Токсичность ядовитого секрета гадюк Vipera renardi и V. berus для ящериц

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Ядовитый секрет. Характеристика использованных в работе образцов яда, полученных в ходе плановых экспедиций по территории Волжского бассейна, представлена в табл. 1. Каждый образец представляет собой яд, собранный от взрослых змей обоего пола, пойманных в одно время в одном месте.

Отбор яда у гадюк проводили механическим способом, массируя пальцами ядовитые железы, и собирали в чашки Петри. Ядовитый секрет высушивали 12-14 дней в эксикаторе над хлористым кальцием и хранили образцы яда в темноте при температуре 5-7ºС.

Экспериментальные животные. Эксперименты были проведены на взрослых особях разноцветной ящурки и сеголетках прыткой ящерицы.

Взрослые разноцветные ящурки отловлены в окрестностях хутора Песковатка Городищенского района Волгоградской области в конце июля 2015 г. Масса отловленных ящурок составляла 3,0-6,8 г, и для определения ЛД50 образцов ядовитого секрета были сформированы группы животных со сходными массами.

Сеголетки прыткой ящерицы отловлены в окрестностях с. Мордово Ставропольского района Самарской области в начале сентября 2014 г. Масса отловленных сеголетков была 1,1-2,3 г, и при определении ЛД50 также использовали группы животных с минимальным разбросом весовых характеристик.

Определение ЛД₅₀ образцов яда гадюк проводили по стандартной методике: группам экспериментальных животных вводили возрастающие количества ядовитого секрета. Инъекции растворов яда проводили микрошприцом (1-30 мкл)

Таблица 1. Места отлова и количество гадюк, от которых получали ядовитый секрет

Вид Место отлова Количество V. renardi Волгоградская обл., Камышинский район, окрестности с. Верхняя Добринка 20 Астраханская обл., Красноярский район, окрестности пос. Досанг 35 Ульяновская обл., Радищевский район, окрестности с. Вязовка 22 V. berus Самарская обл., г. Самара, Красноглинский район 24 Республика Татарстан, Лаишевский район, окрестности с. Сорочьи Горы 11 внутрибрюшинно в правую нижнюю четверть брюшка с вентральной стороны. Для инъекций использовали растворы ядовитого секрета в физиологическом растворе (0,9%-ный хлорид натрия) - яд V. renardi использовали в концен-трации10,0 мг/мл (для разноцветных ящурок) и 20,0 мг/мл (для прытких ящериц), яд V berus - 40,0 мг/мл. В качестве контроля использовали группу животных, которым вводили одинаковый объем физиологического раствора. В контрольной группе выживаемость животных составляла 100%. Наблюдения за ящерицами продолжали 24 часа, после чего подсчитывали количество погибших и выживших животных. Значения ЛД50 каждого образца яда рассчитывали стандартным методом пробит-анализа [6, 7]. Значения ЛД50 выражали в мкг/г живого веса ящериц и представляли в виде среднего значения и его ошибки.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Установленные нами значения ЛД₅₀ ядов восточной степной и обыкновенной гадюк для разноцветных ящурок приведены в табл. 2. В данной серии экспериментов количество ящериц для определения ЛД₅₀ каждого образца равнялось 15 (5 групп по 3 ящурки в каждой); концентрация раствора яда V renardi составляла 10,0 мг/мл, V berus - 40,0 мг/мл; испытывались дозы яда V renardi - 1-5-10-20-40 мкг/г, V. berus - 10-20-50100-150 мкг/г.

Из этих результатов следует, что для разноцветной ящурки яд ренаровых гадюк является гораздо более токсичным, чем яд обыкновенной гадюки: межвидовые различия среднесмертельной дозы оказались статистически значимыми на 1%-ном уровне. Токсичность яда ренаровых гадюк из исследованных в пределах Поволжья локалитетов не различается на 5%-ном уровне значимости, однако повышается по направлению с севера на юг. Полученные результаты не противоречат высказанному ранее предположению [13] о связи пищевых преференций гадюк с токсичностью их яда. В данном случае мы можем отметить, что разноцветная ящурка не отмечена в рационе обыкновенной гадюки. Сравнительно низкую токсичность яда гадюки Ренара из Ульяновской области по сравнению с Волгоградской и Астраханской областями можно связать с тем, что разноцветная ящурка является обычным видом в местах отлова из Нижнего Поволжья, но не населяет Ульяновскую область. В Нижнем Поволжье данный вид ящериц является одним из главных компонентом рациона восточной степной гадюки [2, 9, 11, 15, 16].

Также мы определили значения ЛД₅₀ яда гадюк для прытких ящериц (табл. 3). В этих экспериментах количество ящериц для определения ЛД₅₀ каждого образца равнялось 24 (4 группы по 6 ящериц в каждой); концентрация раствора яда V. renardi составляла 20,0 мг/мл, V berus - 40,0 мг/

Таблица 2. ЛД₅₀ ядов восточной степной и обыкновенной гадюк для разноцветных ящурок

Яд	Место отлова гадюк	ЛД 50 , мкг/г
V. renardi	Астраханская обл.	8,7±4,02
	Волгоградская обл.	9,9±5,75
	Ульяновская обл.	17,8±4,88
V. berus	Самарская обл.	69,7±16,15

Таблица 3. ЛД₅₀ ядов восточной степной и обыкновенной гадюк для прытких ящериц

Яд	Место отлова гадюк	ЛД 50 , мкг/г
V. renardi	Волгоградская обл.	261,0±44,40
V. berus	Республика Татарстан	502,9±76,38

Примечания: n - количество ящериц для определения ЛД50каждого образца яда (4 группы по 6 шт.); концентрация раствора яда V. berus - 40,0 мг/мл, V. renardi - 20,0 мг/мл мл; испытывались дозы яда V. renardi – 70-150300-450 мкг/г, V. berus – 200-400-600-800 мкг/г.

Оказалось, что для прытких ящериц яд гадюки Ренара оказался также более токсичным по сравнению с ядом обыкновенной гадюки: различия в значениях ЛД50 оказались статистически значимыми на 1%-ном уровне. При сравнении данных табл. 2 и 3 бросается в глаза более высокая токсичность гадючьих ядов для разноцветной ящурки по сравнению с прыткой ящерицей: значения ЛД50 отличаются примерно на порядок. С учетом неисследованных еще возрастных изменений устойчивости ящериц к гадючьим ядам будет преждевременным делать окончательные выводы об этом (разноцветные ящурки в экспериментах были представлены взрослыми особями, а прыткие ящерицы – сеголетками). Однако, по нашим предварительным данным, яд гадюки Ренара для сеголеток разноцветной ящурки еще более токсичен, чем для взрослых ящурок.

Таким образом, полученные нами результаты свидетельствуют о том, что яд гадюки Ренара для двух видов ящериц (разноцветная ящурка и прыткая ящерица) более токсичен, чем яд обыкновенной гадюки. Не исключено, что разная токсичность ядов V. renardi и V. berus может быть обусловлена специфическим набором пептидов. По данным электрофореза в ПААГ, пептидный спектр ядовитого секрета гадюки Ренара гораздо шире такового у обыкновенной гадюки [3, 10, 13]. Вполне вероятно, что яд V. renardi более богат пептидами, токсичными для ящериц, по сравнению с ядом V. berus .