Субпопуляции цитотоксических Т-лимфоцитов периферической крови человека в отдалённые сроки после начала хронического облучения
Рубрика: Научные статьи
Статья в выпуске: 1 т.35, 2026 года.
Бесплатный доступ
Исследование функциональной активности и дифференцировки цитотоксических Тлимфоцитов у хронически облучённого населения из когорты реки Течи важно для прояснения отдельных патогенетических механизмов радиационноиндуцированного канцерогенеза. Цель работы – количественно оценить активированные цитотоксические Тлимфоциты и клетки в субпопуляциях цитотоксических Тлимфоцитов у хронически облучённого населения из когорты реки Течи в отдалённом периоде после начала радиационного воздействия. В основную группу вошли 53 человека из когорты реки Течи: средний возраст – 74,9 года, средняя доза облучения красного костного мозга (ККМ) – 567,857,3 мГр. Пациентов разделили на три подгруппы по дозе облучения, рассчитанной на ККМ: первая – 70270 мГр (n=18); вторая – 271650 мГр (n=17); третья – более 650 мГр (n=16). В группу сравнения вошли 19 человек, проживающих в экологически чистых сельских районах, аналогичного возраста, пола, этнической принадлежности. Доля CD16+ цитотоксических Тлимфоцитов у людей из третьей подгруппы (99,25%) превышала аналогичный показатель в первой и второй подгруппах: 94,50% (р=0,015) и 95,54% (р=0,037) соответственно. Во второй подгруппе абсолютное количество наивных цитотоксических Тлимфоцитов (0,026109/л) и цитотоксических Тлимфоцитов центральной памяти (0,072109/л) было ниже, чем у лиц из первой подгруппы, – 0,040109/л (р=0,047) и 0,099109/л (р=0,031) соответственно. Статистически значимых корреляционных связей между исследуемыми показателями и накопленными дозами облучения не обнаружено. В основной группе выявлены корреляции между полом и относительным (SR=0,32, p=0,022) и абсолютным (SR=0,32, p=0,026) количеством цитотоксических Тлимфоцитов центральной памяти, этнической принадлежностью и долей терминально дифференцированных цитотоксических Тклеток (SR=0,37, p=0,007), этнической принадлежностью и абсолютным количеством цитотоксических Тлимфоцитов центральной памяти (SR=0,38, p=0,006) и цитотоксических Тклеток эффекторной памяти (SR=0,31, p=0,028). Наблюдаемые в отдалённые сроки особенности активации и дифференцировки цитотоксических Тлимфоцитов у практически здоровых (в пределах возрастной нормы) хронически облучённых людей свидетельствуют о некотором напряжении в системе основных клетокэффекторов адаптивного иммунного ответа и могут отчасти обеспечивать радиорезистентность обследованных лиц. Результаты предварительные.
Похожие статьи в разделе Патология сердечно-сосудистой системы. Сердечно-сосудистые заболевания
Короткий адрес: https://sciup.org/170211680
IDS: 170211680 | УДК: 616.155.32:614.876]-076.5 | DOI: 10.21870/0131-3878-2026-35-1-138-150
Subpopulations of cytotoxic T-lymphocytes in human peripheral blood in the long-term period after the onset of chronic exposure
To clarify certain pathogenetic mechanisms of radiation-induced carcinogenesis it is important to in-vestigate functional activity and differentiation of cytotoxic T-lymphocytes in chronically exposed pop-ulation from the Techa River Cohort. The objective of the study is to perform quantitative assessment of activated cytotoxic T-lymphocytes and cells in subpopulations of cytotoxic T-lymphocytes in chron-ically exposed people-members of the Techa River Cohort in the long-term period after the onset of radiation exposure. The main group consisted of 53 members of the Techa River Cohort: mean age was 74.9 years, mean dose to the red bone marrow (RBM) made up 567.857.3 mGy. Patients were subdivided into three subgroups by dose calculated to the RBM: the first group – 70-270 mGy (n=18); the second group – 271-650 mGy (n=17); the third one – >650 mGy (n=16). The comparison group consisted of 19 people similar in age, sex, ethnicity who resided in ecologically-friendly rural areas. The fraction of CD16+ cytotoxic T-lymphocytes in people from the 3rd subgroup (99.25%) exceeded that in people from the 1st and 2nd subgroups: 94.50% (p=0.015) and 95.54% (p=0.037), respectively. In the 2nd subgroup the absolute number of naïve cytotoxic T-lymphocytes (0.026109/l) and central memory T-lymphocytes (0.072109/l) was lower than that in the members of the 1st subgroup – 0.040109/l (р=0.047) and 0.099109/l (р=0.031), respectively. No statistically significant correlations between the studied parameters and accumulated doses were revealed. Correlations between sex and relative (SR=-0.32, p=0.022) and absolute (SR=-0.32, p=0.026) number of cytotoxic central memory T-lymphocytes, ethnicity and fraction of terminally differentiated cytotoxic T-cells (SR=-0.37, p=0.007), ethnicity and absolute number of the cytotoxic central memory T-lymphocytes (SR=0.38, p=0.006) and cytotoxic effector memory T cells (SR=0.31, p=0.028) were established in the main group. The specific features of activation and differentiation of cytotoxic T-lymphocytes in apparently healthy (within the age-appropriate normal value range) chronically exposed individuals indicate some potential differences in the functioning of the main effector-cells of adaptive immune response and could be partially involved in the development of radio-resistance in the studied people. The results are preliminary.
