Сравнительная характеристика соматических мутаций в гене braf у больных меланомой кожи юга России

Введение. Меланома кожи человека является исключительно агрессивной опухолью с высоким уровнем летальности и высокой склонностью к рецидивам и метастазированию. Несмотря на то, что она охватывает лишь 5% случаев всех злокачественных новообразований кожи, она является причиной приблизительно 75% летальных случаев от злокачественных новообразований кожи.

Ее метастазы часто локализованы в лимфатических узлах, головном мозге, печени и других органах [Friedman, R. J.; Heilman, E. R. The pathology of malignant melanoma. Dermatol. Clin. 2002, 20, 659–676.]. Основным приоритетом в развитии современной противоопухолевой химиотерапии является поиск таргентных препаратов, способных избирательно влиять на компоненты сигнальных путей, участвующих в механизмах канцерогенеза, таких как Вемурафениб.

Нарушение в регуляции клеточного цикла, необходимое для развития меланомы, часто связано с изменениями в сигнальном пути RAS/RAF/MEK/МАРК, который является центральным регулятором клеточной пролиферации и выживания. Мутированные белки Ras или Raf постоянно стимулируют пролиферацию клеток, инвазию и метастазирование. Такие мутации наблюдались в 90% клинических случаев меланомы [Smalley, K. S. Understanding melanoma signaling networks as the basis for molecular targeted therapy. J. Invest. Dermatol. 2010, 130, 28–37].

Цель – исследование проявляемости соматической мутации V600E в гене BRAF опухолевых биоптатов пациентов с диагнозом меланома кожи для адекватного назначения таргет-ных препаратов (вемурафениб).

Материалы и методы. В исследовании участвовали 35 пациентов Юга России и Северного Кавказа: 15 мужчин, 20 женщин в возрасте от 35 до 77 лет с морфологически подтвержденным диагнозом меланома кожи. Для молекулярно-генетического исследования использовали 3 мкм срезы парафиновых блоков (FFPE), содержащие не менее 20% опухолевых клеток.

Экстракция ДНК включала стандартную процедуру депарафинирования в орто-ксилоле, лизис в 2% SDS – буфере в присутствии протеиназы K и дополнительную очистку от ингибиторов на колонках QIAamp® DNA FFPE Tissue Kit (QIAGENE, Germany). Для проведения RT-PCR концентрацию ДНК нормализовывали до величины 2 нг/мкл. При помощи набора реагентов «Real-Time-PCR-BRAF-V600E» («Биолинк», Россия) проводили определение 1 миссенс-мутации в 15 экзоне гена BRAF: V600E. Статистический анализ полученных данных проводили с использованием непараметрического критерия — 2 для порогового уровня p 0.05.

Заболеваемость меланомой кожи без учёта статуса наличия/ отсутствия мутаций между пациентами мужского и женского пола была статистически достоверной для уровня р = 0,002, и в группе женщин встречалась в 2 раза чаще, чем у мужчин. Как показали результаты нашего исследования, усредненный показатель частоты мутаций V600E в 15 экзоне гена BRAF, для мужчин и женщин в нашем исследовании составил 40%, при этом процент мутаций у мужчин составил величину 26,7%, а у женщин – 50%. Таким образом, частота возникновения соматических мутаций V600E в 15 экзоне гена BRAF у женщин почти в 2 раза превышала аналогичный показатель для мужчин, что хорошо коррелировало с показателем заболеваемости.

Был также проведен анализ возможных отличий частот соматических мутаций V600E в 15 экзоне гена BRAF в разных возрастных группах пациентов: до 55 лет включительно, и старше 55 лет. В группе пациентов до 55 лет частота возникновения соматических мутаций V600E в 15 экзоне гена BRAF у мужчин составила 33%, в то время как у женщин аналогичный показатель был равен 55,6%. В группе пациентов старше 55 лет частота возникновения соматических мутаций V600E в 15 экзоне гена BRAF у мужчин составила 25%, в то время как у женщин аналогичный показатель был равен 45,5%.

Заключение. Усредненный показатель частоты мутаций V600E в 15 экзоне гена BRAF (для мужчин и женщин) составил 40%. Процент соматических мутаций V600E в 15 экзоне гена BRAF у мужчин составил величину 26,7%, а у женщин – 50%. Наблюдалось уменьшение случаев частоты соматических мутаций V600E в 15 экзоне гена BRAF у мужчин и женщин старше 55 лет по сравнению с аналогичными группами пациентов моложе 55 лет.