Судебно-ветеринарная экспертиза при отравлении животных Конфидором экстра

Введение. В настоящее время в Государственный каталог пестицидов и агрохимикатов, разрешенных для применения на территории РФ, включено более 1,5 тыс. препаратов. Неоникотиноиды – современная группа инсектицидов, включающая более 50 препаратов на основе пяти действующих веществ: имидаклоприда, тиаклоприда, тиаметоксама, клонитиа-нидина и ацетамиприда. На основе имидаклоприда только для растениеводства создано более 40 препаратов [1]. Основным представителем неоникотиноидов является Конфидор экстра®. Препарат официально зарегистрирован в 91 государстве и активно используется как для работ в личных подсобных хозяйствах, так и для опрыскивания посадок площадью в сотни гектар, имеющихся в распоряжении ведущих агрохолдингов [2].

Многообразие действующих веществ, входящих в состав препаративных форм пестицидов, безусловно, способствует преодолению резистентности вредителей и повышению урожайности сельскохозяйственных культур, однако при нарушении регламентов их применения возрастает риск возникновения как острых, так и хронических отравлений животных и человека. Анализ источников литературы показывает, что диагностика отравлений животных «старыми» группами пестицидов разработана, поэтому для ветеринарных специалистов установление причины появления «внезапных массовых заболеваний» животных не является сложной задачей. Иная картина наблюдается при анализе материалов по токсикологии современных групп пестицидов. Например, анализ отечественной литературы показал, что в России нет статистики по отравлениям животных неоникотиноидами, так как нет методик определения их остаточных количеств в биологических объектах, что, в свою очередь, затрудняет постановку диагноза на отравление. Однако данные зарубежной литературы свидетельствуют о существовании проблемы, связанной с применением неонико-тиноидов в растениеводстве. В работах [3–8] описаны случаи отравления людей имидакло-придсодержащими пестицидами.

Таким образом, перед судебноветеринарным экспертом стоит сложная задача, связанная с доказательством причины предполагаемого отравления животных тем или иным веществом, для решения которой необходимы специальные знания в области токсикологии пестицидов, в том числе полученные в эксперименте.

Цель исследования : представить результаты экспериментальных исследований, которые могут служить доказательством в суде при подозрении на отравление животных Конфидором экстра^® и оформлении судебно-ветеринарной экспертизы.

Объекты и методы исследования. Краткая характеристика пестицида. Конфидор экстра® – контактно-кишечный инсектицид системного действия класса хлорникотинилов (неоникотиноиды), применяемый в растение- водстве против широкого круга вредителей на посевах зерновых и овощных культур. Препаративная форма Конфидора экстра® – воднодиспергируемые гранулы светло-бежевого цвета, содержащие 700 г/кг имидаклоприда, без запаха, хорошо растворимы в воде. Имидаклоприд – 1-(6-хлор-3-пиридилметил)-N-нитро-имидазолидин-2-илиденамин по классификации IUPAC и 1-[(6-хлор-3-пиридинил) метил]-N-нитро-2-имидазолидинимин по классификации CAS представляет собой бесцветные кристаллы со слабым характерным запахом. Химическая формула вещества – C9H10ClN5O2, молекулярная масса – 255,7. Период защитного действия Конфидора экстра® составляет 15–30 дней. Срок ожидания при однократной обработке пестицидом сельскохозяйственных культур – от 3 до 60 дней [9]. Производители пестицида рекомендуют учитывать высокую остаточную активность имидаклоприда вследствие возможного накопления в почве, так как период полураспада препарата – до 100 дней [9].

Гигиенические нормативы для имидаклоприда в России следующие: ПДК в почве – 0,04 мг/кг, ПДК в воде водоемов – 0,03 мг/дм³. Для зерновых колосовых и плодовых семечковых культур гигиенические нормативы в России не установлены [10]. Конфидор экстра^® относится к среднетоксичным соединениям с ЛД 50 = 536 мг/кг, пестицид не обладает материальной кумуляцией (коэффициент кумуляции более 5), раздражающим, аллергизирующим и сенсибилизирующим действием [11].

Причины отравления и возможные пути поступления Конфидора экстра^®. Отравление животных пестицидом возможно при скармливании кормов и использовании воды для поения, содержащих остаточные количества пестицида. Высокое содержание препарата в растениях возможно при нарушении сроков ожидания, увеличении кратности обработок и концентрации используемого раствора. Последние два нарушения могут иметь место в период массового размножения вредителей растений. Не исключено загрязнение стоячих водоемов (например, котлованов) остатками пестицида после промывания в них используемой для обработки техники. Поэтому судебно-ветеринарному эксперту необходимо получить ответы на следующие вопросы:

– Какие пестициды применяют для обработки сельскохозяйственных угодий, какой метод при этом используют в данном хозяйстве?

– Когда и в какое время проводилась последняя обработка? Какие погодные условия (ветер, дождь и т. д.) отмечали в этот период?

– Где осуществляли выпас и поение животных?

