Состав углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов у пациентов, оперированных на травмированной селезенки в отдаленном послеоперационном периоде

Введение. Селезенка не относится к жизненоважным органам, однако ей принадлежит ряд важных функций. Одна из таких функций – участие в процессе кроветворения [1]. Однако при ее травматических повреждениях хирурги вынуждены прибегать чаще всего к спленэктомии, реже к аутолиентрансплантации и органосохраняющим операциям. Установлено, что удаление селезенки приводит к измениям тромбоцитов в периферической крови как в ближайшем, так и в отдаленном послеоперационном периоде, проявляющимся развитием тромбоцитоза [3]. Вместе с тем изучению изменениям состава углеводного компонента гли- копротеиновых рецепторов тромбоцитов в зависимости от выполненной операции на травмированной селезенки в доступной литературе уделяется мало внимания.

Цель исследования – изучить изменения состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов у пациентов после спленэктомии, аутолиентрансплантации и органосохраняющих операций в отдаленном послеоперационном периоде.

Материалы и методы. Изменения состава углеводного компонента гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов проведено у 126 человек, перенесших операции на травмированной селезенке в сроки больше одного года. Из них 26 обследованных после органосохраняющих операций с применением лазерной техники, 46 – после аутолиентрансплантации, 54 – спленэктомии. Группу сравнения составили 50 относительно здоровых людей того же возраста и пола.

Агрегацию тромбоцитов определяли с использованием стандартного тубодидометриче-ского метода, с использованием двухканального лазерного анализатора агрегации тромбоцитов 230 LA «BIOLA» по Габбасову З.А. и соавт. [2], при помощи IBM – совместимого компьютера и специальной MS Windows – совместимой программы «Аддг» (НПФ «Биола», Россия). Индукторами агрегации отмытых тромбоцитов были растительные лектины: конкана-валин А (Соn А), который обладает сродством к следующим моносахаридам: D-маннозе, глюкозе, N-ацетил-D-глюкозамину. Лектин зародышей пшеницы (WGA) связывает N-ацетил-D-глюкозамины и N-ацетилнейраминовые кислоты и лектин семян фасоли обыкновенной (РНА-Р), который взаимодействует почти со всеми гликопротеинами, поэтому его можно считать общим реагентом на гликопротеины, хотя преимущественно связывается с участками, содержащими bD-галактозу (фирма «Лектинотест», Украина).

Агрегацию тромбоцитов исследовали при стандартных условиях термостатирования 37 ºС и скорости перемешивания магнитной мешалки 800 об/мин. Индуктор добавлялся на 30-й секунде от начала исследования. Длительность регистрации процесса агрегации тромбоцитов составляла 15 мин.

С помощью IBM-совместимого компьютера и специализированной MS-Windows-совместимой программы производилась запись кривых, отражающих процесс индуцируемой различными лектинами агрегации, – агрегатограмма, которая и подвергалась последующему анализу.

За начальный уровень агрегации (0 %) принималось светопропускание обедненной тромбоцитами плазмы. Калибровка прибора проводилась заново для каждого образца крови.

Специализированная MS-Windows-совместимая программа «Aддг» (НПФ «Биола», Россия) позволяла определять две группы показателей:

• а)    характеризующие изменение светопропускания ОТП (собственно агрегацию):

• -    спонтанная агрегация тромбоцитов (среднеарифметическое от значений степени агрегации тромбоцитов на отметках 10 и 20 с), (%);

• -    максимальная степень агрегации (%);

• -    максимальное время агрегации (с);

• -    максимальная скорость агрегации (у. е.);

• -    начальная скорость агрегации (у. е.);

• б)    характеризующие изменение среднего размера тромбоцитарных агрегатов:

• -    спонтанная агрегация тромбоцитов (среднеарифметическое от значения степени агрегации тромбоцитов на отметках 10 и 20 с) (%);

• -    максимальный радиус тромбоцитарных агрегатов (%);

• -    время достижения максимального радиуса (с);

• -    максимальная скорость агрегации (у. е.).

Статистическая обработка полученных данных проводилась при помощи непараметрического метода U-критерия теста Mann-Whitney (пакет программ Statistica 6.0).