Текст научной статьи Субпопуляции цитотоксических Т-лимфоцитов периферической крови человека в отдалённые сроки после начала хронического облучения
В настоящее время подходы, позволяющие максимально корректно оценить уровни, последствия и потенциальные риски воздействия ионизирующего излучения (ИИ) на население, работников и пациентов, являются предметом научной дискуссии. Механизмы реализации адаптивного ответа и индукции радиационно-индуцированной нестабильности генома при облучении в малых дозах неизвестны, активно ведётся поиск маркеров повышенного канцерогенного риска. Фактический материал, накопленный в области радиационной эпидемиологии и радиобиологии, не позволяет исключить канцерогенный риск малых доз ИИ и рассчитать относительный риск канцерогенных эффектов малых доз ИИ с приемлемой статистической значимостью [1]. Важная
роль иммунных нарушений в реализации таких отдалённых эффектов хронического радиационного воздействия, как радиационно-индуцированный канцерогенез [2] не вызывает сомнений, однако конкретные патогенетические механизмы требуют дальнейшего изучения. Роль системы адаптивного иммунного ответа в элиминации онкотрансформированных клеток доказана. Есть данные о том, что при воздействии ИИ на CD3+CD8+ лимфоциты в эксперименте в присутствии интерлейкинов (ИЛ) ИЛ-4 и ИЛ-12 образуются CD8+ Тreg клетки, которые секретируют преимущественно ИЛ-10 и интерферон гамма (ИФНγ) и способны угнетать Т-клеточные иммунные ответы, опосредованные Т-хелперами (Th) первого (Th1) и второго (Th2) типа [3]. Выраженность эффекторных свойств определяется стадией дифференцировки клетки. Наивные Т-цитотоксиче-ские клетки (Tс) в тимусе подвергаются селекции, в результате которой определяется специфичность Т-клеточных рецепторов лимфоцитов, попадающих в кровоток [4].
При этом иммунологические исследования в отдалённом периоде после воздействия ИИ на человека, включающие анализ функциональной активности клеток – эффекторов противоопухолевого иммунного ответа, в доступной литературе относительно малочисленны. В основе таких научных работ лежат многолетние наблюдения за достаточно разнородными по условиям облучения и влиянию комплекса факторов нерадиационной природы когортами людей, что сильно затрудняет интерпретацию полученных результатов.
Среди общей популяции цитотоксических T-лимфоцитов (СD3+СD4–СD8+ клеток) в периферической крови человека на основании экспрессии на клеточной мембране рецепторов CD45RA и CD62L [5] могут быть выделены субпопуляции «наивных» Tс клеток (CD45RA+CD62L+), терминально дифференцированных Tс лимфоцитов (CD45RA+CD62L–), Tс клеток центральной (CD45RA–CD62L+) и эффекторной памяти (СD45RA–CD62L–). Перечисленные субпопуляции цитотоксических T-лимфоцитов были количественно оценены в данной работе.
