Связь показателей иммунного и микроэлементного статусов у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом

Изучена связь показателей клеточного иммунитета и микроэлементного статуса у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом. Обследовано 135 больных среднетяжелой и тяжелой формой ГЛПС. Иммунофенотипирование лимфоцитов периферической крови осуществлялось методом прямой иммунофлуоресценции с помощью проточного цитофлуориметра. Содержание микроэлементов (цинка, селена, алюминия, свинца, ртути, кадмия) проводили с помощью масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой. Выявили прямые корреляционные связи между Zn, Se и CD16+, 56+; между цинком и уровнем CD3+ и CD4+ и отрицательные корреляционные связи между Pb, Al, Cd и уровнем CD16+, 56+; концентрацией свинца, алюминия и уровнем CD3+ и CD4+, свидетельствующие об отрицательном влиянии изменений микроэлементного статуса при ГЛПC на показатели клеточного иммунитета.

В патогенезе геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПC) иммунные механизмы занимают одно из ведущих мест. Данные об изменениях в клеточном звене иммунитета при ГЛПC противоречивы [2; 4]. Исследований особенностей взаимоотношений между иммунитетом и обеспеченностью микроэлементами у больных ГЛПC не проводили. Учитывая вышеизложенное, была поставлена цель исследования — изучить связь показателей клеточного иммунитета и микроэлементного статуса у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом.

Материалы и методы. В исследование включили 135 больных, находившихся на стационарном лечении в МУ «Городская клиническая больница № 13» г. Уфы с серологически подтвержденным методом непрямых флуоресцирующих антител диагнозом ГЛПC, из них 109 мужчин (80,7 %) и 26 женщин (19,3 %). Возраст обследованных 18 — 55 лет (средний возраст 37,4 ± 2,6 года). Cреднетяжелая форма выявлена у 73 больных (54,1 %), тяжелая — у 62 (45,9 %). Контрольную группу составили 30 практически здоровых лиц, сопоставимых по полу и возрасту.

Иммунофенотипирование лимфоцитов периферической крови осуществлялось методом прямой иммунофлуоресценции с помощью проточного цитофлуориметра «FACS Calibur» (фирма «Becton Dickinson», CHIA) с помощью реагентов фирмы «Becton Dickin son» с характеристикой основных маркеров иммунокомпетентных клеток (CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD25+, CD3+/HLA-DR, индекс CD4/8).

Параллельно с исследованием показателей иммунитета изучали содержание микроэлементов в плазме крови. Определяли концентрацию цинка, селена, алюминия, свинца, ртути, кадмия, стронция с помощью масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой (ICP-MS; Elan-9000, PerkinElmer, CHIA).

Математическую обработку результатов исследования проводили с использованием стандартного статистического пакета программ Statistica 7.0 for Windows. Cреднее значение М и ошибку среднего значения m вычисляли в Microsoft Excel. Cтепень взаимосвязи между признаками оценивали методом корреляционного анализа по Cпирмену путем вычисления коэффициента корреляции (г). Различия считались статистически значимыми при р < 0,05.

Результаты. При исследовании субпопуляционного состава лимфоцитов было выявлено, что у больных среднетяжелой и тяжелой формами ГЛПC в период максимально выраженных клинических проявлений (олигурический) наблюдается уменьшение абсолютного числа Т-клеток (CD3⁺), субпопуляции хелперов/индукторов (CD4⁺) и иммунорегуляторного коэффициента по сравнению с контрольной группой и снижение числа субпопуляций натуральных киллеров (CD16⁺). В полиурическом периоде

ГЛПС отмечается увеличение изучаемых субпопуляций лимфоцитов.

Изучение микроэлементного статуса у больных ГЛПС в олигурическом периоде выявило повышение концентрации токсич ных микроэлементов — алюминия, свинца, ртути, кадмия, стронция и снижение эссенциальных микроэлементов — цинка и селена, прямо коррелирующее с тяжестью течения болезни (таблица).

Таблица

Содержание микроэлементов в крови при среднетяжелой и тяжелой формах ГЛПС (М ± т)

Примечание. группе р < 0,05; ** группе р < 0,01.

