Способ модуляции апоптоза и клеточной пролиферации клеток меланомы кожи

Актуальность. Меланома кожи является агрессивным злокачественным новообразованием, характеризующимся высокой химиорезистентностью в результате особой устойчивости клеток меланомы к апоптоз-индуцирующим стимулам. Использование специфического ингибитора МЕК UO126 является доказан-но эффективным способом снижения роста клеток меланомы. Однако при воздействии МЕК-ингибиторов в опухолевых клетках происходит стимуляция остановки клеточного цикла, но не апоптоз. Поэтому представляется перспективным использовать в составе комбинированной терапии меланомы в сочетании с МЕК-ингибиторами препараты-индукторы апоптотической гибели клеток, к которым, в частности, относится специфический лиганд TsPO-РК11195.

Целью исследования было определение возможности модуляции апоптоза и пролиферации клеток меланомы кожи ингибитором МЕК UO126 в комбинации с лигандом TsPO РК11195.

Материал и методы. Для исследования использовалась человеческая культура клеток меланомы кожи SK-MEL-1 (ATCC). Клетки выращивались в среде RPMI 1640 с 10 % содержанием фетальной бычьей сыворотки при 37°C в CO2инкубаторе (5% CO2). Клетки рассеивались в чашки Петри с плотностью 2–4×106 кл/мл за 24 ч до начала эксперимента. К суспензии клеток добавлялся TsPO лиганд РК11195 (Sigma) в концентрации 10 μmol/L, 100 nmol/L и 10nmol/L. В другой группе к суспензии клеток добавлялся блокатор МАРК-U0126 (Sigma) в концентрации 10 и 50 μmol/L. Кроме того, мы проводили инкубирование суспензии клеток одновременно блокатором МЕК U0126 и лигандом РК11195, в концентрациях 10 μmol/L и 10 nmol/L соответственно. В контрольной группе клетки оставались без лечения. Через 72 ч оценивался уровень апоптоза, пролиферации и TsPO. Выраженность апоптоза оценивалась с помощью окраски акридиновым оранжевым/бромистым этидием. Определялся процент апоптотических клеток с ядром, окрашенным (полностью или фрагментарно) в оранжевый цвет. Уровень клеточной пролиферации и TsPO оценивался путем иммуноцитохимического окрашивания клеток согласно стандартным методикам.

Результаты. После инкубации клеток меланомы с РК11195 и с U0126 во всех концентрациях наблюдалось повышение уровня апоптоза в 5 и 6 раз соответственно, регистрируемое как появление ядер клеток меланомы, окрашенных в оранжевый цвет. В случае комбинации РК11195 и U0126 происходило более интенсивное повышение числа апоптоз-положительных клеток – в 8 раз (40 % апоптотических клеток). При определении уровня клеточной пролиферации регистрировалось снижение экспрессии PCNA, что определялось как достоверное уменьшение количества положительно-окрашенных клеток. При этом более выраженный эффект снижения экспрессии маркера клеточной пролиферации в 3–3,5 раза наблюдался после инкубации с U0126 в концентрации 50 μmol/L и после инкубации с РК11195 в концентрации 10 μmol/L и 100 nmol/L. В группе сочетанного применения данных терапевтических агентов в более низких концентрациях (10 μmol/L и 10 nmol/L) также происходило снижение экспрессии, но лишь на 25 %, что сопоставимо с результатами, полученными после монотерапии РК11195 и U0126.

Выводы. Отмечено значимое преимущество сочетанного применения РК11195 и U0126, данные терапевтические агенты синергетически активируют апоптоз в минимальных концентрациях в эксперименте на культуре клеток меланомы.