В качестве маркеров активации лимфоцитов, проявляющих цитотоксическую и/или цитолитическую активность, наиболее интересны молекулы CD38 [6]. СD38 – мембранный гликопротеин, обладающий рядом ферментативных функций, который расщепляет никотинамидаденин-динуклеотид (НАД) и модулирует клеточный гомеостаз НАД [7]. Это один из «ранних» активационных маркеров лимфоцитов, который участвует в регуляции концентрации внутриклеточного кальция, в активации Т-лимфоцитов и в процессах их селекции в тимусе, проявляет эктонуклео-тидазную, аденозиндифосфатрибозилциклазную, циклический аденозиндифосфат (АДФ)-рибозилгидролазную и другие активности. Т-лимфоциты экспрессируют СD38 после стимуляции антителами против специфических антигенных рецепторов, взаимодействие СD38 с эктомоно-АДФ-рибозилтрансферазами является одним из механизмов, определяющих баланс между выживанием и программируемой клеточной гибелью активированных клеток. В иммунокомпетентных клетках CD38 отвечает за передачу сигналов от активированных рецепторов лимфоцитов и дендритных клеток [6]. В норме рецептор CD38 участвует в регуляции обменных процессов, воспалении и цитокиновой регуляции, он был идентифицирован как маркер клеточной поверхности при гематологических онкологических заболеваниях и используется в онкотерапии как мишень для уничтожения CD38-положительных опухолевых клеток цитотоксическими анти-CD38-антителами [7]. Молекула CD38 экспрессируется на активированных Т-клетках (Tс и Т-клетках натуральных киллерах – TNK), В-клетках, натуральных киллерах (NK) и некоторых других типах клеток. Наличие молекул CD38 и CD8 на NK-клетках периферической крови человека позволяет оценить цитотоксическую активность клеток. Предполагается, что высокой цитолитической активностью обладают NK-клетки, экспрессирующие и CD38, и CD8 [8]. При идентификации популяций Tс (СD3+СD4–СD8+) клеток по экспрессии CD45RA и CD62L регистрируется повышение количества CD56+ клеток в линии «наивные» – центральной памяти (ТСМ) – эффекторной памяти (ТЕМ) – терминально дифференцированные CD45RA+ (TEMRA) [9].
Субпопуляционный состав цитотоксических Т-лимфоцитов у хронически облучённого населения из когорты реки Течи ранее не изучался, но может представлять значительный научный интерес в контексте развития радиационно-индуцированной патологии.
Цель работы – количественная оценка активированных цитотоксических Т-лимфоцитов и клеток в субпопуляциях цитотоксических Т-лимфоцитов у хронически облучённого населения из когорты реки Течи.
Материалы и методы
В исследование были включены 72 человека, родившиеся в 1959 г. или ранее, принадлежащие к Уральской когорте лиц, подвергшихся аварийному облучению [10]. Все участники зарегистрированы в Единой информационной системе Уральского научно-практического центра радиационной медицины (г. Челябинск) [11] и проходили лечение в клиническом отделении этого центра в соответствии с установленным порядком.
Перед сбором биологического материала все участники исследования заполнили анкету, прошли медицинский осмотр у терапевта и предоставили добровольное информированное согласие на участие, подготовленное в соответствии с Хельсинкской декларацией 2013 г. и одобренное этическим комитетом ФГБУН УНПЦ РМ ФМБА России.
Включение пациентов в исследование осуществлялось при отсутствии у них на момент получения крови следующих состояний: острых и обострившихся хронических воспалительных заболеваний, почечной и печёночной недостаточности, подтверждённых онкологических и аутоиммунных патологий, а также эпизодов острого нарушения мозгового кровообращения или черепномозговых травм в течение трёх месяцев до начала исследования. Кроме того, исключались лица, проходившие гормональную, антибактериальную, химиотерапию или радиотерапию в течение шести месяцев до исследования, а также подвергавшиеся медицинским процедурам с использованием ИИ за аналогичный период.
Для каждого участника исследования были рассчитаны персональные дозы радиационного воздействия, охватывающие облучение красного костного мозга (ККМ), тимуса и периферических лимфоидных органов (ТиПЛО) с использованием дозиметрической системы TRDS 2016D [12].
