Состояние антиагрегационного контроля сосудистой стенки над нейтрофилами у больных артериальной гипертонией с дислипидемией, получавших симвастатин

Медведев Илья Николаевич	д.м.н., профессор, заведующий кафедрой адаптивной физической культуры и медико-биологических наук Курского института социального образования (филиал) Российского государственного социального университета 305035, г. Курск, ул. Пирогова, 12 б Тел. 8-910-273-22-63 E-mail: ilmedv1@yandex.ru
Скорятина Ирина Александровна	к.м.н., врач-терапевт ОГУЗ «Областной клинический противотуберкулезный диспансер города Курска» 305003, г. Курск, ул. Мичурина, 89 Тел. 8-910-273-22-63 E-mail: zsyu@046.ru

Не смотря на успехи медицинской науки артериальная гипертония (АГ) по-прежнему является одним из распространенных заболеваний и в последние годы достаточно часто сочетается с дислипидемией (Д), которая отрицательно влияет на тонус периферических сосудов, способствует ускоренному развитию атеросклероза, значительно увеличивая риск развития острого инфаркта миокарда и острого нарушения мозгового кровообращения [1]. Вместе с тем, при ведении этих больных, как правило, отсутствует учет динамики агрегационной способности различных клеток крови, в т.ч. нейтрофильных лейкоцитов, что не позволяет в полной мере контролировать эффективность проводимого лечения в плане снижения риска сосудистых катастроф [2,3].

В современной медицинской практике при АГ и Д считаются наиболее показанными высоко эффективные гиполипидемические средства (статины), снижающие смертность, повышающие качество жизни и улучшающие общий прогноз [1]. При этом до сих пор не оценивалось воздействие отдельных статинов, в т.ч. симвастатина на сосудистый контроль над агрегацией нейтрофилов. Сформулирована цель работы – установить ак- тивность ограничивающего воздействия стенки сосудов на агрегационную способность нейтрофилов у больных АГ с Д.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

В работу включены 34 человека с АГ 1-2 степени и Д II б типа, риск 4 (критерии ДАГ3 (2008) [4], среднего возраста. Группу контроля составили 26 здоровых людей аналогичного возраста. Содержание общего холестерина (ХС) и триглицеридов (ТГ) оценивали энзиматическим колориметрическим методом набором фирмы «Витал Диагно-стикум». ХС липопротеидов высокой плотности (ЛПВП) определяли набором фирмы «Ольвекс Диагностикум» энзиматическим колориметрическим методом. Общие липиды (ОЛ) оценивали набором фирмы «Лахема». Общие фосфолипиды (ОФЛ) сыворотки крови оценивали по содержанию в них фосфора [5], с последующим установлением соотношения в плазме ОХС/ОФЛ. Уровни ХС липопротеидов низкой плотности (ЛПНП) рассчитывали по формуле (W. Friedwald et al., 1972) [6]. Содержание ХС липопротеидов очень низкой плотности (ЛПОНП) устанавливали по формуле

(содержание ТГ/2,2). Полученные показатели общего ХС и ХС ЛПНП рассматривали как нормальные, пограничные или высокие в соответствии с Российскими рекомендациями [1]. Коэффициент атерогенности рассчитывался по формуле ХС ЛПНП/ХС ЛПВП. Типирование Д производилось по классификации D.Fredrickson и соавт. (1967) [7] с дополнениями комитета экспертов ВОЗ. Определяли активность перекисного окисления липидов (ПОЛ) в плазме по содержанию тиобар-битуровой кислоты (ТБК)-активных продуктов набором фирмы «Агат-Мед» и ацилгидроперекисей (АГП) [8]. Антиокислительный потенциал жидкой части крови определяли по Волчегорскому И. А. и соавт. (2000) [9].

Уровень холестерола в отмытых и ресуспенди-рованных нейтрофилах количественно определялся энзиматическим колориметрическим методом набором «Витал Диагностикум» и ОФЛ по содержанию фосфора [5] с расчетом ХС/ОФЛ.

Уровень ПОЛ внутри лейкоцитов определяли в отмытых и ресуспендированных нейтрофилах [10] по концентрации малонового диальдегида (МДА) в реакции восстановления тиобарбитуро-вой кислоты и по содержанию АГП [8]. Активность внутрилейкоцитарных антиоксидантных ферментов устанавливали для каталазы и супероксид-дисмутазы (СОД) [11].

