Современные иммуноморфоло-гические аспекты диагностики заболеваний пародонта

• ¹Введ е ние. Среди актуальных проблем современной стоматологии эксперты ВОЗ отметили паро-

  донтит как наиважнейшую. Воспалительным заболеваниям пародонта подвержено до 95% населения старше 40 лет [1], что определяет их медицинское и социальное значение. Современные представления о патогенезе хронического генерализованного паро-

  
  

  Ответственный автор — Островская Лариса Юрьевна Адрес: 410056, г. Саратов, ул. Мичурина, 4, кв. 20.

Тел.: 8-905-320-18-53.

Показатели клеточного обновления эпителиоцитов десны у больных воспалительными заболеваниями пародонта

Группа обследованных	I Ki-67 (%)	I apopt (%)	Ibcl-2 (%)
Практически здоровые лица, n=25	13,5±0,7	0,52±0,04	2,9±0,3
С гингивитом, n=30	15,2±1,5	0,46±0,05	4,3±0,7
С пародонтитом легкой степени, n=20	24,6±1,3*#	0,63±0,03*#	7,0±0,5*#
С пародонтитом средней и тяжелой степени, n=20	34,2±1,6*##	0,75±0,04*##	12,8±0,9*##

П р и м еч а н и е : расчеты приведены на 1 кв. мм слизистой оболочки десны; * — показатели имеют достоверное различие со значениями в группе практически здоровых лиц (р<0,05); # — показатели имеют достоверные различия со значениями у больных генерализованным катаральным гингивитом (р<0,05); ## — показатели в группе больных пародонтитом средней и тяжелой степени имеют достоверные различия по сравнению со значениями в группе пациентов с гингивитом и пародонтитом легкой степени (p<0,05).

донтита определяют его как результирующую взаимодействия микробного фактора и организма больного. Во взаимоотношениях микробов и организма хозяина огромную роль играет иммунитет. При этом нарушение баланса между бактериальной инвазией и резистентностью ротовой полости рассматривается в качестве основного фактора, определяющего клинические проявления поражений тканей пародонта [2, 3].

В связи с этим разработка и научное обоснование новых подходов к диагностике, прогнозированию и ранней профилактике указанных заболеваний продолжают оставаться актуальными. Клиническая картина и хронического катарального гингивита, и хронического генерализованного пародонтита на ранних стадиях заболевания нередко имеет латентное течение, что затрудняет своевременную диагностику и, следовательно, отдаляет начало адекватных лечебных и реабилитационных мероприятий.

Цель: определение диагностического и прогностического значения изменений цитокинового профиля десневой жидкости и пролиферативной активности клеток десны у пациентов с воспалительными заболеваниями пародонта.

Материал и методы. В работе использованы материалы, полученные при обследовании 40 больных хроническим генерализованным пародонтитом (ХГП). Группу сравнения составили 30 больных с хроническим генерализованным катаральным гингивитом (ХГКГ), контрольную группу — 25 практически здоровых лиц. Средний возраст пациентов: 38,55±0,63 года.

Для обеспечения репрезентативности в число обследуемых пациентов не были включены пациенты, страдающие сахарным диабетом, заболеваниями щитовидной железы, злоупотребляющие алкоголем и курением. При отборе пациентов исключались также лица с хронической патологией гепатобилиарной и мочевыделительной систем.

Оценка стоматологического статуса осуществлялась в соответствии с рекомендациями В. С. Иванова [4]. Формулировка диагноза ХГП проводилась на основании систематики заболеваний пародонта, принятой на XVI пленуме Всесоюзного общества стоматологов (1983). Для морфологической диагностики воспалительных заболеваний пародонта брали биопсию из слизистой оболочки маргинального края десны. Для выявления апоптозных ядер использовали метод импрегнации по Мозеру (1995). Для изучения пролиферативной активности клеток десны применяли иммуногистохимический метод с использованием моноклональных мышиных антител к белку Ki-67 (1:100, Novocastra) и антиапоптозному белку Bcl-2 (1:100, Novocastra).

