Сравнительное изучение влияния системного и местного лечения ронколейкином на показатели иммунного статуса детей с атопической бронхиальной астмой

Аз. 1078, Азербайджан, Баку, ул. Бакиханов, 23.

Тел.: +994502223646.

ный вес тяжелых и осложненных форм бронхиальной астмы [2, 3].

В патогенезе развития атопической бронхиальной астмы ведущее место отводится Th2 типу иммунного ответа. Th1 и Th2 представляют собой альтернативные состояния экспрессии генов и функции СD4 Т-лимфоцитов. Th1 и Th2-зависимые иммунологические реакции взаимно подавляют друг друга на всех уровнях развития иммунного ответа [1, 4]. Исследования возможности фармакологического воз- действия на подавление Th2 иммунологических реакций в лечении атопических заболеваний являются одним из перспективных современных направлений в иммунологии [4].

Ронколейкин – рекомбинантный ИЛ-2 – лекарственный препарат, получаемый из клеток-продуцентов рекомбинантного штамма непатогенных пекарских дрожжей, в генетический аппарат которых встроен ген человеческого ИЛ-2 [5, 6]. Действие Рон-колейкина позволяет восстанавливать баланс между Th1 и Th2 типами иммунного ответа. В условиях превалирования Th2 -зависимого иммунного ответа введение экзогенного рекомбинантного ИЛ-2 способно выровнять баланс между типами иммунного ответа и способствовать уменьшению клинических проявлений атопических заболеваний [7].

Целью данного исследования явилось определение клинико-иммунологической эффективности лечения детей со среднетяжелым течением атопической бронхиальной астмы в условиях введения в современную комплексную терапию системного и местного (аэрозольтерапия) применения Ронколейкина.

Методы. В связи с поставленной целью исследования нами были обследованы 33 ребенка в возрасте от трех до 17 лет, страдающих среднетяжелой персистирующей бронхиальной астмой в стадии обострения. Обследование пациентов и клиниколабораторное исследование проводились на базе иммунологического отделения детской клинической больницы № 6 г. Баку и кафедры детских болезней II Азербайджанского медицинского университета. Диагноз бронхиальной астмы ставили в соответствии с критериями GINA (2006).

Все больные были разделены на две группы согласно способу введения Ронколейкина, который применялся в схемах комплексного лечения на фоне традиционной базисной противовоспалительной и бронхолитической терапии. Больные первой группы (15 человек) на фоне базисной терапии дополнительно получали Ронколейкин ингаляционно через небулайзер: дети до 5 лет – по 250 000 ед. с интервалом 48 часов четырехкратно; старше 5 лет – по 500 000 ед. по той же схеме. Больные второй группы (18 человек), помимо базисной терапии, получали Ронколейкин в инъекциях по следующей схеме: дети до 5 лет – по 250 000 ед. подкожно с интервалом 48 часов трехкратно; старше 5 лет – по 500 000 ед. по той же схеме.

Параметры иммунного статуса включали определение показателей клеточного звена иммунитета (CD3+, CD4+, СD8+, СD16+, СD56+, СD19+-лимфоциты) с использованием моноклональных антител («Bec-ton Dickinson», США). Идентификацию мембранных маркеров иммунокомпетентных клеток периферической крови проводили методом проточной цитометрии на проточном цитометре «Epics XL» («Beckman Coulter», Франция) с применением автоматического программного обеспечения. Для обработки результатов использовали программу СellQuest («Becton Dickinson», США), используя параметры прямого (FSC), бокового (SSC) светорассеяния.

Методом твердофазного иммуноферментного анализа определяли содержание ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-10, ИЛ-12, TNFα, IgA, IgM, IgG и IgE в сыворотке крови наблюдаемых больных с использованием коммерческих тест-систем, согласно прилагаемой к ним инструкции («Biosourse», США). Учет результатов ИФА проводили на планшетном фотометре «Multiscan plus» (Labsystems, Финляндия).

Результаты, полученные в процессе исследования, обрабатывались методом математической статистики при помощи компьютерного пакета обработки данных «STATISTICA 6,0» для работы в среде Windows [8]. Результаты исследования представлены в виде средней арифметической, средней ошибки средней арифметической и пределов колебаний (максимальное и минимальное значение). Достоверность изменений показателей по сравнению с нормой определяли при помощи парного критерия Вилкоксона. Различия считались достоверными при p<0,05.

