Ультраструктурные изменения лимфоцитов у больных тяжелыми формами рожи с использованием УФО крови

E-mail: luda1210@yandex.ru

УЛЬТРАСТРУКТУРНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ЛИМФОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ ТЯЖЕЛЫМИ ФОРМАМИ РОЖИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ УФО КРОВИ

МБУЗ «Городская инфекционная клиническая больница № 1», г. Новосибирск

Проблема рожи в большинстве стран мира приобретает особое значение, что связано с широкой распространенностью этой патологии и ростом частоты тяжелых и геморрагических форм, сопровождающихся тяжелой интоксикацией, длительной лихорадкой, выраженными нарушениями лимфообращения [3]. Рожа в настоящее время рассматривается как эндогенная инфекция, активирующаяся на фоне существующих нарушений клеточного и гуморального звеньев иммунитета, нейтрофильно-макрофагальных реакций в сочетании с расстройствами неспецифической резистентности организма [7].

Заболеваемость рожей в последние годы в различных странах мира составляет до 200 человек на 100 тыс. населения и занимает 4-е место по распространенности среди инфекционной патологии. В России, несмотря на отсутствие обязательной регистрации случаев рожи, ее распространенность составляет 10-20 человек на 10 тыс. взрослого населения [4].

В последние десятилетия для лечения различных септических процессов успешно используется внутрисосудистое УФО крови в различных модификациях [5]. Для обоснования эффективности использования этого метода в комплексном лечении больных с тяжелыми формами рожи нам представилось интересным провести оценку ультраструктурных изменений лимфоцитов периферической крови.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Для реализации поставленной задачи на первом этапе нами был проведен анализ эффективности внутрисосудистого УФО крови у 80 больных с тяжелым течением заболевания, госпитализированных в МБУЗ инфекционной клинической больницы №1 г. Новосибирска в 2006-м и 2007 годах. Вторую группу – контрольную (n=40) составили пациенты, получавшие традиционную терапию по поводу рожи. Все наблюдаемые больные как в исследуемой, так и в контрольной группах были в возрастной структуре от 25 до 70 лет, женщины составили 65%, мужчины – 35%. У всех пациентов патологический процесс локализовался на нижних конечностях, инфекция сопровождалась тяжелым интоксикационным синдромом. Среди клинических форм рожи преобладала буллезно-геморрагическая у 35 пациентов, что составило 43,7%, эритематозно-буллезная форма наблюдалась у 30 больных – 37,5%, эритематозно-геморрагическая – у 10 (12,5%), эритематозная – у 5 (6,3%). Местные проявления в виде отека и гиперемии присутствовали у всех пациентов. У 45 больных (56%) имел место геморрагический компонент, у 65 больных (81,25%) – буллы на разных стадиях развития, у 11 (13,75%) – различные по распространенности некротические проявления.

Все пациенты получали антибактериальные препараты, дезинтоксикационную терапию, больным с деструктивными формами применялись местно антисептические препараты. Внутрисосудистое УФО крови как компонент терапии проводилось на 1-3-и сутки пребывания в стационаре. Процедура выполнялась на аппарате «ОВК-03» с использованием одноразовых внутрисосудистых световодов длиной 1 м и диаметром 800 мкм, покрытых двухслойной полимерной оболочкой. Внутрисосудистое УФО крови осуществляли по общепринятой методике – в режимах «2» или «3». Режим «2» позволял обеспечивать фотомодификацию крови преимущественно длинноволновым ультрафиолетом и видимым светом от 250 до 600 нм. Фотомодификация крови в третьем режиме давала возможность воздействовать на кровь преимущественно ультрафиолетового спектра оптического излучения от 350 до 550 нм. Кратность процедур составляла 5 сеансов. При проведении сеансов проводилось наращивание параметров длин волн (от 1-го сеанса к 5-му). Продолжительность сеансов составляла от 30 до 60 минут, что было связано с объемом циркулирующей крови (ОЦК) конкретного пациента, и рассчитывалась, исходя из того, что ОЦК у мужчин составляет 7% от массы тела, а у женщин – 6%.