Результаты и их обсуждение. В результате проведенного исследования агрегационной активности тромбоцитов у пациентов после ОСО в отдаленном послеоперационном периоде установлено, что изменений в показателях, характеризующих агрегацию тромбоцитов, не происходит, так как они не отличаются от данных, полученных в группе практически здоровых людей. Следовательно, сохранение селезенки не влияет на агрегационную способность тромбоцитов, что предотвращает развитие такого грозного осложнения, как тромбоэмболия.

Результаты изучения функциональной активности гликопротетеновых мембран тромбоцитов, индуцированных РНА-Р в дозе 32 мкг/мл, полученные в группе пациентов после ОСО на селезенке, представлены в табл. 1.

Таблица 1

Показатели агрегации тромбоцитов индуцированных РНА-Р у больных после органосохраняющих операций на поврежденной селезенке ( М ± m )

Показатель	Результаты в группах		p *
	сравнения ( n = 50)	после органосохраняющих операций ( n = 26)
Максимальная степень агрегации, %	33,5±1,22	33,6±0,02	>0,05
Время достижения максимальной степени агрегации, с	254,2±11,8	254,4±0,01	>0,05
Максимальная скорость агрегации, %/мин	28,2±1,19	28,6±0,01	>0,05
Время достижения максимальной скорости агрегации, с	50,8±2,1	50,6±0,02	>0,05

*Примечание: здесь и далее p – по отношению к группе сравнения.

Из данных, представленных в табл. 1, видно, что у пациентов после ОСО на селезенке фитогемагглютинин Р (РНА-Р) в дозе 32 мкг/мл индуцирует гликопротеиновые рецепторы bD-галактозы так же, как и у здоровых людей, о чем свидетельствует отсутствие статистически значимой разницы в таких показателях агрегатограммы, как максимальная степень агрегации и время достижения максимальной степени агрегации, максимальная скорость агрегации и время достижения максимальной скорости агрегации. Все изучаемые показатели в группе пациентов после ОСО не отличались от данных, полученных в группе практически здоровых людей.

Результаты изучения гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов, индуцированных агглютинином WGA в группе пациентов после ОСО, представлены в табл. 2.

Таблица 2

Показатели агрегации тромбоцитов индуцированных WGA у больных после органосохраняющих операций на поврежденной селезенке ( М ± m )

Показатель	Результаты в группах		p *
	сравнения ( n = 50)	после органосохраняющих операций ( n = 26)
Максимальная степень агрегации, %	12,26±1,15	12,24±0,02	> 0,05
Время достижения максимальной степени агрегации, с	130,4±11,4	129,3±0,03	> 0,05
Максимальная скорость агрегации, %/мин	7,02±0,65	6,03±0,04	> 0,05
Время достижения максимальной скорости агрегации, с	46,6±1,2	45,9±0,01	> 0,05

Результаты изучения гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов, содержащих N-гликаны, представлены в табл. 3.

Таблица 3

Показатели агрегации тромбоцитов индуцированных ConA у больных после органосохраняющих операций на поврежденной селезенке ( М ± m )

Показатель	Результаты в группах		p *
	сравнения ( n = 50)	после органосохраняющих операций ( n = 26)
Максимальная степень агрегации, %	7,2±0,23	7,4±0,02	> 0,05
Время достижения максимальной степени агрегации, с	150,3±24,1	149±0,03	> 0,05
Максимальная скорость агрегации, %/мин	4,22±0,14	4±0,04	> 0,05
Время достижения максимальной скорости агрегации, с	44,8±7,1	45,9±0,01	> 0,05

Как видно из данных табл. 3, у пациентов после ОСО в отдаленном послеоперационном периоде не отмечается изменений гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов, содержащих N-гликаны, так как полученные результаты агрегатограммы в основной группе не отличались от данных, полученных у относительно здоровых людей из группы сравнения.

Отсюда следует, что в полученных результатах у пациентов после ОСО, выполненных на поврежденной селезенке, не отмечается изменений гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов. Полученные результаты соответствовали данным гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов относительно здоровых людей, полученным в группе сравнения. Следовательно, выполнение ОСО при травме селезенки не ведет к изменению агрегационных функций тромбоцитов и такие пациенты не входят в группу по тромбоопасным осложнениям.