Основную группу составили 53 хронически облучённых человека, у которых накопленная индивидуальная доза облучения, рассчитанная на ККМ, была не менее 70 мГр. В контрольную группу вошли 19 участников, у которых суммарная доза радиационного воздействия за всю жизнь не превышала 70 мГр, а мощность облучения ККМ оставалась ниже 1 мГр/год.
Для исследования использовали периферическую кровь с антикоагулянтом K3-EDTA, полученную пункцией кубитальной вены, в объёме, не превышающем 500 мкл.
Общий анализ крови с подсчётом лейкоформулы для каждого обследуемого выполняли специалисты клинико-диагностической лаборатории Центра.
Субпопуляции цитотоксических Т-лимфоцитов периферической крови исследовали методом многоцветной проточной цитометрии на приборе LongCyte C3111 (Chenglang Biotechnology, КНР), данные проточной цитометрии анализировали при помощи встроенного аутентичного программного обеспечения проточного цитометра. Клетки окрашивали с помощью специфичных к целевым мембранным рецепторам антител, конъюгированных с флуорохромами: СD3-FITC, СD56-РЕ, СD16-PerCP, CD8-PC7, СD45-APC, CD62L-EV450 (Elabscience, КНР), CD38-PO (Exbio, Чехия), CD45RA-APC-AF750 (Beckman Coulter, США). Лизирование эритроцитов проводили раствором VersaLyse (Beckman Coulter Inc., США) по инструкции производителя.
При оценке субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови в рамках комплексного иммунологического исследования, частью которого являются представленные результаты, фенотип натуральных киллеров определяли как CD3–СD4–СD8–CD16+CD56+ (маркеры активации – СD8, CD38), фенотип TNK-клеток – как CD3+СD4–СD8–CD16+CD56+ (маркер активации – CD38), фенотип Tс лимфоцитов – как CD3+СD4–СD8+ (маркеры активации – CD38, CD16, CD56), Th клеток – как CD3+СD4+СD8– [9, 13].
Статистический анализ данных выполняли в программном обеспечении Statistica (демонстрационная версия).
Анализ соответствия распределения данных нормальному закону проводился с применением критерия Колмогорова-Смирнова. Для параметров, распределённых по нормальному закону (возраст, дозовые характеристики), рассчитывались среднее арифметическое, стандартная ошибка среднего и диапазон значений (минимум-максимум), а их сравнение выполнялось с использованием t-критерия Стьюдента.
Переменные, не соответствующие нормальному распределению (иммунологические показатели), описывались с использованием медианы и интерквартильного размаха (25-й и 75-й квартили) и анализировались с помощью U-критерия Уилкоксона-Манна-Уитни. Для оценки различий в категориальных данных (пол, этническая принадлежность) применялся χ²-критерий.
Статистическую значимость различий устанавливали при доверительной вероятности меньшей либо равной 0,05. Анализ взаимосвязей между переменными осуществлялся посредством расчёта коэффициента ранговой корреляции Спирмена, при этом уровень статистической значимости составлял менее 5%.
Результаты
В табл. 1 представлена характеристика исследуемых групп.
Таблица 1 Характеристика исследуемых групп
|
Показатель, единицы измерений |
Группа сравнения, N=19 |
Основная группа, N=53 |
|
|
Возраст на момент исследования, лет Накопленная доза облучения ККМ, мГр Накопленная доза облучения ТиПЛО, мГр |
M±SE (min-max) |
73,1±1,0 (67,0-80,0) 19,2±3,9 (2,1-55,1) 7,8±2,1 (0,5-35,8) |
74,9±0,5 (68,0-83,0) 567,8±57,3 (88,6-1785,2) 117,5±15,4 (12,15-591,8) |
|
Половой состав,% (n) |
мужчины женщины |
31,6 (6) 68,4 (13) |
32,1 (17) 67,9 (36) |
|
Этническая принадлежность,% (n) |
славяне тюрки |
47,4 (9) 52,6 (10) |
26,4 (14) 73,6 (39) |
В основной группе средняя накопленная доза облучения ККМ составила 567,8±57,3 мГр с диапазоном значений от 88,6 до 1785,2 мГр. Для ТиПЛО этот показатель в среднем достигал 117,5±15,4 мГр и варьировал от 12,15 до 591,8 мГр. Средний возраст участников на момент исследования составил 74,9±0,5 лет, с минимальным и максимальным значениями 68,0 и 83,0 года соответственно.