Результаты. При иммунологическом исследовании у наблюдаемых детей отмечались выраженные дисфункциональные иммунологические нарушения, характеризующиеся снижением относительного содержания CD3⁺-лимфоцитов по отношению к контролю (р<0,01) на 32,4%, CD4⁺-лимфоцитов – на 36,1%, CD8⁺-лимфоцитов – на 26,7%, CD16⁺/56⁺-лимфоцитов – на 25,2%. При этом соотношение CD4⁺/CD8+ снизилось на 13,0%, в то же время отмечалось увеличение процентной концентрации CD19⁺-клеток – на 60,3% по отношению к контролю (р<0,01). Уровень общего IgE в сыворотке крови при среднетяжелом течении заболевания составил 346,6 МЕ/л (пределы колебаний – 333,5-359,7 МЕ/л), что значительно превышало средние данные в контрольной группе (213,8 МЕ/л, р<0,01) (табл. 1).

Таблица 1

Показатели иммунной системы при среднетяжелой персистирующей бронхиальной астме до начала лечения

Показатель	Среднетяжелое течение АБА (n=33)	Контрольная группа (n=15)
Т-лимфоциты, % CD3+	42,5 (40,9-44,1)*	62,9 (54,6-71,2)
Т-хелперы, % CD4+	23,8 (21,9-25,7)*	37,3 (29,6-45,0)
Т-супрессоры, % CD8+	18,7 (11,2-26,2)*	25,5 (18,2-32,8)
ИРИ, ед. CD4+/CD8+	1,27 (1,14-1,4)*	1,46 (1,34-1,58)
Т-лимфоциты/киллеры, % CD16+/56+	8,6 (6,2-11,0) *	11,5 (9.9-13,1)
В-лимфоциты, % CD19+, %	21,0 (16,5-25,5)*	13,1 (10,5-15,7)
IgE, МЕ/л	346,6 (333,5-359,7)*	213,8 (202,6-225,0)

П р и м еч а н и е : * – различия достоверны по отношению к контрольной группе (p<0,01).

При изучении цитокинового статуса нами было установлено повышение уровня TNFα в 8,0 ра (206,3±20,8 pg/ml против 25,5±2,5 pg/ml в контроле, p<0,001); ИЛ-12 в 2,1 раза (157,0±7,1 pg/ml при против 74,9±7,2 pg/ml в контроле, p<0,001); ИЛ-10 в 3,1 раза (7,45±0,39 pg/ml против 2,37±0,35 pg/ml в контроле, p<0,001); ИЛ-6 в 2,0 раза (17,1±0,35 pg/ml против 9,17±0,35 pg/ml в контроле, p<0,001), а также снижение содержания ИЛ-2 в 2,7 раза (2,0±0,23 pg/ml против 5,4±0,41 pg/ml в контроле, p<0,001).

В условиях стандартной терапии атопической бронхиальной астмы с включением ингаляций Ронко-лейкина была выявлена сильная, адекватная активация иммунной системы. При этом при среднетяжелой персистирующей бронхиальной астме по сравнению с показателями до лечения наблюдалось возрастание относительного содержания CD3+-лимфоцитов на 27,7%, CD4+-лимфоцитов – на 26,4%, CD8+-лимфоцитов – на 29,4%, CD16+/56+-лимфоцитов – на 16,2% (p<0,05) (табл. 2).

Наряду с этим при среднетяжелом течении заболевания отмечалось увеличение среднего значения иммунорегуляторного индекса в 1,01 раза, а также снижение процентного содержания CD19+-лимфоцитов – на 19,5% после лечения по отношению к показателям до лечения (p<0,05). Уровень общего IgE в сыворотке крови после проведения аэрозольтерапии Ронколейкином при среднетяжелом течении заболевания составил 283,6 МЕ/л (пределы колебаний 262,1-304,8 МЕ/л), что было в 1,2-1,5 раза ниже первоначальных значений (p<0,05).

