Сравнительное изучение содержания рецепторов эстрогенов и прогестерона в неизмененной, опухолевой и метастатической тканях при раке молочной железы

Развитие рака молочной железы (РМЖ) тесно связано с воздействием эстрогенов, которые реализуют свой биологический эффект через рецепторы. Считается, что наличие в опухоли рецепторов эстрогенов (ЕР) и прогестерона (ПР) является благоприятным прогностическим признаком и свидетельствует о чувствительности опухоли к регуляторному воздействию экзогенных гормонов. Отсутствие рецепторов может быть связано с тем, что клетка лишена их изначально или утратила в процессе своего роста под влиянием различных эндогенных или экзогенных факторов [4, 9, 13]. Изучение уровня экспрессии ЕР является важным не только в тканях первичных опухолей, но и в метастазах, поскольку действие адьювантной гормональной терапии при раке молочной железы (РМЖ) направлено на предупреждение их развития. Однако далеко не всегда рецепторный фенотип, присущий первичной опухоли, сохраняется в метастазах [6, 9].

Известно, что в неизмененной ткани и доброкачественных новообразованиях молочной железы рецепторы ЕР и ПР обнаруживаются значительно реже и в меньших количествах, чем в ткани опухоли [5, 14]. В раковых клетках уровень рецепторов стероидных гормонов может колебаться от 0 до 5000 фмоль/мг белка, что, вероятнее всего, связано с биологической гетерогенностью опухоли, степенью ее дифференцировки и пролиферативной активностью клеток. Показано, что в рецептор-негативных опухолях пролиферативные процессы протекают в 10 раз активнее, чем в рецептор-положительных [3, 12]. Пациенты с опухолями, содержащими низкий, но положительный уровень ПР (от 10 до 20 фмоль/мг белка), имели лучший прогноз, чем пациенты с ПР-отрицательными опухолями.

Таблица 1

Уровень рецепторов эстрогенов и прогестерона в неизмененной, опухолевой тканях и лимфогенных метастазах при раке молочной железы

Примечание: * – различия статистически значимы по сравнению с показателями в опухолевой ткани (р<0,05).

Существенно и то, что экспрессия ПР индуцируется эстрогенами, и, соответственно, ПР(-) новообразования при высоком уровне ЕР могут быть результатом нарушения передачи эстрогенного сигнала с рецептора или быть связаны с низким уровнем эстрогенов [1]. В связи с этим изучение содержания рецепторов эстрогенов и прогестерона в опухолях, окружающих ее перифокальных тканях, а также лимфогенных метастазах представляет значительный интерес.

Целью настоящей работы явилось сравнительное изучение уровня рецепторов эстрогенов и прогестерона в неизмененной, опухолевой тканях и в лимфогенных метастазах при РМЖ.

Материал и методы

Материалом для исследования явились образцы тканей, взятые от 40 больных с операбельными формами РМЖ со стадией T1-4N0_3M0 в возрасте 30–69 лет (средний возраст – 53,62 ± 1,08 года) Лимфогенные метастазы (N0) отсутствовали у 37 % пациентов, в 35 % наблюдений метастазами было поражено до 4 регионарных лимфоузлов (N1), в 26 % – от 5 до 10 (N2), в 2 % – более 10 (N3). Неизмененную, опухолевую и метастатическую ткани для исследования брали одновременно, непосредственно после выполнения радикального хирургического вмешательства и хранили при -70°С. При определении уровня ЕР и ПР образцы тканей молочной железы гомогенизировали в жидком азоте до порошкообразного состояния. Порошок экстрагировали 6–8-кратным объемом буфера. Для определения уровня рецепторов эстрогенов и прогестерона использовали надосадочную жидкость. Содержание рецепторов эстрогенов оценивалось радиолигандным ме- тодом и выражали в фмоль гормона, специфически связанного 1 мг цитозольного белка [2]. Эту величину рассчитывали с учетом разности между средней величиной общего связывания (в отсутствие конкурента) меченого гормона и неспецифического связывания меченого гормона (в присутствии конкурента). Рецептор-положительными считали ткани, в цитозолях которых содержалось более 10 фмоль специфически связанного эстрадиола или 10 фмоль специфически связанного прогестерона на 1 мг белка. При сопоставлении данных о статусе рецепторов эстрогенов и прогестерона в опухоли, оцененных уголь-декстрановым методом, с результатами иммуногистохимического исследования совпадение результатов было в 87 % наблюдений, что соответствует литературным данным, в которых этот разброс варьирует от 70 до 90 % [7].