Основная группа была разделена на три подгруппы в зависимости от доз облучения, рассчитанных на ККМ: 70-270 мГр (n=18), 271-650 мГр (n=17) и свыше 650 мГр (n=16).
В группе сравнения средняя накопленная доза облучения, рассчитанная на ККМ, была равна 19,2±3,9 мГр (диапазон значений: 2,1-55,1 мГр), средняя доза облучения ТиПЛО – 7,8±2,1 мГр (диапазон значений: 0,5-35,8 мГр), средний возраст к моменту выполнения исследования в данной группе составил 73,1±1,0 год (диапазон значений: 67,0-80,0 года).
Статистический анализ показал отсутствие значимых различий между группами по возрасту (p=0,088), а также по гендерному (p=0,805) и этническому составу (p=0,163). В основной группе женщины составили 67,9%, а представители тюркской (татары, башкиры) этнической группы – 73,6% от общего числа участников. В группе сравнения доля женщин была 68,4%, а доля тюрков – 52,6%.
Результаты исследования абсолютного и относительного количества активированных цитотоксических Т-лимфоцитов в периферической крови у людей, подвергшихся хроническому радиационному воздействию, и в группе сравнения представлены в табл. 2.
Таблица 2
Абсолютное и относительное количество активированных цитотоксических Т-лимфоцитов в периферической крови обследованных людей
|
Показатель |
Группа сравнения, N=19 |
Основная группа, N=53 |
Подгруппы основной группы |
||
|
70-270 мГр, N=18 |
271-650 мГр, N=17 |
более 650 мГр, N=18 |
|||
|
Tс (СD3+CD4–CD8+), % от лимфоцитов |
22,60 (17,40-25,99) |
23,03 (19,40-28,19) |
25,12 (20,40-30,32) |
23,22 (19,24-25,71) |
21,44 (18,61-30,44) |
|
Tс (СD3+CD8+), клеток/мкл |
517 (385-605) |
463 (366-673) |
492 (385-754) |
418 (301-513) |
527 (352-673) |
|
Tс CD38+, % от СD3+CD4–CD8+ лимфоцитов |
0,11 (0,06-0,24) |
0,10 (0,03-0,27) |
0,06 (0-0,22) |
0,26 (0,05-0,46) |
0,12 (0,05-0,20) |
|
Tс СD38+, клеток/мкл |
0,68 (0,24-0,13) |
0,48 (0,08-1,34) |
0,60 (0-1,20) |
0,88 (0,08-1,34) |
0,65 (0,18-1,30) |
|
Tс CD16+, % от СD3+CD4–CD8+ лимфоцитов |
97,74 (90,31-99,34) |
96,94 (91,81-99,22) |
94,50 (87,23-97,55) |
95,54 (91,38-98,25) |
99,25 (95,88-99,59) p*=0,015 p**=0,037 |
|
Tс СD16+, клеток/мкл |
484 (361-566) |
432 (341-652) |
443 (352-748) |
408 (262-484) |
430 (350-670) |
|
Tс CD56+, % от СD3+CD4–CD8+ лимфоцитов |
80,87 (13,41-94,91) |
69,24 (12,69-94,37) |
54,07 (25,78-93,33) |
92,85 (17,49-95,56) |
38,97 (11,76-94,15) |
|
Tс СD56+, клеток/мкл |
177 (66-491) |
248 (88-413) |
235 (128-409) |
261 (78-399) |
199 (83-439) |
Примечание: Данные представлены в формате: Me (Q1-Q3) – медиана (25-75 процентили); р* – значения доверительной вероятности по сравнению по сравнению с дозовой подгруппой «70-270 мГр»; p** – значение доверительной вероятности различий по сравнению с дозовой подгруппой «271-650 мГр».
Как видно из табл. 2, статистически значимых различий в относительном и абсолютном количестве цитотоксических Т-лимфоцитов, а также клеток, экспрессирующих активационные маркеры CD16, CD56 и CD38 на мембране, между основной группой и группой сравнения не выявлено. Однако в подгруппе с накопленной дозой облучения ККМ свыше 650 мГр доля CD16+ клеток среди Tс (СD3+CD4–CD8+) лимфоцитов в периферической крови достигала 99,25%, что статистически значимо превышало показатели подгруппы с дозой 70-270 мГр (94,50%, p*=0,015) и подгруппы 271-650 мГр (95,54%, p**=0,037).
