Сравнительная оценка чувствительности ЦНС организма экспериментальных животных к воздействию некоторых психотропных препаратов на фоне хронической алкогольной интоксикации в хронофармакологическом эксперименте

Хроническая алкогольная интоксикация характеризуется высокой степенью осложнений со стороны сердечнососудистой, нервной систем, печени и желудочно-кишечного тракта [1]. Лечение сопутствующих заболеваний не будет эффективным без избавления пациента от абстинентного синдрома, возникающего при прекращении употребления алкоголя [2]. На сегодняшний день имеется недостаток эффективных методов фармакотерапии и исследований в рамках данной проблемы [3]. В показаниях к применению антиоксидантных препаратов указан алкогольный абстинентный синдром с преобладанием неврозоподобных и вегетативнососудистых расстройств, однако данная группа препаратов не используется в клинической практике при лечении данного заболевания, в связи с чем существует дефицит официальной информации об эффективности этих препаратов [4]. Согласно официальным источникам, Этилметил-гидроксипиридина сукцинат (Мекси-прим®) повышает резистентность организма к воздействию экстремальных факторов, в том числе к электрошоку и кисло-родзависимым патологическим состояни- ям [5]. Действие препарата проявляется в снижении проявлений абстинентного синдрома [6], одним из проявлений которого является повышенная агрессия.

В ходе эксперимента нами было рассмотрено действие двух препаратов на поведенческие реакции крыс для наиболее эффективного подбора оптимальных комбинаций препаратов, применяемых в лечении больных с алкогольной зависимостью и купировании абстинентного синдрома.

Цель исследования: выявить особенности чувствительности центральной нервной системы в виде оценки реакций агрессии лабораторных крыс к действию депримирующего и антиоксидантного препаратов, а также их комбинации, на фоне хронической алкогольной интоксикации путем хронофармакологического эксперимента.

Исследование одобрено локальным этическим комитетом ФГБОУ ВО УГМУ Минздрава России (19.02.2017 г.). Статистическая обработка полученных экспериментальных данных проводилась с использованием пакета программ Statistica 10.0. Для анализа данных использовалась проверка типа распределения данных с помо- щью теста Шапиро-Уилка и непараметрические тесты: для зависимых выборок – критерий Вилкоксона; для независимых выборок – U-критерий Манна-Уитни. Уровень значимости в указанном исследовании прини-мался при значении р ≤ 0,5. Для исследования параметров биологического ритма использовались компьютерные программы для косинор – анализа «Cosinor» 3.1, «Acro» 3.5, разработанные профессором университета Бойсе (США) R. Refinetti [7]. Уровень значимости принимался при значении р ≤ 0,5.

Материалы и методы исследования. Исследование проведено на 220 белых половозрелых лабораторных крысах (виварий ФГБОУ ВО УГМУ Минздрава России, г. Екатеринбург) – самцах чистой линии с массой 250-400 г, содержащихся в условиях лабораторного вивария с круглосуточным доступом к воде и корму. Группам животных, включенных в исследование, кроме контрольной группы, для моделирования хронической алкогольной интоксикации вместо воды в поилки заливали 12% водный раствор этилового спирта в течение 20 дней [7]. Препараты, использовавшиеся в ходе исследования: Бромдигидро-хлорфенилбензодиазепин, в дальнейшем Феназепам®, (раствор для внутривенного и внутримышечного введения 1 мг/мл; ампула 1 мл; производитель: Эллара ООО, Россия); Эмоксипина сукцинат, в дальнейшем Мексиприм® (раствор для внутривенного и внутримышечного введения 50 мг/мл; ампула 2 мл; производитель: Московский эндокринный завод, Россия). Препараты вводили крысам внутрибрюшинно в течении 10 дней по 1 мл 0,3% растворов (дозы были подобраны в соответствии с используемыми в клинике из перерасчета на поверхность тела животного) [5]. После проведения насыщения препаратами крысам проводили тест раздражения электрическим током, предназначенной для измерения реакции агрессии под действием лекарственных препаратов в ответ на физический фактор раздражения [7]. Крысы помещались в клетку, дно которой проводит ток. С пульта управления давалось напряжение, начинающееся от 10 V, постепенно нараставшее до уровня, когда крысы проявляли агрессию по отношению друг к другу (сцепление животных в стойке на задних лапах). Фиксировали показатель напряжения тока, вызывавшего агрессивную реакцию, в вольтах и длительность стойки в секундах. Эксперимент повторяли каждые 4 часа в течение двух суток. Все крысы были поделены на 6 групп, по 2 пары, путем стратифицированной рандомизации (стратификация по полу, возрасту и весу). Всего, в течение двух суток, исследовали 6 пар животных, поочередно помещаемых в электрическую установку, интервал для каждой пары 16 часов, в соответствии с протоколами ведения хронобиологических исследований [8]. Принципом постановки животных в пару было обязательное условие их проживания в разных клетках, при этом во время последующего помещения животных в экспериментальную установку пары ротировались для исключения привыкания.