Материалом для исследования уровня цитокинов служила десневая жидкость. Определение содержа- ния цитокинов (интерлейкина-6 (ИЛ-6), интерлейкина-10 (ИЛ-10), интерлейкина-12 (ИЛ-12), интерлейкина-18 (ИЛ-18)) в десневой жидкости проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием реактивов фирмы «Вектор Бест» (г. Новосибирск).

Статистическую обработку результатов исследования проводили с помощью пакета программ «Statistica», определяли среднее значение и ошибку среднего, используя критерии достоверности Стьюдента и Манна — Уитни.

Результаты. У обследованных лиц контрольной группы среднее значение индекса гигиены полости рта по УИГР составило 1,47±0,06. Показатели, характеризующие процессы клеточного обновления эпителиоцитов десны в контрольной группе, имели следующие значения: IKi-67-13,5±0,7%, Ibcl-2-2,9±0,3%, lapopt — 0,52±0,04%. Показатели уровня цитокинов в десневой жидкости были следующими: ИЛ-6–12,60±1,51 пг/мл, ИЛ-10–7,20±1,02 пг/мл, ИЛ-12–18,52±1,43 пг/мл и ИЛ-18–11,32±1,26 пг/мл.

Больные с воспалительными заболеваниями пародонта предъявляли жалобы на кровоточивость во время чистки зубов, неприятный запах изо рта, зуд в области десен. У всех больных выявлены зубные отложения. УИГР составил у пациентов с гингивитом 2,18±0,04, с пародонтитом легкой степени 2,37±0,03, с пародонтитом средней и тяжелой степени 2,55±0,03 (показатели имеют достоверные различия, p<0,05). При объективном осмотре больных обнаружены кровоточивость, отечность, цианотичность десны. Индекс РМА у больных с гингивитом был 28,19±1,45, ПИ — 1,38±0,07; с пародонтитом легкой степени 47,38±2,20 и 2,89±0,08 соответственно; с пародонтитом средней и тяжелой степени 58,47±2,15 и 5,16±0,12 соответственно (все показатели имеют достоверные различия, p<0,05).

На ортопантомограммах отмечалась деструкция костной ткани межзубных перегородок различной величины в зависимости от степени тяжести пародонтита: исчезновение компактной пластинки, резорбция межальвеолярных перегородок от 1/3 до 2/3 их высоты, явления остеопороза.

Из данных, представленных в таблице, видно, что изменение индекса пролиферации было однотипным и характеризовалось его достоверным повышением соответственно тяжести пародонтита. При хроническом пародонтите пролиферативная активность эпителиоцитов десны повышалась в большей степени (в 2,1–3,5 раза по сравнению со значением в группе практически здоровых лиц), чем показатель их апоптоза, увеличение которого было менее значимым (в 1,2–1,4 раза).

В основе изменения пролиферативной активности и апоптозной гибели эпителиоцитов десны при

Содержание цитокинов в десневой жидкости у больных с воспалительными заболеваниями пародонта

воспалительных заболеваниях пародонта несомненно лежит нарушение иммунного гомеостаза. Мы оценивали состояние местного иммунитета по содержанию в десневой жидкости факторов межклеточного взаимодействия — интерлейкинов (ИЛ-6, ИЛ-10, ИЛ-12 и ИЛ-18) (рисунок).

При гингивите наблюдали в одинаковой мере повышение уровня в десневой жидкости как про- (ИЛ-6, ИЛ-12, ИЛ-18), так и противовоспалительных (ИЛ-10) цитокинов. Таким образом, формируется местный интегрированный ответ со стороны иммунной системы, который направлен на быстрейшее купирование воспалительного процесса в пародонте.

При пародонтите наиболее значительно была увеличена концентрация ИЛ-6 (в 5,8–6,9 раза), ИЛ-18 (в 5,2–7 раз) и противовоспалительного медиатора ИЛ-10 (в 9,5–13,4 раза), тогда как содержание ИЛ-12 было не изменено при пародонтите легкой степени и понижено при пародонтите средней степени. Это можно объяснить преимущественно Т2-хелперным ответом при ХГП, отмеченным и другими исследователями [5].