Выраженность агрегации нейтрофилов определяли на фотоэлектроколориметре [12] в суспензии отмытых нейтрофилов, ресуспендированных в плазме, полученной без наложения манжетки и с нею, для выяснения степени торможения агрегации нейтрофилов со всеми использованными индукторами по В.П. Балуда и соавт. (1987) [13]. В качестве индукторов агрегации использовали лектин зародышей пшеницы в дозе 32 мкг/мл, конканавалин А – 32 мкг/мл и фитогемагглютинин – 32 мкг/мл. Рассчитывался индекс торможения сосудистой стенкой агрегации нейтрофилов (ИТ-ССАН) путем деления величины агрегации нейтрофилов без манжетки на ее величину при ее наложении.

Применялся симвастатин 10 мг на ночь в сочетании с эналаприлом 10 мг 2 раза в сутки. Оценка состояния больных проводилась перед началом лечения, через 4, 16, 52 и 104 недели терапии. Статистическая обработка результатов проведена t-критерием Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

У больных уровни ОЛ и ОХ составляли 9,3±0,14г/л и 6,2±0,06 ммоль/л, соответственно, при снижении ОФЛ плазмы до 1,53±0,05 ммоль/л, что обусловило рост отношения ОХС/ОФЛ почти в 3 раза. У пациентов, в исходном состоянии, атерогенные фракции холестерина – ХС ЛПНП и ХС ЛПОНП были достоверно повышены (3,82±0,04 ммоль/л и 1,31±0,07 ммоль/л, соответственно) с увеличением в крови в 1,7 раза уровня ТГ по сравнению с контрольным уровнем. При этом ХС ЛПВП оказался снижен на 49,5%. Имеющийся у больных липидный дисбаланс способствовал повышению коэффициента атерогенности плазмы в 2,3 раза. У пациентов выявлена активация ПОЛ плазмы: содержание в ней АГП оказалось в 2,3 раза выше, чем у лиц контрольной группы, а уровень ТБК-активных продуктов у них превышал контрольные значения в 1,4 раза. При этом, антиоксидантный потенциал плазмы составлял всего 22,8±0,10%, уступая контролю в 1,4 раза (табл. 1).

Количество холестерина в мембранах нейтрофилов пациентов превышало таковое в контроле на 35,4% при снижении ОФЛ до 0,37±0,003 мкмоль/109 ней., что обеспечило в них рост отношения ХС/ОФЛ в 1,9 раза (табл. 2). Уровень каталазы в нейтрофилах у больных был ниже контроля в 1,9 раза с одновременным ослаблением активности СОД нейтрофилов в 1,4 раза, что создавало условия для поддержания высокого ПОЛ в их структурах. Так, уровень АГП в нейтрофилах у наблюдаемых больных оказался повышен в 1,5 раза при нарастании в них МДА в 2 раза.

В исходном состоянии выраженность агрегации нейтрофилов у больных в плазме после временной венозной окклюзии была ускорена со всеми индукторами (с лектином на 83,9%, с кон-канавалином А на 56,3%, с фитогемагглютинином на 63,4%). Это обусловило снижение ИТССАН по сравнению с контролем для лектина на 14,8%, для конканавалина А на 19,6%, для фитогемагглютинина на 17,6% (табл. 3).

В ходе применения симвастатина у всех больных наблюдалась положительная динамика всех учитываемых показателей, углубляющаяся по мере его продолжения.

Уже в результате 4-х недельной терапии у больных достигнуто некоторое снижение выраженности Д, повышение АОА и уменьшение АГП и ТБК-продуктов плазмы. Полученные позитивные изменения данных показателей углублялись к 16 нед. лечения. Дальнейшая терапия обеспечила нормализацию липидного состава плазмы крови больных к 52 нед. наблюдения. К концу наблюдения достоверно усилился антиокислительный потенциал плазмы (32,8±0,10%), что вызвало дополнительное снижение уровня пероксидации липидов в жидкой части крови. Концентрация АГП плазмы больных в эти сроки применения

Таблица 1. Липидный спектр и ПОЛ плазмы крови больных на фоне лечения симвастатином

