Состояние процессов клеточного обновления в слизистой оболочке желудка и лимфоцитов крови при вариантах геликобактерной инфекции

Цель исследования

Материал и методы

Результаты и их обсуждение

При ЯБО инфекция Н. pylori гистологическим методом выявлена в 90,4% случаев, в группе

Интегративная физиология, восстановительная и адаптивная физическая культура

ЯБН - 95,3 %, при ХГН в - 98 %, при ХГА - в 85 %. В структуре степени обсемененности СОЖ Н. pylori при ЯБО достоверно преобладали случаи с высокой степенью обсемененности Н. pylori - 71,6 %, при ЯБН умеренной степени обсемененности Н. pylori -73,5 %, при ХГН - слабой степени - 55 %, при ХГА -высокой степени - 46 %. Средний балл степени обсемененности Н. pylori при ЯБО 2,80 ± 0,07; ЯБН 2,10 ± 0,01; (р < 0,05) ХГН 1,87 ±0,09; ХГА 1,92 ±0,11 (р > 0,05). В 92 % ЯБО вирулентные штаммы были Vac А - позитивными (vacuolating-associated cytotoxin) (р < 0,01), из них 76 % были с генотипом sl/s2. В группе больных с ЯБН вирулентные штаммы были представлены в 75 % VacA геном (генотип m2) с исходно незначительной токсической активностью [3]. В 67 % определялся смешанный генотип по аллелям VacA гена и генов CagA (cytotoxin-associated gene), IceA (induced by contact with epithelium) и был представлен следующими вариантами: sl/s2, sl/s2 + ml + m2, sl/s2 + m2, sl/s2 + cagA, sl/s2 + iceA2, ml + cagA + iceA2. При ХГН и ХГА изучаемые вирулентные штаммы не определялись. Средний балл воспаления СО в антральном отделе составил при ЯБО 2,50 ± 0,03; ЯБН 1,70 ± 0,15 (р < 0,05); ХГН 2,15 ± 0,07; ХГА 2,2 ± 0,12 (р > 0,05). Результаты иммуногистохимического анализа эпителиоцитов СОЖ приведены в табл. 1.

Таблица 1

Количество эпителиоцитов в СОЖ, экспрессирующих р53 и Ki 67

*-р<0,05; **-р<0,01; ***-р<0,001 -статистическая значимость различий с данными контрольной группы;

е - р < 0,05; •• -р < 0,01; ••• - р < 0,001 - статистическая значимость различий между ХГН - ХГА и ЯБН - ЯБО.

Практически во всех группах больных получено достоверное увеличение индекса апоптоза в поверхностном и ямочном эпителии в сравнении с контрольной группой (в 1,3-2,7 раза). При ХГН и ХГА показатели экспрессии р53 не имели достоверных отличий, при ЯБО отмечен достоверно низкий индекс апоптоза в сравнении с ЯБН (р < 0,01). Индекс пролиферации не отличался от показателей в контрольной группе, лишь при ХГА в сравнении с ХГН выявлена повышенная пролиферативная активность в поверхностном эпителии (16,34 ± 1,04 %). Как правило, темпы пролиферации эпителиоцитов коррелируют с выраженностью воспаления. Наибольшим стимулирующим влиянием на пролиферацию по данным В.А. Исакова обладает штамм Н. pylori CagA + VacA + подтипа si а, в то время как апоптоз уменьшается, это дает значительно больше шансов выжить эпителиоцитам с поврежденной ДНК [3]. В нашем исследовании получена отрицательная корреляционная зависимость между генотипом VacA и показателями Ki67 (г =-0,7; р < 0,01), что может свидетельствовать о подавлении пролиферативной активности при геликобактерном воздействии. По данным В.А. Исакова, И.В. Домарадского вопрос о том, зависит ли стимуляция пролиферации от типа штамма Н. pylori или нет, пока остается без окончательного ответа [4]. При проведении корреляционного анализа между показателями индекса апоп тоза и пролиферации получена положительная корреляционная связь у больных с ЯБН в показателях ямочного эпителия (г = 0,9), в остальных группах больных наблюдалась разобщенность в процессах клеточного обновления. Данные о состоянии иммунных клеток, признаках их позитивной и негативной активации, процессах апоптоза иммуноцитов приведены в табл. 2.

Изучение общего содержания лейкоцитов и лимфоцитов в системном кровотоке выявило достоверно повышенный уровень лейкоцитов при ХГА, ЯБО и снижение общего количества лимфоцитов при ЯБО, что является стандартной реакцией клеток крови на повреждение в связи с перераспределением лимфоцитов, миграцией в очаг воспаления.

Уровень естественных киллеров (CD 16) был достоверно повышен в сравнении с контролем во всех группах больных. У больных с ЯБО выявлено снижение числа CD25 клеток в системном кровотоке (р < 0,05), что отражает уменьшение числа клеток, экспрессирующих рецепторы позитивной активации (к интерлейкину - 2). Во всех группах наблюдалось достоверное снижение количества клеток, экспрессирующих рецепторы готовности к апоптозу. Максимальный дисбаланс с преобладанием процессов позитивной и негативной активации лимфоцитов установлен при ЯБО, о чем свидетельствует рост соотношения

Игнатова Г.Л., Сарсенбаева А.С., Теплова С.Н.

CD25/CD95. При ЯБО и ХГА отмечено снижение числа лимфоцитов, экспрессирующих антиапоп-тогенный белок Вс1-2, снижен индекс реализации апоптоза лимфоцитов, который рассчитывается как процент клеток с морфологическими признаками фрагментации ядра от общего числа CD95 -позитивных клеток. Индекс реализации апоптоза в кровотоке был минимальным у больных с ЯБО

(р < 0,05). Таким образом, при ХГН и ЯБН наблюдается рост числа естественных киллеров и сниженная готовность клеток к апоптозу. При ЯБО определялись самые низкие в циркуляции количества естественных киллеров и лимфоцитов с маркерами готовности к апоптозу, низким был индекс реализации апоптоза в сравнении с другими больными.

Таблица 2

Характеристика лимфоцитов-маркеров апоптоза при вариантах геликобактерной инфекции

ИРА - индекс реализации апоптоза; * - р < 0,05; ** - р < 0,01; *** - р < 0,001 - статистическая значимость различий с данными контрольной группы; • - р < 0,05; •• - р < 0,01; ••• - р < 0,001 - статистическая значимость различий между ХГН-ХГА и ЯБН-ЯБО.

Соотношение числа клеток с маркерами процессов позитивной / негативной активации во всех группах было больше единицы, тогда как в контрольной группе показатель составил 0,7, что отражает превалирование при Н. pylori инфекции процессов позитивной активации лимфоцитов над негативной и формирование клеточного иммунного ответа на инфекцию (табл. 2). У больных с ХГН при корреляционном анализе выявлены прямые взаимосвязи между уровнем CD25, CD95 и bcl-2 (ri = 0,97 и г2 = 0,90), что не было характерно для группы больных с язвенной болезнью. При ЯБО установлена отрицательная (г =-0,8) корреляционная связь между численностью NK (натуральные киллеры) клеток, CD25 в крови, с одной стороны, и числом р53 позитивных клеток поверхностного эпителия - с другой. Выявленные связи отражают участие NK и CD25 в понижающей регуляции уровня апоптоза эпителиоцитов.

Выводы

тивной активности эпителиоцитов в ответ на повреждение.