Сравнительный анализ качественного и количественного состава лактобактерий у детей с отягощенным аллергоанамнезом и у здоровых детей

Аллергопатология является одной из актуальных проблем современной медицины. Прошедшее и, особенно, нынешнее столетие характеризуется непрерывно быстрым ростом аллергии, как в нашей стране, так и за рубежом [1]. По данным ВОЗ аллергические болезни регистрируется у 40% населения земного шара [2, 3, 4]. Темпы роста аллергопатологии значительно выше среди детей, чем среди взрослого населения [5, 6].

Известно, что важную роль в становлении иммунной системы ребенка играет микрофлора кишечника, в частности, грамположительные бактерии – бифидобактерии и лактобактерии. Компоненты клеточной стенки лактобактерий передают сигнал в клетку посредством связывания с TLR2 в комбинации с TLR6 [7]. Узнавание опосредуется через связывание с липидными цепями, которые после трансляции связываются со специфическим N-терминальным липопротеином в процессе секреции [8].

Активированные TLR претерпевают конформационные изменения и через цитозольный адаптерный белок MyD88 активируют ядерный транскрипционный фактор NF-kB, который регулирует транскрипцию большой группы генов, отвечающих за процесс воспаления, пролиферацию клеток и апоптоз. В частности, под влиянием лактобактерий происходит повышение фагоцитарной активности макрофагов и нейтрофилов, их перекисных систем с увеличением фагоцитоза, увеличение уровня Тh, TNF-α, IL 1, 6, 10 [9]. Кроме того, отмечена способность лакто- и бифидобактерий регулировать число В - лимфоцитов и антительный ответ, а также стимулировать продукцию sIgA в кишечнике и других биотопах [7, 10, 11].

В связи с этим, целью нашего исследования был сравнительный анализ качественного и количественного состава лактобактерий в группе детей с отягощенным аллергоанамнезом и в группе условно-здоровых детей, проживающих в г. Караганде.

Материалы и методы.

По дизайну исследование является проспективным, описательным, микробиологическим. Для реализации поставленных цели и задач нами были сформированы две группы – группа детей с отягощенным аллергоанамнезом (ДОА) и группа условно-здоровых детей (УЗД). Верификация наличия / отсутствия аллергопатологии у каждого конкретного ребенка проводилась врачом-аллергологом. Критериями включения ребенка в группу ДОА были: возраст 3-7 лет включительно, верифицированный врачом-аллергологом факт наличия аллергопатологии, отсутствие острого инфекционного заболевания, а также жалоб на какие-либо диспептические расстройства на момент обследования, отсутствие приема антибактериальных и пробиотических препаратов в течение месяца, предшествовавшего исследованию.

Известно, что на колонизацию кишечника влияет множество факторов, в числе которых способ родоразрешения, время первого прикладывания к груди, длительность грудного кормления, сроки введения прикорма и т.д. [12, 13, 14]. При формировании групп данный факт был учтен. По перечисленным выше ключевым параметрам, которые могли бы существенно отразиться на колонизации кишечника и полученных нами результатах, сформированные нами группы не отличались.

Объектом исследования были бактерии рода Lactobacillus, выделенные из фекалий обследованных детей. Выделение бактерий проводили при исследовании на дисбактериоз на среде для лактобактерий. Идентификацию проводили с использованием время-пролетной масс спектрометрии MALDI-ТOF на базе лаборатории коллективного пользования НИЦ КГМУ. Для статистической обработки материала использовали пакет программ Statistica 6.0 (StatSoft), Microsoft Excel (2003). Для оценки значимости различий между группами использовали критерий Фишера и тест Манна-Уитни [15, 16].

Результаты и обсуждение.

В группе детей, страдающих аллергопатологиями титр лактобактерий составил 3,2±0,76 Lg КОЕ/г кала, тогда как в группе УЗД – 6,32±1,06 Lg КОЕ/г кала (табл. 1). Выявленные различия носили статистически значимый характер (U эмп =5% р<0,01), что еще раз подтверждает важную роль изучаемых микроорганизмов в формировании адекватного иммунного ответа [17, 18].

Большой интерес представляло изучение видового разнообразия экологически значимых групп с выделением доминирующих видов. Для анализа данных о видовом составе лактобактерий были просуммированы все случаи выявления каждого отдельного вида лактобактерий (табл. 1).

Как видно из табл. 1, в группе ДОА явных доминирующих видов не выявлено, тогда как в группе УЗД доминирующими были три вида: L.acidophilus (31,1%), L.casei (21,3%) и L.rhamnosus (24,6%). Остальные виды были выявлены с меньшей частотой и суммарно не превысили 25%.

Далее мы провели сравнительный анализ встречаемости отдельных видов лактобактерий в составе кишечного микробиоценоза детей опытной и группы сравнения.

Таблица 1

Долевое участие различных видов лактобактерий в формировании микробиоценоза кишечника

Здесь за 100% принимали не сумму всех видов лактобактерий как в предыдущем случае, а обнаружение каждого отдельного вида лактобактерий у всех обследованных детей. Результаты представлены в таблице 2.

Количество различных видов лактобактерий, выделенных в обеих группах было одинаковым, однако в опытной группе не было обнаружено доминирующего вида. В группе сравнения, напротив, были отмечены три доминирующих вида: L.acidophilus (76,0%), L.casei (52,0%) и L.rhamnosus (60,0%).

С использованием критерия Фишера было установлено, что частота обнаружения этих трех видов была значимо выше в группе сравнения (табл. 1).

Таблица 2

Видовой состав лактобактерий в изучаемых группах

Примечание: * в зоне значимости (p<0,01) находятся значения критерия Фишера >2,31.

Полученные нами данные согласуются с данными литературы. Так, в работе Sjogren и соавт. указано, что дети, у которых развилась аллергия в первые пять лет жизни, в течение первой недели жизни были колонизированы L.rhamnosus, L.casei и L.paracasei с меньшей частотой, чем дети без аллергий. Кроме того, известно, что применение L.acidophilus, L.casei и L.reuteri в составе пробиотиков приводит к уменьшению проявлений аллергических заболеваний через изменение типа иммунного реагирования с переключением на Th-1 реагирование.