Параметры	Симвастатин, n=34, М±m					Контроль,
	исход	4 нед.	16 нед.	52 нед.	104 нед.	n=26,М±m
ОХС, ммоль/л	6,2±0,06	5,7±0,05 р1<0,01	5,3±0,04 р1<0,01	4,8±0,08 р1<0,01	4,6±0,04	4,8±0,05 р<0,01
ХС ЛПВП, ммоль/л	1,07±0,04	1,17±0,04 р1<0,01	1,34±0,03 р1<0,01	1,60±0,04 р1<0,01	1,61±0,05	1,60 ±0,06 р<0,01
ХС ЛПНП, ммоль/л	3,82±0,04	3,31±0,04 р1<0,01	2,88±0,02 р1<0,01	2,44±0,05 р1<0,01	2,26±0,06 р1<0,05	2,43±0,04 р<0,01
ХС ЛПОНП, ммоль/л	1,31±0,07	1,22±0,03 р1<0,01	1,08±0,03 р1<0,01	0,73±0,05 р1<0,01	0,73±0,07	0,77±0,05 р<0,01
ТГ, ммоль/л	2,89±0,06	2,69±0,04 р1<0,01	2,24±0,06 р1<0,01	1,60±0,07 р1<0,01	1,60±0,06	1,70 ±0,02 р<0,01
ОЛ, г/л	9,3±0,14	8,3±0,07 р1<0,01	7,4±0,03 р1<0,01	5,7±0,04 р1<0,01	5,6±0,05	5,6 ±0,03 р<0,01
ОФЛ, ммоль/л	1,53±0,05	1,70±0,04 р1<0,01	2,15±0,01 р1<0,01	3,55±0,07 р1<0,01	3,56±0,07	3,54±0,09 р<0,01
ОХС/ОФЛ плазмы	4,05±0,07	3,45±0,04 р1<0,01	2,47±0,03 р1<0,01	1,35±0,04 р1<0,01	1,29±0,04 р1<0,05	1,36±0,06 р<0,01
Коэффициент атерогенности плазмы	3,57±0,07	2,35±0,05 р1<0,01	2,15±0,10 р1<0,01	1,53±0,07 р1<0,01	1,40±0,09 р1<0,05	1,52 ±0,05 р<0,01
АГП плазмы, Д233/1 мл	3,25±0,11	3,00±0,02 р1<0,01	2,54±0,03 р1<0,01	1,40±0,05 р1<0,01	1,41±0,07	1,42±0,09 р<0,01
ТБК плазмы, мкмоль/л	5,19±0,09	5,00±0,05 р1<0,01	3,90±0,04 р1<0,01	3,55±0,11 р1<0,01	3,55±0,09	3,56 ±0,07 р<0,01
Антиокислитель-ный потенциал плазмы, %	22,8±0,10	26,1±0,07 р1<0,01	30,1±0,09 р1<0,01	32,8±0,10 р1<0,05	32,9±0,1	32,9±0,12 р<0,01

Условные обозначения: р – достоверность различий исходных значений и контроля, р₁ – достоверность динамики показателей на фоне лечения. В последующих таблицах обозначения сходные.

симвастатина составила 1,40±0,05 Д233/1 мл, а ТБК-активных продуктов – 3,55±0,11 мкмоль/л (табл. 1). Продолжение приема препарата закрепило все достигнутые результаты.

Уже через 4-е недели терапии симвастатином отмечено снижение в них уровня ХС на 7,6% с повышением ОФЛ на 10,8%, обеспечив понижение градиента ХС/ОФЛ мембран нейтрофилов до 1,90±0,007 (табл. 2). В результате 16 и 52 недельного лечения была получена дальнейшая положительная динамика исследуемых показателей (ХС/ОФЛ – 1,59±0,008). При продолжении терапии до 104 нед. достигнута полная нормализация липидного состава мембран нейтрофилов со снижением в них градиента ХС/ОФЛ по сравнению с исходом на 90,7% (табл.2).

В результате 4-х недельного курса применения препарата содержание АГП в нейтрофилах снизилось на 9,4%, МДА – на 9,2% за счет усиления их антиоксидантной системы (табл. 2). Дальнейшее наблюдение за больными, принимавшими препарат, выявило дополнительную постепенную положительную динамику ПОЛ в нейтрофилах и их антиоксидантной защищенности, позволившую их нормализовать только к концу наблюдения. Это оказалось возможным в результате нарастания по сравнению с исходом у больных к 2 годам терапии активности в нейтрофилах каталазы на 89,3% и СОД на 43,8%, что обеспечило их выход на уровень контроля.

Таблица 2. Биохимические показатели нейтрофилов больных на фоне лечения симвастатином

