Сравнительный анализ копийности некоторых генетических локусов при раке пищевода

полиэтиленом (MembraneSlide 1,0 PEN), подвергали депарафинизации (о-ксилолом) и окрашивали гематоксилином-эозином. Из окрашенных препаратов с помощью лазерной микродиссекции (Palm MicroBeam, Carl Zeiss, Germany) выделяли опухолевые и нормальные клетки, из которых фенол-хлороформным методом проводили экстракцию ДНК. Методом RT-qPCR (Bio-Rad, CFX96, USA) проводили анализ относительной копийности 9 генетических локусов NF-kB1, CCND1, OCT4, FHIT, MLH1, MSH2, MSH3, PMS2 и C-myc. В качестве референсного гена использовали локусы GAPDH и ACTB. Статистический анализ проводили с использованием критерия Манна-Уитни.

Результаты: Для всех проанализированных генетических локусов было отмечено изменение дозы генов в опухолевых клетках пищевода относительно нормальных: увеличение копийности генов NF-kB1, CCND1, OCT4, FHIT, MLH1, MSH2, MSH3, PMS2 и C-myc. соответственно в 39,5%, 42%, 47%, 24%, 37%, 39,5%, 26%, 68% и 36% случаев и снижение копийно-сти генов NF-kB1, CCND1, OCT4, FHIT, MLH1, MSH2, MSH3, PMS2 и C-myc. соответственно в 32%, 21%, 16%, 16%, 29%, 32%, 24%, 10,5% и 39,5% случаев. Тем не менее, статистически значимое увеличение копийности (р<0,05) было обнаружено только для гена PMS2. При этом в группе с аденокарциномой пищевода увеличение копийности гена PMS2 в 1,88 раз относительно нормальных, а в группе с плоскоклеточным раком пищевода — в 2,12 раз. Статистически значимого изменения копийности других генов не обнаружено.

Заключение: Обнаружено увеличение копийности гена PMS2 в опухолевых клетках пищевода относительно нормальных. Белок, кодируемый этим геном, является ключевым компонентом системы репарации ошибочно спаренных нуклеотидов ДНК (MMR), возникающих во время репликации ДНК и гомологичной рекомбинации. Полученные данные свидетельствуют о потенциале показателя копий-ности гена PMS2 в качестве онкомаркера аденокарциномы и плоскоклеточного рака пищевода.

Цель: Анализ изменения копийности генетических локусов (CNV), ответственных за регуляцию клеточного цикла и репарацию ДНК, в опухолевых и нормальных клетках тканей пищевода для поиска потенциальных онкомаркеров у больных с плоскоклеточным раком пищевода и с аденокарциномой пищевода.

Материалы и методы: Наше исследование включало 38 пациентов в возрасте 33–76 года (12 женщин, 26 мужчин) с диагнозом рак средней трети и рак нижней трети пищевода, T1-4N0-3M0-1, стадия I–IV, проходившим плановое лечение в ФГБУ «РНИОИ» Минздрава России, с гистологически подтвержденнным диагнозом плоскоклеточный рак пищевода (n=24), степень дифференцировки G1–3 и аденокарцинома пищевода (n=14), степень дифференцировки G2–3. Материалом для исследования служили срезы тканей из FFPE-блоков толщиной 3мкм, которые фиксировали на предметных стеклах, покрытых

ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЕ ОПУХОЛИ том / vol. 9 №3 • 2019

MALIGNANT TUMOURS

Russian Society of Clinical Oncology

Российское общество клинической онкологии