Кроме того, судебно-ветеринарный эксперт должен тщательно осмотреть место происшествия, ближайшие овраги и леса с целью возможного обнаружения использованной тары.

Клинические признаки острого отравления Конфидором экстра^®. У животных первые симптомы отравления появляются через 5–10 мин после попадания в организм токсических доз пестицида. Легкая степень отравления проявляется седацией, мышечной слабостью, сонливостью, гипотонией желудочно-кишечного тракта. Животные ложатся на живот, прикрывают глаза, избегают любых движений, если передвигаются, то с осторожностью. Через двое суток после поступления пестицида общее состояние животного нормализуется.

Летальные дозы Конфидора экстра® вызывают тяжелые расстройства нервной системы. Через 10–15 мин у животных регистрируют нарушение координации движений, атаксию, блефароспазм, атонию желудочно-кишечного тракта, вздутие живота, напряженность и болезненность брюшной стенки. Через 20–40 мин у животных наблюдают повышение рефлекторной активности (чрезмерная ответная реакция на прикосновение или звук), периодически возникающий тремор в области головы, груди и задней части туловища и периодически возникающие клонические судороги. Дыхание у животных аритмичное, тахипноэ сменяется кратковременными периодами апное. Животные погибают в течение первых двух суток от остановки дыхания в один из приступов судорог.

У птиц острое отравление Конфидором экстра® характеризуется прогрессирующим развитием атаксии и блефароспазмом. Через 10– 15 мин после введения пестицида в токсических дозах цыплята сначала приседают на конечности, потом ложатся на бок, опускают крылья и закрывают глаза, из клоаки выделяются водянистые испражнения. Через 40–90 мин после интоксикации у птиц наблюдают мелкий перио- дический тремор мышц хвоста и крыльев, а также боковые движения головой (судороги мышц шеи). Между приступами судорог голова птиц, как правило, опущена. Снижение температуры тела – до 37,5 ± 1,6 °С является прогностически неблагоприятным признаком. Птицы впадают в глубокую седацию, не реагируют на внешние раздражители и в течение 1–3 суток после отравления погибают.

У собак при пероральном введении Конфи-дора экстра ® в дозах 20, 30 и 40 мг/кг отмечают двигательное возбуждение, через 40–50 мин регистрируют периодический тремор мышц сначала грудных, потом тазовых конечностей. Тремор проходит через 10–16 ч после интоксикации. Рвоты, саливации и диареи у собак не наблюдали.

При невозможности доставки материала в течение суток в химико-токсикологический отдел лаборатории возможна его фиксация путем замораживания.

Методики химико-токсикологического анализа при подозрении на отравление Конфидо-ром экстра®. Определение остаточных количеств имидаклоприда в биологическом материале проводят методами ТСХ и ВЭЖХ [15–17]. Для этого навеску органов или тканей животных массой от 50 до 200 мг измельчают, экстрагируют ацетоном трижды, экстракт фильтруют, объединяют и упаривают. Сухой остаток растворяют 0,2 мл ацетона и наносят на пластину для тонкослойной хроматографии «Сорбфил». Пластинку помещают в камеру, насыщенную парами гексан:ацетон (4:3), после подъема растворителя ее высушивают, окрашивают раствором ортотолидина и помещают под УФ-лампу. Имидаклоприд проявляется в виде синего пятна на светлом фоне. Обработку результатов проводят по формуле

А ∙

Х= Р∙   , где X – содержание имидаклоприда в пробе, мг/кг; A – количество имидаклоприда в пробе, найденное на пластинке, мкг; P – масса пробы, г; R – среднее значение определения, найденное предварительно, %.

При определении имидаклоприда методом ВЭЖХ пробоподготовку проводят по той же схеме, сухой остаток растворяют в 1 мл ацетонитрила и вносят в жидкостный хроматограф «Хромос-ЖХ 301» с детектором спектрофотометрическим UVV 104М, используют колонку Диасфер-110С-16 (150 × 4 мм) с размером пор сорбента 5 мкм, в качестве элюента используют смесь «ацетонитрил – вода» в соотношении 30:70. Рабочая длина волны 297 нм. В качестве элюента используют подвижную фазу «ацетонитрил – вода» в соотношении 30:70. Скорость потока – 1 мл/мин. Время удерживания имидаклоприда – 2,937 ± 0,298 мин. Обработку результатов анализа проводят методом абсолютной градуировки, содержание имидаклоприда в биологических объектах (X, мг/кг) вычисляют по формуле

X = C × H2 × V × 100 / H1 × P × R где X – содержание имидаклоприда в пробе, мг/кг; C – концентрация стандартного раствора имидаклоприда, введенного в хроматограф, мкг/см3; H1 – высота хроматографического пика стандарта имидаклоприда, мм; H2 – высота хроматографического пика имидаклоприда в пробе, мм; V – общий объем конечного раствора пробы, мл; P – масса пробы, г; R – среднее значение определения, найденное предварительно, %.