Параметры	Симвастатин, n=34, М±m,					Контроль, n=26, М±m
	исход	4 нед.	16 нед.	52 нед.	104 нед.
ХС нейтрофилов, мкмоль/109 ней.	0,84±0,005	0,78±0,005 р1<0,01	0,73±0,008 р1<0,01	0,67±0,005 р1<0,01	0,62±0,007 р1<0,05	0,62±0,004 р<0,01
ОФЛ нейтрофилов, мкмоль/109 ней.	0,37±0,003	0,41±0,002 р1<0,05	0,46±0,006 р1<0,05	0,49±0,003 р1<0,05	0,52±0,006 р1<0,05	0,51±0,003 р<0,01
ХС/ОФЛ	2,27±0,006	1,90±0,007	1,59±0,008	1,38±0,005	1,19±0,007	1,21±0,006
нейтрофилов		р1<0,05	р1<0,01	р1<0,01	р1<0,01	р<0,01
АГП нейтрофилов, Д233/ 109 ней.	3,50±0,08	3,20±0,05 р1<0,05	2,82±0,04 р1<0,01	2,65±0,04 р1<0,01	2,37±0,08 р1<0,01	2,36 ±0,05 р<0,01
МДА нейтрофилов, нмоль/109 ней.	1,43±0,05	1,31±0,05 р1<0,05	1,03±0,07 р1<0,01	0,84±0,05 р1<0,01	0,74±0,05 р1<0,01	0,73±0,03 р<0,01
Каталаза нейтрофилов, МЕ/109 ней.	5260,0±24,26	5685,0±20,14 р1<0,05	7542,0±19,47 р1<0,01	8097,0±21,15 р1<0,01	9958,0±18,44 р1<0,01	9950,0±19,77 р<0,01
СОД нейтрофилов, МЕ/109 ней.	1245,6±5,04	1348,5±3,91 р1<0,01	1438,2±5,02 р1<0,01	1589,0±4,25 р1<0,01	1790,0±3,89 р1<0,01	1780,0±4,21 р<0,01

Уже через 4 недели наблюдения агрегация нейтрофилов в условиях временной ишемии венозной стенки с лектином сократилась на 13,0%, с конканавалином А – на 14,7%, с фитогемагглютинином – на 11,9%, обусловив увеличение ИТССАН для лектина на 2,6%, для конканавалина А – на 6,2%, для фитогемагглютинина – на 3,7% (табл.3).

Контроль эффективности 16 и 52 недельной терапии выявлял постепенное ослабление агрегационной способности нейтрофилов в плазме после временной ишемии венозной стенки. Прием симвастатина в течение 104 недель вызвало дополнительное снижение выраженности процесса агрегации нейтрофилов у пациентов в плазме, полученной после временной венозной окклюзии до нормы (с лектином на 85,5%, с кон-канавалином А на 56,4%, с фитогемагглютином на 62,8%), сопровождаясь суммарным увеличением ИТССАН для лектина на 15,6%, для конканавали-на А на 56,4%, для фитогемагглютинина на 17,6%, также до уровня, свойственного группе контроля.

Таким образом, применение в течение 104 недель симвастатина у больных АГ с Д способно полностью нормализовать контроль сосудистой стенки над процессом агрегации нейтрофилов.

ОБСУЖДЕНИЕ

Особая роль в формировании реологических нарушений крови при АГ с Д принадлежит форменным элементам крови, в т.ч. нейтрофилам, которые являются наиболее многочисленной популяцией лейкоцитов. В этих условиях Д, гиперхолестеринемия и гемодинамические расстройства являются причиной ослабления АОА и роста активности ПОЛ жидкой части крови [14]. Продукты переоксидации липидов плазмы ведут к перестройкам мембран лейкоцитов и ослаблению их антиоксидантной защиты с накоплением продуктов ПОЛ внутри клеток, дополнительно ухудшая их реологические свойства. В ответ на наличие в организме АГ и Д нейтрофилы начинают активироваться, усиливают выработку медиаторов воспаления и кислородных радикалов, что сопровождается экспрессией на них молекул адгезии, к которым относятся интегрины и селектины. Первые обеспечивают подвижный контакт и прокатку «rolling» лейкоцита на поверхности эндотелия. Вторые способствуют более прочной адгезии лейкоцитов к эндотелию сосудов.

Найденное усиление агрегации нейтрофилов, несомненно, основано на способности применен-

Таблица 3. Влияние стенки сосудов на агрегацию нейтрофилов у больных на фоне лечения симвастатином