Для оценки клинической значимости уровня цитокинов в десневой жидкости при установлении тяжести поражения пародонта были проанализированы взаимосвязи между основными клиническими и индексными характеристиками пародонта, с одной стороны, и концентрацией цитокинов в десневой жидкости — с другой. Выявлено, что увеличение содержания в десневой жидкости изучаемых цитокинов коррелировало с тяжестью пародонтита (rИЛ-6=0,645; rИЛ-10=0,622; rИЛ-18=0,574). Выявлена прямая корреляция между повышением уровня провоспалительного ИЛ-6 и глубиной пародонтальных карманов (r=0,623), индексом РМА (r=0,677) и индексом ПИ (r=0,618). Следовательно, содержание ИЛ-6, ИЛ-10 и ИЛ-18 в десневой жидкости можно рассматривать как параметры, объективизирующие оценку тяжести пародонтита.

При пародонтите цитокины активно участвуют в регуляции процессов клеточного обновления. Установлена прямая корреляция между числом клеток, им-мунопозитивных к Ki-67, и концентрацией в десневой жидкости ИЛ-18 (r=0,677), между индексом апоптоза и содержанием в десневой жидкости ИЛ-10 (r= –0,622).

Обсуждение. Важную роль в течении воспалительных заболеваний пародонта, в том числе в формировании пародонтальных карманов, играет нарушение процессов клеточного обновления — пролиферации и апоптоза эпителиоцитов десны [6]. У пациентов с хроническим пародонтитом установлено достоверное повышение пролиферативной способности и увеличение процента гибели эпителиальных клеток десны в форме апоптоза по сравнению со значениями у практически здоровых и у пациентов с хроническим гингивитом.

Следовательно, в эпителии десны при хроническом генерализованном пародонтите преобладают пролиферативные процессы. Высокий индекс bcl-2-положительных ядер способствует задержке апоптоза воспалительных клеток, которые дольше остаются в тканях пародонта, продуцируют чрезмерное количество цитокинов, способствуя тем самым прогрессированию деструкции пародонта [7].

Полученные результаты свидетельствуют о клинически значимом изменении цитокинового баланса у больных ХГП, что проявляется увеличением уровня как провоспалительных цитокинов (ИЛ-6, ИЛ-18), так и противовоспалительных медиаторов (ИЛ-10). У пациентов с хроническим пародонтитом в десневой жидкости отмечен цитокиновый дисбаланс, характеризующийся преимущественным повышением содержания ИЛ-10, ИЛ-6 и уменьшением концентрации ИЛ-12 соответственно тяжести пародонтита. Следовательно, характер изменения цитокинового баланса десневой полости отражает степень местных нарушений.

Очевидно, что длительное сохранение повышенного содержания ИЛ-18 в десневой жидкости у пациентов с пародонтитом средней и тяжелой степени способствует пролонгации воспалительно-деструктивных изменений в пародонте, резорбции костной ткани и прогрессированию процесса [8].

Таким образом, комплексный анализ содержания цитокинов в десневой жидкости пациентов с ХГП позволяет прогнозировать характер течения заболевания, оценить эффективность лечения и при необходимости наметить пути коррекции. Является актуальной диагностика донозологических состояний, непосредственно предшествующих манифестации заболеваний пародонта, при которых еще возможны обратимые изменения.

Заключение. Хронический генерализованный пародонтит у обследованных пациентов сопрово- ждается повышением уровня провоспалительных цитокинов (интерлейкина-6, интерлейкина-18) и противовоспалительных медиаторов (интерлейкина-10) в сочетании с уменьшением содержания интерлейкина-12 в десневой жидкости. Повышение активности пролиферации апоптоза и показателей антиапоп-тозного белка bcl-2 в эпителии пародонта является структурно-функциональной единицей хронического пародонтита. Определение уровня цитокинов в десневой жидкости является информативным неинвазивным методом, позволяющим мониторировать активность воспалительного процесса в тканях пародонта, деструкцию костной ткани и, следовательно, прогнозировать развитие и течение хронического пародонтита.