При изучении функциональной активности тромбоцитов, индуцированных различными лектинами, в группе пациентов после аутолиентрансплантации в отдаленном послеоперационном периоде показывают, что в результате индукции лектином РНА-Р существенно не отличались от данных группы сравнения. Так, максимальная степень агрегации в основной группе составила 35,3 ± 0,1 %, в группе сравнения – 35,5 ± 1,22 % (p > 0,05); время достижения максимальной степени агрегации в основной группе 254,1 ± 0,3 с, в группе сравнения – 254,2 ± 11,8 с; максимальная скорость агрегации в основной группе составила 27,3 ± 0,1 % мин, в группе сравнения – 28,2 ± 1,19 % мин; время достижения максимальной скорости агрегации у пациентов после аутолиентрансплантации 50,6 ± 0,1 с, в группе сравнения – 50,8 ± 2,1 с. Из представленных данных можно сделать заключение, что аутолиентрансплантация не оказывает влияния на изменения участков гликопротеиновых рецепторов, несущих b-D-галактозу.

При изучении гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов, индуцированных агглютинином WGA у пациентов этой группы, установлено, что отмечается умеренное, но статистически достоверное увеличение всех показателей (табл. 4).

Из представленных в табл. 4 данных можно сделать вывод, что отмечается увеличение агрегационной активности тромбоцитов. Причем это увеличение происходит за счет гликопротеиновых рецепторов, несущих N-ацетил-D-глюкозамины, и N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты.

Результаты исследования агрегации тромбоцитов, индуцированных Con A, у пациентов анализируемой группы и результаты, полученные в основной группе, практически не отличались от данных группы сравнения. Отсюда следует, что применение аутолиентранспланта- 16

ции в отдаленном послеоперационном периоде не вызывает изменений в гликопротеиновых рецепторах мембран тромбоцитов, содержащих N-гликаны.

Таблица 4

Показатели агрегации тромбоцитов индуцированных WGA у больных после аутолиентрансплантации ( М ± m )

Показатель	Результаты в группах		p
	сравнения ( n = 50)	после аутолиентрансплан-тации ( n = 46)
Максимальная степень агрегации, %	12,26±1,15	14,28±0,02	< 0,05
Время достижения максимальной степени агрегации, с	130,4±11,4	132,5±0,03	< 0,05
Максимальная скорость агрегации, %/мин	7,02±0,65	8,23±0,04	< 0,05
Время достижения максимальной скорости агрегации, с	46,6±1,2	47,9±0,01	< 0,05

Таким образом, наши исследования показывают, что применение аутолиентранспланта-ции у пациентов, оперированных на поврежденной селезенке, частично предотвращает изменения в агрегационной активности тромбоцитов. В то же время у пациентов этой группы зарегистрировано повышение агрегационной активности тромбоцитов, причем это увеличение происходит за счет гликопротеиновых рецепторов, несущих N-ацетил-D-глюкозамины, и N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты.

Результаты изучения функциональной активности гликопротеиновых рецепторов b-D-галактозы тромбоцитов, которые индуцируются РНА-Р в дозе 32 мкг/мл после спленэктомии, представлены в табл. 5.

Таблица 5

Показатели агрегации тромбоцитов индуцированных РНА-Р у больных после спленэктомии по поводу поврежденной селезенки ( М ± m )

Показатель	Результаты в группах		p
	сравнения ( n = 50)	после спленэктомии ( n = 46)
Максимальная степень агрегации, %	33,5±1,22	37,6±0,02	< 0,05
Время достижения максимальной степени агрегации, с	254,2±11,8	278,4±0,01	< 0,05
Максимальная скорость агрегации, %/мин	28,2±1,19	36,6±0,01	< 0,05
Время достижения максимальной скорости агрегации, с	50,8±2,1	67,6±0,02	< 0,05

Из данных табл. 5 видно, что у пациентов после спленэктомии, выполненной по поводу травмы селезенки, фитогемагглютинин Р (РНА-Р) в дозе 32 мкг/мл значительно индуцирует гликопротеиновые рецепторы b-D-галактозы. Это подтверждается статистически достоверной разницей в таких показателях агрегатограммы, как максимальная степень агрегации и время достижения максимальной степени агрегации, максимальная скорость агрегации и время достижения максимальной скорости агрегации, по сравнению с данными, полученными у практически здоровых людей из группы сравнения.