Группы сравнения:

• 1.    Интактные крысы (контрольная группа) в количестве 24 (на стандартном режиме содержания, без введения алкоголя и лекарственных средств);

• 2.    Животные с моделированным хроническим алкоголизмом в количестве 34 (предоставление 12%-ного раствора этанола в течение 20 дней);

• 3.    Животные с применением Мекси-прима® на фоне модели хронического алкоголизма в количестве 32 (предоставление 12%-ного раствора этанола в течение 20 дней и последующее внутрибрюшинное введение Мексиприма® в течение 10 дней)

• 4.    Крысы с применением Феназепама® на фоне хронической алкоголизации (36 экземпляров);

• 5.    Крысы с применением Феназепама® и Мексиприма® на фоне хронической алкоголизации (32 животных).

Результаты исследования и их обсуждение. Проведенные экспериментальные исследования показали, что изучаемые психотропные препараты, оказывают значимое воздействие на биологические ритмы организма животных, подвергнутых хронической алкогольной интоксикации (рис. 1). При проведении косинор-анализа по данным, полученным при эксперименте, были построены косинусоиды предполагаемых биологических ритмов.

Рис. 1. Сравнительная характеристика длительности агрессии у животных, принимавших Феназепам® и комбинацию Феназпам®+Мексиприм® на фоне хронической алкогольной интоксикации. (Цвет косинусоиды соответствует цвету группы исследуемых животных)

В ходе эксперимента выявлена способность Мексиприма стабилизировать состояние нервной системы при хронической алкоголизации и приеме депримирующих средств, о чём свидетельствует повышение величины напряжения, вызывающего агрессивную реакцию. Таким образом, Мек-сиприм® оказывает прямое физиологическое влияние на чувствительность лабораторных животных к электрическому раздражению, понижая их агрессивную готовность и приближая поведение к нормальному (у интактных животных).

Эффект Феназепама® оказался хронос-пецифическим (рис. 1), так как степень изменения длительности агрессивной реакции крыс в разные часы суток существенно не различалась. Феназепам® не изменил структуру ритма агрессии крыс, хотя величина мезора становится достоверно ниже интактной группы (на 42%), а также группы, получавшей комбинацию Феназе-пама® с Мексипримом® на фоне хронической алкоголизации, (на 25%). Добавление Мексиприма® к Феназепаму® у крыс на фоне хронической алкогольной интоксикации привело к десинхронизации периодов между положительными (акрофазами) и отрицательными (батифазами) экстремумами, которые начинают составлять 13 часов, что свидетельствует о его адаптоген-ном влиянии и противодействии синхро- низирующему эффекту Феназепама®, как депримирующего препарата, что хорошо прослеживается при проведении косинор-анализа.

Наблюдается подъем мезора у крыс с алкогольной интоксикацией на комбинации Феназепама® и Мексиприма® относительно крыс с алкогольной интоксикацией без применения Мексиприма®. Также наблюдается смещение акрофаз по циркадному ритму у крыс, подвергнутых хронической алкогольной интоксикации, принимавших комбинацию Феназепама® и Мексиприма®, приближая их к показателям интактной группы, в сравнении с ак-рофазами группы животных на одном Фе-назепаме®. У группы животных после приема Феназепама® на фоне хронической алкогольной интоксикации прослеживается практически полное отсутствие волнового ритма (кроме первого экстремума в 21:00ч., который, в свою очередь, может быть связан с переносом животных в новую локацию и активацией адаптогенных реакций организма), и его нахождение на примерно одном уровне в течении суток [9].

Выводы:

• 1.    10-тидневный курсовый прием препарата Феназепам способствует достоверному снижению длительности проявления агрессивной реакции у группы животных,

• 2.    Установлено снижение порога чувст-

• назепама® по сравнению с группой, принимавшей комбинацию Феназе-пам®+Мексиприм® без наличия корреляции по времени суток (р˂0,05);

• 3.    У исследуемой группы после приема Феназепама® произошло нарушение вол-

• вительности к элетрическому току и повышение агрессивной готовности у группы алкоголизированных крыс на фоне Фе-
• нового суточного ритма, что проявилось в наличии лишь одного экстремума в течение исследуемого времени.

подвергнутых хронической алкоголизации, по сравнению с интактной группой (р˂0,05), кроме того, обнаружено снижение мезора ритма у группы после приема препарата на 42% (р˂0,05);