Результаты анализа количественного содержания цитотоксических Т-лимфоцитов в периферической крови, находящихся на разных стадиях дифференцировки, у лиц, подвергшихся хроническому радиационному облучению, и в группе сравнения представлены в табл. 3.
Таблица 3
Количество цитотоксических Т-лимфоцитов, находящихся на разных стадиях дифференцировки, в периферической крови обследованных людей
|
Показатель |
Группа сравнения, N=19 |
Основная группа, N=53 |
Подгруппы основной группы |
||
|
70-270 мГр, N=18 |
271-650 мГр, N=17 |
более 650 мГр, N=18 |
|||
|
Наивные Tс (CD45RA+CD62L+), % от СD3+CD4–CD8+ лимфоцитов |
7,20 (3,49-11,51) |
7 55 (4,75-9,67) |
8,00 (5,70-8,83) |
5,29 (4,24-10,60) |
7,87 (3,67-11,81) |
|
Наивные Tс (CD45RA+CD62L+), клеток/мкл |
35 (20-56) |
31 (22-52) |
40 (31-50) |
26 (15-43); p*=0,047 |
30 (23-56) |
|
Терминально-дифференцированные Tц (CD45RA+CD62L–), % от СD3+CD4–CD8+ лимфоцитов |
21,52 (17,14-33,13) |
23,56 (17,73-31,94) |
21,07 (13,81-42,09) |
25,34 (19,75-30,75) |
22,27 (18,93-29,47) |
|
Терминально-дифференцированные Tц (CD45RA+CD62L–), клеток/мкл |
116 (77-156) |
124 (66-153) |
131 (79-158) |
101 (66-161) |
128 (58-151) |
|
Tс центральной памяти (CD45RA– CD62L+), % от СD3+CD4–CD8+ лимфоцитов |
14,15 (10,61-20,12) |
17,84 (12,76-24,15) |
20,05 (14,5-28,15) |
17,78 (14,52-20,15) |
13,54 (9,09-24,36) |
|
Tс центральной памяти (CD45RA– CD62L+), клеток/мкл |
75 (51-115) |
88 (58-123) |
99 (70-136) |
72 (61-84) p*=0,031 |
98 (44-146) |
|
Tс эффекторной памяти (СD45RA– CD62L–), % от СD3+CD4–CD8+ лимфоцитов |
49,34 (46,32-57,09) |
48,27 (35,28-53,93) |
44,55 (35,04-52,32) |
50,49 (41,83-56,33) |
48,27 (38,95-51,48) |
|
Tс эффекторной памяти (СD45RA– CD62L–), клеток/мкл |
258 (131-294) |
205 (155-325) |
195 (159-373) |
205 (152-260) |
279 (141-357) |
Примечание: Данные представлены в формате: Me (Q1-Q3) – медиана (25-75) процентиль; р* – значения доверительной вероятности по сравнению по сравнению с дозовой подгруппой «70-270 мГр».
Согласно представленным в табл. 3 данным, не обнаружено статистически значимых различий относительного и абсолютного количества клеток в субпопуляциях цитотоксических Т-лимфоцитов, экспрессирующих в разных комбинациях молекулы CD45RA и CD62L, между основной группой и группой сравнения.
В дозовой подгруппе «271-650 мГр» медианы абсолютного количества наивных Tс с фенотипом CD45RA+CD62L+ в периферической крови (26 клеток/мкл) и Tс-клеток центральной памяти с фенотипом CD45RA–CD62L+ (72 клеток/мкл) были статистически значимо ниже аналогичных показателей у людей из дозовой подгруппы «70-270 мГр» (40 клеток/мкл, р**=0,047 и 99 клеток/мкл, р**=0,015 соответственно).
При анализе влияния факторов радиационной природы на исследуемые показатели, характеризующие адаптивный иммунный ответ, статистически значимых корреляционных связей между абсолютным и относительным количеством активированных цитотоксических Т-лимфоцитов в периферической крови и накопленными дозами облучения, рассчитанными на ККМ и ТиПЛО у обследованных лиц, не выявлено. Также не установлено статистически значимых корреляций между абсолютным и относительным содержанием субпопуляций Т-цитотоксических лимфоцитов, характеризующихся экспрессией молекул CD45RA и CD62L в различных комбинациях, и величиной доз облучения, рассчитанных на ККМ и ТиПЛО.
