Стратегия создания биомедицинских клеточных продуктов на основе репрограммирования генома методом плазмонной лазерной трансфекции

Цель: адаптация технологии репрограммирования генома на основе лазерной трансфекции для создания биомедицинских клеточных продуктов. Материал и методы. В работе использованы разработанные платформы для оптотрансфекции на основе многолуночных культуральных планшетов с покрытием рабочей поверхности монослоем наночастиц золота. Модельные клеточные эксперименты по доставке молекулярного агента пропидиум иодида выполнены на клетках мышиных макрофагов линии RAW 264.7. Трансфекцию клеточных монослоев, адгезированных на платформах 24-луночных планшет со слоями нанозвезд золота, проводили путем однократного 2D-сканирования импульсным лазером с узкосфокусированным пучком. Оценку жизнеспособности и эффективности модификации клеток проводили посредством прямой микроскопии и с применением метаболических тестов. Результаты. Определены оптимальные рабочие режимы лазерной оптотрансфекции клеток макрофагов мыши RAW 264.7: энергия импульса – 1,4 мкДж, длительность импульса – 200 нс, скважность импульса – 10 кГц, скорость сканирования – 0,025 м/с. Выявлены значения минимальной стартовой конфлюэнтности монослоя 40%, эффективности трансфекции 78±7,6% жизнеспособности клеток 84±9,3%. Заключение. В условиях модельных экспериментов in vitro продемонстрирована возможность тонкой регулировки параметров оптотрансфекции для обеспечения воспроизводимых результатов генетической модификации лимфоцитоподобных клеток с высокими показателями эффективности и жизнеспособности.