достоверность при сравнении с аналогичным показателем в контрольной достоверность при сравнении с аналогичным показателем в контрольной

При анализе корреляций между концентрацией микроэлементов и показателями иммунитета у больных среднетяжелой формой ГЛПС установлено следующее: между цинком и уровнем Т-лимфоцитов-хелперов существует прямая сильная связь (г = +0,75, р < 0,05); концентрация цинка находится в прямой связи с уровнем Т-лимфоцитов (г = = +0,73, р < 0,05) и натуральных киллеров (г — +0,64, р < 0,05); выявлена прямая сильная связь между концентрацией селена и натуральными киллерами (г = +0,71, р < 0,05); между алюминием и уровнем Т-лимфоцитов определена отрицательная средняя связь (г = -0,53, р < 0,05); концентрация алюминия находится в отрицательной средней связи с уровнем Т-лимфоцитов-хелперов

(г = -0,57, р < 0,05) и с уровнем натуральных киллеров (г = -0,55, р < 0,05); между кадмием и уровнем натуральных киллеров выявлена отрицательная сильная связь (г = = -0,71, р < 0,05); уровень свинца находится в отрицательной средней связи с уровнем натуральных киллеров (г = -0,67, р < 0,05), уровнем Т-лимфоцитов (г = -0,65, р < 0,05) и с уровнем Т-лимфоцитов-хелперов (г = = -0,72, р < 0,05). У больных тяжелой формой ГЛПС отмечалось усиление выявленных корреляционных связей, т.е. сильнее прослеживалось влияние нарушения микроэлементного баланса на показатели иммунитета.

Обсуждение. Снижение концентрации селена и цинка в разгар ГЛПС можно объяснить повышенным расходом данных микроэлементов. У больных ГЛПС наблюдается усиление интенсивности процессов липопероксидации, что приводит к усиленному расходу антиоксидантных ферментов, например супероксиддисмутазы и глютатион-пероксидазы, а цинк и селен входят в активные центры этих ферментов. По результатам нашего исследования выяснилось, что во всех стадиях ГЛПС, при любой форме заболевания между цинком и показателями CD3+, CD4+ существует сильная положительная корреляционная связь. Наши данные согласуются с данными других исследований [1; 3]. Сильная положительная корреляционная связь между цинком и показателями основных субпопуляций лимфоцитов, возможно, связана с ферментативной ролью Zn в синтезе ДНК и делении клеток. Кроме того, тиму-лин (тимусный гормон), необходимый для созревания Т-лимфоцитов, является цинкза-висимым гормоном. Zn является мощным активатором Т-клеточного иммунитета. Он влияет на пролиферацию и некоторые функции Т-лимфоцитов.

Выраженный дефицит цинка видоизменяет характер распределения свинца между органами и тканями и определяет повышенный выход токсичных микроэлементов из паренхимы почек за счет конкурентных взаимодействий [3]. Накопление токсичных металлов в периоде олигурии при ГЛПС мож но объяснить также тем, что нарушается один из основных путей выделения микроэлементов — через почки. Высокие концентрации токсичных микроэлементов в сыворотке крови в олигурическом периоде ГЛПС отрицательно влияют на содержание Т-лимфоцитов и Т-хелперов. Наши данные согласуются с данными M.S. Golub et al., которые в экспериментах на мышах, находящихся на искусственно обогащенной алюминием диете, выявили значительное снижение содержания Т-хелперов и синтез Т-лимфоцитами ряда цитокинов, характерных для ТМ-клеток [5].

Выводы

• 1.    У больных ГЛПС в олигурическом периоде выявлено повышение концентрации токсичных микроэлементов — алюминия, свинца, ртути, кадмия, стронция и снижение уровня эссенциальных микроэлементов — цинка и селена, прямо коррелирующее с тяжестью течения болезни.

• 2.    У больных ГЛПС выявлены прямые корреляционные связи между Zn, Se и CD16⁺, 56⁺; между цинком и уровнем CD3⁺ и CD4⁺ и отрицательные корреляционные связи между Pb, Al, Cd и уровнем CD16⁺, 56⁺; концентрацией свинца, алюминия и уровнем CD3⁺ и CD4⁺, свидетельствующие об отрицательном влиянии изменений микроэлемент-ного статуса при ГЛПС на показатели клеточного иммунитета.