражением слезной железы [7]. В работе Ang T. и соавт., посвященной анализу цитоки-нового профиля СЖ при воспалительных заболеваниях орбиты (включая неспецифическое воспаление орбиты, IgG4-ассоциированное заболевание, гранулематоз с полиангиитом, а также вирусный и бактериальный дакриоадениты и др.), IL-6 был выделен как чувствительный маркер локального воспаления, особенно при дакриоадените [8]. Дополнительные данные получены при исследовании пациентов с эндокринной офтальмопатией: уровни IL-1 β , IL-6 и IL-17A в СЖ увеличивались по мере увеличения шкалы клинической активности (CAS,) что указывает на возможность использования этих цитокинов в качестве маркеров активности заболевания [9].

Заключение

Таким образом, СЖ может рассматриваться как перспективный источник неинвазивных биомаркеров в диагностике ЛСЖ. Определение цитокинового профиля СЖ на этапе предоперационного обследования пациентов может повысить диагностическую точность, улучшить стратификацию риска и способствовать индивидуализации подходов к лечению.