Параметры Симвастатин, n = 34, М±m Контроль, n=26, М±m исход 4 нед. 16 нед. 52 нед. 104 нед. Агрегация с лектином, % 24,5±0,12 21,0±0,03 р1<0,01 19,1±0,04 р1<0,01 17,0±0,05 р1<0,01 15,5±0,09 р1<0,05 15,6±0,07 р<0,01 Агрегация с лектином в плазме после временной венозной окклюзии, % 21,7±0,10 19,2±0,05 р1<0,05 15,1±0,04 р1<0,01 12,5±0,05 р1<0,01 11,7±0,07 р1<0,05 11,8±0,06 р<0,01 Индекс торможения сосудистой стенкой агрегации нейтрофилов с лектином 1,15±0,004 1,18±0,004 р1<0,05 1,23±0,007 р1<0,05 1,30±0,008 р1<0,01 1,33±0,007 р1<0,05 1,32±0,003 р<0,01 Агрегация с конканавалином А, % 19,7±0,10 18,7±0,07 р1<0,05 17,0±0,04 р1<0,01 15,5±0,07 р1<0,01 14,8±0,05 р1<0,05 14,8±0,04 р<0,01 Агрегация с конканавалином А в плазме после временной венозной окклюзии, % 17,2±0,08 15,0±0,10 р1<0,05 13,8±0,06 р1<0,01 12,0±0,05 р1<0,01 11,0±0,06 р1<0,05 11,0±0,07 р<0,01 Индекс торможения сосудистой стенкой агрегации нейтрофилов с конканавалином А 1,12±0,005 1,19±0,006 р1<0,05 1,28±0,008 р1<0,01 1,31±0,005 р1<0,01 1,35±0,004 р1<0,05 1,34±0,008 р<0,01 Агрегация с фитогемагглютинин, % 42,2±0,02 39,7±0,06 р1<0,05 37,5±0,05 р1<0,01 34,6±0,08 р1<0,01 30,7±0,05 р1<0,01 30,6±0,09 р<0,01 Агрегация с фитогемагглютинин в плазме после временной венозной окклюзии, % 39,4±0,10 35,2±0,06 р1<0,05 28,5±0,10 р1<0,01 26,2±0,05 р1<0,01 24,2±0,06 р1<0,05 24,1±0,03 р<0,01 Индекс торможения сосудистой стенкой агрегации нейтрофилов с фитогемагглютинином 1,08±0,006 1,12±0,004 р1<0,05 1,17±0,006 р1<0,01 1,24±0,008 р1<0,01 1,27±0,005 р1<0,05 1,27±0,004 р<0,01 ных лектинов взаимодействовать с различными углеводными детерминантами гликопротеиновых рецепторов их мембраны, усиливаясь при нарастании в них количества участков связывания лектинов. Так, известно, что фитогемагглютинин взаимодействует преимущественно с участка- 1 54 1------------------------------------------- ми bD-галактозы гликопротеинов, лектин зародыша пшеницы – с N-ацетил-D-глюкозамином и N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислотой, а конканавалин А – с содержащими маннозу N-гликанами [3]. В этой связи можно считать, что при АГ с Д повышение лектин-индуцированной агрегации нейтрофилов связано с экспрессией рецепторов адгезии и увеличением в их составе участков, содержащих N-ацетил-D-глюкозамин, N-ацетил-нейраминовую кислоту, маннозу и bD-галактозу, что, видимо, снижает чувствительность нейтрофилов к ограничивающим агрегацию влияниям со стороны сосудистой стенки за счет меньшей чувствительности соответствующих рецепторов к простациклину и NO.

В результате применения симвастатина достигнуто постепенное улучшение липидного профиля плазмы, липидного состава мембран нейтрофилов, нарастание антиоксидантной защиты плазмы крови и нейтрофильных лейкоцитов с ослаблением в них ПОЛ до уровня контроля к концу наблюдения.

На фоне 104 недель проводимой терапии получена нормализация агрегационной способности нейтрофилов и их реакции на дезагрегирующие влияния со стороны сосудистой стенки, что может быть связано с полным восстановлением углеводной структуры гликопротеиновых рецепторов мембраны нейтрофильных лейкоцитов. Можно считать, что в результате терапии в составе их рецепторов у больных АГ с Д имело место снижение до уровня контроля N-ацетил-D-глюкозамина, N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) bD-галактозы и маннозы с одновременной полной оптимизацией синтеза в стенке сосуда простациклина и NO.

ВЫВОДЫ

• 1.    У пациентов АГ с Д регистрируется усиленная агрегация нейтрофилов, к которой ведут липидный дисбаланс их мембраны, усиление в них ПОЛ и выраженные изменения углеводной структуры гликопротеиновых рецепторов мембраны.

• 2.    При наличии АГ с Д возникает ослабление контроля сосудистой стенки над агрегационной способностью нейтрофилов, основными компонентами патогенеза которого являются нарушения в липидном обмене, активация перекисного окисления липидов плазмы, понижение генерации NO и простациклиноо-бразования.

• 3.    На фоне 104 недель применения симвастатина у больных АГ с Д достигнута нормализация липидного состава, процессов ПОЛ в плазме и нейтрофилах и контроль со стороны сосудистой стенки над агрегацией нейтрофилов.