При оценке влияния отдельных факторов нерадиационной природы на исследуемые иммунологические показатели не обнаружено статистически значимых корреляционных связей между полом, этнической принадлежностью, возрастом обследованных людей и абсолютным и относительным количеством цитотоксических Т-лимфоцитов в периферической крови, экспрессирующих активационные маркеры CD16, CD56 и CD38, как в основной группе, так и в группе сравнения.
В группе сравнения не отмечено статистически значимых корреляционных связей между полом, этнической принадлежностью, возрастом обследуемых людей и абсолютным и относительным количеством цитотоксических Т-лимфоцитов в периферической крови, находящихся на разных стадиях дифференцировки.
У обследованных людей из основной группы выявлены статистически значимые отрицательные корреляции между полом (среди мужчин показатели выше), относительным (SR=-0,32, p=0,022) и абсолютным (SR=-0,32, p=0,026) количеством Tс лимфоцитов центральной памяти, этнической принадлежностью (показатели выше у тюрков) и долей терминально-дифференцированных Tс клеток (SR=-0,37, p=0,007), а также положительные корреляционные связи между этнической (показатели славян выше) принадлежностью и абсолютным количеством Tс лимфоцитов центральной памяти (SR=0,38, p=0,006) и Tс клеток эффекторной памяти (SR=0,31, p=0,028).
Обсуждение
Представленные данные в целом согласуются с классическими представлениями иммунологии о влиянии пола, этноса и возраста на показатели иммунного статуса.
Статистически значимые корреляции, выявленные у облучённых людей и отсутствующие у необлучённых лиц, согласуются с опубликованными раннее результатами исследования иммунного статуса людей, пострадавших от хронического низкоинтенсивного техногенного воздействия ИИ в диапазоне преимущественно малых и средних доз [14] и свидетельствуют об адаптационных процессах в системе гемопоэза. Механизмы адаптации, видимо, несколько различаются у людей разного пола, этноса и возраста. Это может быть связано как с разной интенсивностью радиационно-индуцированного ускоренного иммунного старения, так и с влиянием различных комбинаций факторов нерадиационной природы у разных групп населения. Поскольку сила корреляционного анализа зависит от объёма выборки на данном этапе НИР необходимо осторожно интерпретировать результаты корреляционного анализа.
По литературным данным у условно здоровых доноров наивные (CD45RA+CD62L+) Tс клетки составляют в среднем около 30% от общего числа CD3+CD4–CD8+ лимфоцитов в периферической крови, TEM Tс (CD3+CD4–CD8+CD45RA–CD62L–) – в среднем около 35%. На долю TEMRA Tс лимфоцитов (CD3+CD4–CD8+CD45RA+CD62L–) приходится около 25% от всех Tс клеток. Около 10% от общего количества циркулирующих CD3+CD4–CD8+ лимфоцитов составляют клетки с фенотипом CD45RA–CD62L+ или TCM [4].
Доля CD3+CD4–CD8+ лимфоцитов в периферической крови человека зависит от возраста обследованных доноров. По мере старения организма увеличивается количество цитотоксических T-лимфоцитов центральной и эффекторной памяти и уменьшается количество наивных и TEMRA Tс клеток. Абсолютное и относительное количество «наивных» клеток с фенотипом CD3+CD4–CD8+CD45RA+CD62L+ в периферической крови отрицательно коррелирует с возрастом обследованных людей. Сообщается об увеличении с возрастом относительного количества цитотоксических ТСМ клеток и умеренной положительной взаимосвязи между возрастом обследованных доноров и относительным и абсолютным содержанием TEMRA Tс клеток [4].
Данные о степени экспрессии СD38 на Т-лимфоцитах периферической крови здоровых людей, представленная в литературе, значительно варьируют. Согласно одним исследованиям, спонтанная экспрессия CD38 на Tс и Th клетках у здоровых доноров не превышает 10% [15], в то время как другие источники сообщают о среднем уровне CD38-позитивных цитотоксических Т-лимфоцитов 43±12% [16]. Вариабельность оценки экспрессии СD38 может быть обусловлена существенным влиянием на результаты цитометрического анализа экспрессии мембранных клеточных рецепторов качества используемых моноклональных антител и подбора флюорохромов [17].