У обследуемых больных атопической бронхиальной астмой среднетяжелого течения в динамике лечения отмечались следующие изменения в цитоки-новом статусе: снижение в сыворотке крови уровня TNFα – в 1,7 раза; ИЛ-12 – в 1,3 раза; ИЛ-10 – в 1,6 раза; ИЛ-6 – в 1,1 раза, а также повышение уровня ИЛ-2 – в 2,0 раза (р<0,05).

Во второй группе больных предлагаемая терапия с включением инъекций Ронколейкина (табл. 2) также вела к активации лимфоидного звена иммунной системы с увеличением относительной концентрации CD3+-лимфоцитов на 44,4%, CD4+-лимфоцитов – на 48,7%, CD8+-лимфоцитов – на 39,0%, CD16+/56+- лимфоцитов – на 24,4% (p<0,05). Кроме того, в этой группе больных в динамике лечения отмечалось увеличение среднего значения иммунорегуляторно-го индекса в 1,04 раза и снижение относительного содержания CD19+-лимфоцитов – на 40,9% по отношению к показателям до лечения (p<0,05). Уровень общего IgE в сыворотке крови после инъекций Рон-колейкина при среднетяжелом течении заболевания составил 253,9 МЕ/л (пределы колебаний – 223,1,8 МЕ/л), что было в 1,3 раза ниже первоначальных значений (p<0,05).

В цитокиновом статусе больных среднетяжелой персистирующей бронхиальной астмой на фоне инъекций Ронколейкина отмечалось аналогичное первой группе снижение уровней TNFα – в 2,4 раза; ИЛ-12 – в 1,4 раза; ИЛ-10 – 1,8 раза; ИЛ-6 – в 1,3 раза, а также повышение уровня ИЛ-2 – в 2,3 раза (р<0,05).

Обсуждение. В соответствии с заявленной целью исследования в ходе работы определялись закономерности изменений иммунных параметров и системы цитокинов у больных атопической бронхиальной астмой на фоне включения в схему лечения препарата Ронколейкин. Основанием для проведения терапия Ронколейкином послужили факты высокой актуальности иммунодефицита при атопической бронхиальной астме в сочетании с практическим отсутствием компонента иммунотропной поддержки в имеющихся лечебных стандартах.

Заключение. Таким образом, в результате проведенных исследований нами было установлено, что ингаляционный и инъекционный способы введения Ронколейкина, проводимые на фоне базисной противовоспалительной терапии, обеспечивают нормализацию показателей иммунитета у больных среднетяжелой персистирующей бронхиальной астмой. В условиях дальнейшего мониторинга отмечалась нормализация иммунологических параметров в группе больных со среднетяжелым течением атопической бронхиальной астмы, у которых в комплексном лечении заболевания использовали системное и местное введение Ронколейкина. Полученные результаты указывают на необходимость использования Ронко-лейкина в комплексной терапии детей, больных атопической бронхиальной астмой.

Таблица 2

Сравнительные показатели иммунной системы больных со среднетяжелым течением атопической бронхиальной астмы в динамике лечения Ронколейкином

Показатель	Среднетяжелое течение АБА(n=33)
	до лечения	Ронколейкин аэрозоль (n=15)	Ронколейкин инъекции (n=18)
Т-лимфоциты, % CD3+	42,5 (40,9-44,1)	54,3 (50,6-58,0) *	61,4 (58,8-64,0)*
Т-хелперы, % CD4+	23,8 (21,9-25,7)	30,1 (28,2-32,0)*	35,4 (33,9-36,9)*
Т-супрессоры, % CD8+	18,7 (11,2-26,2)	24,2 (21,1-27,3)*	26,0 (24,0-28,0)*
ИРИ, ед. CD4+/CD8+	1,35 (1,24-1,46)	1,37 (1,22-1,52)	1,41 (1,29-1,53)
Т-лимфоциты/киллеры, % CD16+/56+	8,6 (6,2-11,0)	10,0 (9,1-10,9)	10,7 (9,9-11,5)
В-лимфоциты,% CD19+,%	21,0 (16,5-25,5)	16,9 (15,7-18,1)*	14,9 (13,7-16,1)*
IgE, МЕ/л	343,5 (333,5-359,7)	283,6 (262,1-304,8)*	253,9 (223,1-284,7)*

П р и м еч а н ие : * – различия достоверны по сравнению с показателями до лечения (p<0,05).