Сравнительный анализ свободных аминокислот сбора лекарственных растений и его полиэкстракта сухого, обладающих нейропротекторным действием

Острая и хроническая недостаточность мозгового кровообращения является одной из ведущих причин заболеваемости, смертности и инвалидизации населения как в России, так и во всём мире. В связи с этим нами разрабатывается биологически активная добавка к пище не только с целью профилактики заболевания, но и для восстановления после перенесенного инсульта. В состав рекомендованных к использованию БАД к пище («Невро-Стронг», «Аминокомпозит-Р» и др.) входят аминокислоты [3].

Аминокислоты являются одним из самых распространенных классов биологически активных веществ. В живых организмах они находятся в связанном и свободном состоянии. Связанные аминокислоты как составные части белков участвуют во всех биохимических процессах живой клетки; свободные находятся в динамическом равновесии при многочисленных обменных реакциях, а также выпол-

Т.С. Серебрянская, Г.Г. Николаева, М.Ю. Тулонов и др. Сравнительный анализ свободных аминокислот сбора лекарственных растений и его полиэкстракта сухого, обладающих нейропротекторным действием няют специфическую функцию. Благодаря этому свободные аминокислоты широко применяются при профилактике и лечении многих заболеваний головного мозга, в т.ч. острой и хронической недостаточности мозгового кровообращения [1, 2].

Нами разработан многокомпонентный сбор лекарственных растений и полиэкстракт сухой на его основе, обладающие нейропротекторной активностью. В состав сбора входят шлемник байкальский Scutellaria baicalensis Georgi , астрагал перепончатый Astragalus membranaceus (Fisch.) Bunge , боярышник кроваво-красный Crataegus sanguine Pall . и др. [4]. Данные компоненты представляют собой различные морфологические части растений – соцветия, плоды, траву, побеги, корневища и корни. Они подобраны по принципу сочетания разностороннего действия на организм и дублирования оказываемого действия.

Цель работы: изучение качественного и количественного состава свободных аминокислот сбора лекарственных растений и его полиэкстракта сухого в сравнительном аспекте.

Методика

Качественное обнаружение аминокислот проводили с помощью нингидриновой реакции [1, 2]. К 1 мл очищенного водного извлечения сбора лекарственных растений прибавляли 1 мл свежеприготовленного 0,25 %-ного раствора нингидрина в спирте этиловом и осторожно нагревали в течение пяти минут на кипящей водяной бане. Появлялось постепенно усиливающееся красно-фиолетовое окрашивание.

Для идентификации содержания свободных аминокислот использовали автоматический аминокислотный анализатор марки ААА-339 (Чехия).

1,000 г (точная навеска) измельченного сбора с частицами, проходящими сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм, экстрагировали водой, очищенной на кипящей водяной бане в течение 30 минут. Водное извлечение очищенной хлороформом от липидов и гидрофобных пигментов, осаждение полисахаридов проводили двойным количеством 96 %-ного спирта этилового. Полученный осадок удаляли центрифугированием, концентрирование водного извлечения проводили на роторном испарителе при температуре 35 ºС.

Полученный сухой остаток растворяли в цитрат-литиевом буферном растворе (рН 2.2), осаждение белков проводили 30%-ной сульфосалициловой кислотой, образец центрифугировали и анализировали. Содержание аминокислот определяли по площади пиков идентифицируемых аминокислот.

По приведенной выше методике проводили определение содержания свободных аминокислот в полиэкстракте сбора сухом.

Результаты

С помощью автоматического аминокислотного анализатора марки ААА-339 (Чехия) были определены свободные аминокислоты сбора и его полиэкстракта сухого. Результаты представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1

Свободные аминокислоты сбора лекарственных растений

№	Аминокислота	мг/1 г	№	Аминокислота	мг/1 г
1	Треонин*	0,019262	13	Аланин	0,010179
2	Таурин	0,118946	14	α-аминомасляная кислота	0,224449
3	Серин	0,006846	15	Валин*	0,109781
4	Цистин	0,136534	16	Глутаминовая кислота	1,047312
5	Метионин*	0,095903	17	γ-аминомасляная кислота	0,319271
6	Изолейцин*	0,074958	18	Фенилаланин*	0,103524
7	Цистеиновая кислота	0,028801	19	Тирозин	0,055753
8	Аспарагиновая кислота	0,028156	20	Этаноламин	0,005609
9	Аспарагин	0,560968	21	Орнитин	0,011241
10	Лейцин*	0,033675	22	Лизин*	0,088235
11	Глутамин	0,457765	23	Гистидин*	0,205857
12	Глицин	0,120433	24	Аргинин*	1,013431

*-незаменимые аминокислоты

Таблица 2

№	Аминокислота	мг/1 г	№	Аминокислота	мг/1 г
1	Треонин*	0,287138	11	Глутаминовая кислота	0,895135
2	Серин	0,283770	12	γ-аминомасляная кислота	0,233112
3	Цистин	0,811013	13	Фенилаланин*	0,087623
4	Метионин*	0,161868	14	Тирозин	0,087229
5	Изолейцин*	0,250929	15	Этаноламин	0,033726
6	Аспарагиновая кислота	0,179173	16	Орнитин	0,006386
7	Лейцин*	4,740365	17	Лизин*	0,036975
8	Глицин	0,413050	18	Гистидин*	0,623560
9	Аланин	0,511629	19	Аргинин*	0,107968
10	Валин*	0,128279

* – незаменимые аминокислоты.

Свободные аминокислоты полиэкстракта сбора сухого

Выводы

В результате проведенных экспериментов был определен качественный и количественный состав свободных аминокислот сбора и его полиэкстракта сухого. Обнаружено 24 свободных аминокислоты в составе сбора и 19 – в составе полиэкстракта сбора сухого. Среди обнаруженных аминокислот 9 из 10-ти являются незаменимыми.

В композиции в максимальном количестве содержится аргинин* (1,013431 мг/1г), в минимальном – серин (0,006846 мг/1г).

В полиэкстракте сбора сухом в максимальном количестве содержится лейцин* (4,740365 мг/1г), в минимальном – орнитин (0,006386 мг/1г).

При сравнении полученных данных обнаружено, что в сборе в отличие от его полиэкстракта сухого присутствуют цистеиновая кислота, таурин, аспарагин, глутамин, α-аминомасляная кислота; содержание аргинина значительно больше, а содержание аланина, цистина и лейцина меньше, чем в полиэкстракте сбора сухом.