Результаты и обсуждение

У больных РМЖ рецепторы эстрогенов присутствуют в неизмененной, опухолевой тканях, а также в метастатически измененных регионарных лимфатических узлах (табл. 1). В неизмененной ткани молочной железы и в опухолевой рецепторный статус эстрогенов был положительным в 58 % случаев, тогда как в лимфогенных метастазах лишь в 29 % образцов. Количественное определение показало, что в метастазах, сохранивших ЕР(+) статус, уровень рецепторов был значительно выше, чем в ткани опухоли. Также содержание рецепторов эстрогенов было достоверно выше в ЕР(+) неизмененной ткани по сравнению с опухолевой. В нашем материале ПР(-) опухоли преобладали над ПР(+), их частота составила 53

Таблица 2

Рецепторный статус в опухолевой, неизмененной тканях и лимфогенных метастазах у больных РМЖ в зависимости от характера лимфогенного метастазирования

% и 47 % соответственно. ПР(-) лимфогенные метастазы были выявлены в 95 % наблюдений. Уровень ПР в неизмененной ткани нами не изучался, но, по данным литературы, этот вид рецепторов встречается в 50 % образцов и не всегда соответствует их содержанию в опухоли [3]. Скорее всего, это связано с тем, что уровень ПР в тканях находится под двойным контролем. С одной стороны, он ограничивается содержанием эстрадиола, который через ЕР стимулирует синтез ПР. С другой стороны, прогестерон, который усиливает транспорт ПР в ядро, снижает их концентрацию в цитоплазме. Вероятнее всего, причиной различной величины эстроген- и прогестерон-связывающей способности отдельных типов клеток является морфологическая и биологическая гетерогенность клеточного состава опухоли.

Сравнение уровня рецепторов эстрогенов и прогестерона в ткани лимфогенных метастазов с первичной опухолью показало, что ЕР статус совпадал в 63 % случаев, а ПР статус – в 44 % (табл. 2). В 25% наблюдений ЕР статус первичной опухоли был положительным, а статус лимфогенных метастазов отрицательным, и в 12 % при ЕР(-) - статусе опухоли статус метастазов был ЕР(+). Изменение статуса ПР первичной опухоли с положительного на отрицательный в метастазах наблюдался в 50 % наблюдений, и лишь в 1 случае статус опухоли изменился с отрицательного на положительный в метастазах. При сравнении статуса ЕР опухоли и неизмененной ткани было обнаружено, что в 58 % случаев он не менялся. В 17 % при ЕР(+) опухоли выявлялась ЕР(-) неизмененная ткань, в 25 % опухоль была ЕР(-), а неизмененная ткань – ЕР(+). При сравнении значения ЕР в неизмененной ткани с метастазами тождественность выявлена в 64 %, в 27 % наблюдений при ЕР(+) неизмененной ткани статус метастазов был отрицательным, в 9 % при ЕР(-) неизмененной ткани метастазы были ЕР(+).

Низкое соответствие ЕР и ПР статуса тканей при РМЖ согласуется с данными других исследователей [2, 8, 9]. Важно отметить, что чаще из рецептор-положительных опухолей образуются рецептор-отрицательные метастазы. Возможно, несоответствие рецепторного статуса эстрогенов и прогестерона первичной опухоли, неизмененной ткани и метастазов может быть связано с тем, что при трансформации и прогрессии заболевания клетка способна изменять рецепторный статус, что обусловлено ее биологическими особенностями [9].

В настоящее время принято считать, что отсутствие регионарных метастазов (N0) или поражение метастазами не более 4 регионарных лимфоузлов (N1) является благоприятным прогностическим признаком, тогда как при N2 и N3 прогноз менее благоприятен. Представленные результаты показывают, что соответствие ЕР статуса опухоли и метастазов, а также изменение статуса с положительного в опухоли на отрицательный в метастазах или неизмененной ткани встречается одинаково часто при любом N. Изменение ЕР статуса с отрицательного в опухоли на положительный в метастазах и неизмененной ткани, а также при ЕР(-) неизмененной ткани наличие ЕР(+) метастазов наблюдается только при благоприятном прогнозе по N признаку. Для рецепторов прогестерона такой характер изменений не выявлен. Можно предположить, что изменения ЕР статуса тканей молочной железы, связанные с благоприятным прогнозом, могут быть результатом приобретения клеткой уникальных свойств, ограничивающих дальнейшее распространение процесса.

Одним из возможных механизмов, который объясняет изменения в содержании стероидных рецепторов, может быть то, что первоначально опухоль является разнородной по содержанию рецепторов стероидных гормонов. При метастазировании в итоге нарушения взаимосвязей между клетками часть из них отрывается и затем образует новые клоны. В этот период может изменяться доля рецептор-положительных и рецептор-отрицательных клеточных клонов, первоначально представленных в высокогетерогенной опухоли, часть из которых может затем диффундировать в регионарные лимфоузлы и отличаться меньшей гетерогенностью [11]. Механизм преобразования рецепторов женских половых гормонов в тканях молочной железы остается неясным и нуждается в дальнейшем изучении.

Таким образом, полученные данные о несоответствии статуса рецепторов стероидных гормонов в тканях молочной железы могут свидетельствовать о возможном изменении уровня рецепторов женских половых гормонов в течение прогрессии заболевания. Конверсию рецепторов эстрогенов с положительных в первичных опухолях на отрицательные в метастазах можно рассматривать в качестве одного из механизмов опухолевой прогрессии. Кроме того, этот феномен может играть важную роль в формировании резистентности метастатических клеток к адъювантной гормональной терапии при РМЖ.