В периферической крови ликвидаторов аварии на Чернобыльской атомной электростанции (ЧАЭС) через 5 лет после инцидента отмечалось снижение относительного и абсолютного содержания CD8+ лимфоцитов у лиц, получивших дозы внешнего γ-излучения 0,1-0,5 Гр [18]. Через 10-14 лет после аварии у ликвидаторов, пострадавших от внешнего γ-излучения в дозах от 0,01 до 0,5 Гр, наблюдалось в числе других изменений в иммунном статусе значительное снижение числа CD8+ лимфоцитов, относительного содержания CD16+CD56+ клеток в крови, фагоцитарной активности нейтрофилов. В те же сроки другие авторы регистрировали повышение у ликвидаторов количества CD3+CD16+CD56+ лимфоцитов. Отмечено снижение количества CD8+ клеток в периферической крови ликвидаторов с заболеваниями сердечно-сосудистой системы через 10-12 лет после аварии на ЧАЭС и дозозависимое снижение доли CD8+ клеток у ликвидаторов с поглощёнными дозами 0,3 Гр и менее [18].
У лиц из когорты реки Течи, имеющих в анамнезе хронический лучевой синдром (ХЛС), отмечались наиболее выраженные изменения иммунитета (преимущественно со стороны Т-клеточного звена иммунитета – снижение доли CD4+ лимфоцитов), при этом изменения отдельных иммунологических показателей регистрировались до развития ХЛС [19]. Изменения в системе иммунитета хронически облучённых лиц регистрируются в течение десятилетий, компенсированы, имеют провоспалительный характер [20] и проявляются преимущественно как дисбаланс цитокинов [21]. В отдалённом периоде после начала хронического облучения риски смертности от злокачественных новообразований, включая лейкозы, в когорте реки Течи повышены [2].
Результаты данного исследования свидетельствуют о высокой степени экспрессии молекул CD16 и/или CD56 на Т-цитотоксических (CD3+СD4–СD8+) лимфоцитах и, косвенно, о перекрытии функций этих клеток, натуральных киллеров и TNK-клеток, что можно рассматривать как один из компенсаторных механизмов, обеспечивающих радиорезистентность обследованных людей из основной группы.
Предполагается, что при нарушениях компенсаторных процессов в условиях возраст-ассо-циированного хронического воспаления изменения противоопухолевой активности иммунокомпетентных клеток у перенёсших хроническое облучение людей могут являться одним из ключевых механизмов патогенеза злокачественных новообразований [14].
Выводы
-
1. У хронически облучённых и необлучённых людей не обнаружено статистически значимых различий в абсолютном и относительном количестве CD3+CD8+ лимфоцитов в периферической крови.
-
2. У обследованных лиц из основной группы и группы сравнения не выявлено статистически значимых различий в абсолютном и относительном количестве активированных CD3+CD8+ клеток в периферической крови. Доля CD16+ цитотоксических Т-лимфоцитов статистически
-
3. Абсолютное и относительное количество цитотоксических «наивных», терминальнодифференцированных Т-клеток, CD3+CD8+ лимфоцитов центральной и эффекторной памяти статистически значимо не различается у хронически облучённых и необлучённых людей. В подгруппе лиц с дозами облучения ККМ от 271 до 650 мГр абсолютное количество «наивных» CD3+CD8+ клеток и цитотоксических Т-лимфоцитов центральной памяти статистически значимо ниже, чем у людей с дозами облучения, рассчитанными на ККМ, от 70 до 270 мГр.
значимо выше у облучённых людей с наиболее высокими дозами облучения ККМ по сравнению с другими дозовыми подгруппами.
Выявленные в отдалённые сроки особенности активации и дифференцировки цитотоксических Т-лимфоцитов у практически здоровых (в пределах возрастной нормы) хронически облучённых людей свидетельствуют о некотором напряжении в системе основных клеток-эффекторов адаптивного иммунного ответа и могут отчасти обеспечивать радиорезистентность обследованных лиц. Результаты являются предварительными, вызывают интерес и предполагают продолжение исследований.