Наряду с РНА-индуцированной агрегацией у больных после спленэктомии усилена также агрегация, вызванная лектином зародышей пшеницы WGA (табл. 6). Так, у пациентов этой группы зарегистрировано статистически достоверное увеличение максимальной степени агрегации (p < 0,05) и максимальной скорости образования наибольших тромбоцитарных агрегатов (p < 0,05), времени достижения максимальной степени агрегации (p < 0,05) и максимальной скорости образования наибольших тромбоцитарных агрегатов (p < 0,05). Это связано с увеличением содержания в гликопротеиновых рецепторах мембран кровяных пластинок N-ацетил-Д-глюкозамина и N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты.

Таблица 6

Показатели агрегации тромбоцитов индуцированных WGA у больных после спленэктомии по поводу поврежденной селезенке ( М ± m )

Показатель	Результаты в группах		p
	сравнения ( n = 50)	после спленэктомии ( n = 46)
Максимальная степень агрегации, %	12,26±1,15	15,14±0,02	< 0,05
Время достижения максимальной степени агрегации, с	130,4±11,4	143,2±0,03	< 0,05
Максимальная скорость агрегации, % мин	7,02±0,65	9,08±0,04	< 0,05
Время достижения максимальной скорости агрегации, с	46,6±1,2	49,2±0,01	< 0,05

Результаты изучения агрегационной активности тромбоцитов индуцированных Con А у пациентов после спленэктомии в отдаленном послеоперационном периоде представлены в табл. 7.

Как видно из данных, приведенных в табл 7, индуцированная агрегация тромбоцитов лектином Con А у пациентов после спленэктомии в отдаленном послеоперационном периоде усилена по сравнению с группой практически здоровых лиц. При этом происходит статистически достоверное увеличение показателей, характеризующих динамическую функцию тромбоцитов: максимальной степени агрегации (p < 0,05) и максимальной скорости образования наибольших тромбоцитарных агрегатов (p < 0,05). В то же время показатели, отражающие кинетическую функцию кровяных пластинок – время достижения максимальной степени агрегации и максимальной скорости образования, наибольших тромбоцитарных агрегатов – статистически достоверно не отличаются от данных группы сравнения (p > 0,05).

Таблица 7

Показатели агрегации тромбоцитов индуцированных ConA у больных после спленэктомии на поврежденной селезенке ( М ± m )

Показатель	Результаты в группах		p
	сравнения ( n = 50)	после спленэктомии ( n = 54)
Максимальная степень агрегации, %	7,2±0,23	9,3±0,02	< 0,05
Время достижения максимальной степени агрегации, с	150,3 ±24,1	170,2 ±0,03	< 0,05
Максимальная скорость агрегации, %/мин	4,22 ±0,14	4 ±0,04	> 0,05
Время достижения максимальной скорости агрегации, с	44,8 ±7,1	45,9 ±0,01	> 0,05

Представленные данные свидетельствуют о том, что усиление агрегации тромбоцитов связано с увеличением содержания гликопротеиновых рецепторов маннозы.

Таким образом, при проведении анализа выявлено, что показатели гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов у пациентов после органосохраняющих операций при травме селезенки в отдаленном послеоперационном периоде не влияют на изменения гликопротеиновых рецепторов мембран тромбоцитов. У пациентов после аутолиентрансплантации не выявлено изменений в гликопротеиновых рецепторах мембран тромбоцитов, содержащих b-D-галактозу, N-гликаны. В то же время зарегистрировано увеличение агрегационной активности за счет гликопротеиновых рецепторов, несущих N-ацетил-D-глюкозамины, и N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты. В группе пациентов после спленэктомии зарегистрировано увеличение агрегационной активности тромбоцитов гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов, несущих рецепторы b-D-галактозы, N-ацетил-Д-глюкозамина и N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислоты, а также усиление агрегации тромбоцитов, связанных с увеличением содержания в них гликопротеиновых рецепторов маннозы.