На втором этапе проводимого исследования у всех пациентов осуществлялся забор крови из вены в количестве 20 мл до проведения лечения с использованием внутрисосудистого УФО и после завершения последнего сеанса. Лимфоциты выделяли из полученного объема крови с помощью лимфоцитофереза на сепараторе клеток Haemonetics MCS+. Полученную взвесь клеток фиксировали в 2,5%-ном растворе глютаральдегида на фосфатном буфере, затем в 1%-ном растворе OsO4 на фосфатном буфере дегидратировали в этиловом спирте возрастающей концентрации и заключали в эпон. Из полученных болоков готовили полутонкие срезы толщиной 1 мкм, окрашивали толуидиновым голубым, изучали под световым микроскопом и выбирали необходимые участки для исследования в электронном микроскопе. Из отобранного материала получали полутонкие срезы толщиной 35-45 нм на ультратоме LKB-8800, контрастировали насыщенным водным раствором уранилацетата и цитрата свинца, исследование проводили на электронном микроскопе JEM 1010.

Лимфоциты фотографировали при увеличении 6000. Для морфометрического исследования использовали по 25 клеток у пациентов до лечения путем внутрисосудистого УФО крови и 25 клеток после последнего сеанса. При морфологическом исследовании оценивали особенности ультраструктурной организации лимфоцитов, для чего использовали увеличение 48000 и открытую тестовую систему [1]. При оценке структурно-функциональных изменений лимфоцитов в процессе лечения УФО определяли средние величины морфометрических показателей и стандартную ошибку средней (М±m) согласно принятому в литературе представлению данных [6].

Статистическую обработку данных проводили с использованием программы Statistica 6.0. Определяли средние величины исследуемых морфометрических показателей и стандартную ошибку средней (М±m). Статистическую обработку количественных показателей проводили с помощью t-критерия Стьюдента, считая значимыми различия при р<0,05. Использование именно t-критерия Стьюдента было обусловлено тем, что в результате тестирования количественного содержания органоидов в лимфоцитах до и после лечения путем внутрисосудистого УФО крови было выявлено, что попарные разности нормально распределены. Известно, если выполняется данное условие и дисперсии наблюдений в груп- пах не слишком различны, то t-критерий является подходящим методом для выявления статистической значимости различий исследуемых признаков [2].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Анализируя результаты лечения больных с тяжелым течением рожи с использованием внутрисосудистого УФО крови было выявлено, что в исследуемой группе лихорадка прекратилась в течение 3 суток у 95% больных, лишь у 5% больных достигала 5 дней. В контрольной группе лихорадка до 5 дней сохранялась у 23 пациентов, от 5 до 10 дней – у 14 пациентов и в 3 случаях лихорадка продолжалась до 14 дней, что требовало коррекции антибактериальной терапии. Анализируя динамику местных проявлений, было отмечено, что в исследуемой группе у пациентов с эритематозной формой заболевания наблюдалось полное исчезновение гиперемии к 14-му дню, в контрольной группе – к 18-му дню. Геморрагические проявления у больных с эритематозно-геморрагической рожей купировались в среднем на 3 дня быстрее у пациентов в 1-й группе и полностью исчезали на 4-е сутки лечения. У пациентов с эритематозно-буллезными проявлениями эритема исчезла к 10-му дню у 30% пациентов, к 15-му дню – у 70%. В контрольной группе гиперемия исчезла в среднем на 2 дня позже. При буллезно-геморрагической форме гиперемия купировалась к 15-му дню в 65% случаев, к 18 – 20-му дню – в 30%, позже 20-го дня – в 5% случаев.

У пациентов при всех формах рожи, получавших внутрисосудистое УФО крови, отмечался более выраженный регресс отечного синдрома, при деструктивных формах, осложненных некрозом, – более быстрое ограничение зоны некроза с последующей более активной эпителизацией в очаге поражения.

Динамика морфологического состава периферической крови у больных, получавших и не получавших УФО крови, представлена в таблице. Как следует из представленных данных таблицы, исходные параметры гемограммы в обеих группах больных были идентичными. В процессе лечения у больных с

Таблица

Динамика показателей морфологического состава периферической крови у больных, получавших и не получавших УФО крови

Показатели	При поступлении		р	На 11-12-й день		р
	Без УФО	С УФО		Без УФО	С УФО
Лейкоциты, 109	10,6±0,7	10,9±0,6	>0,05	7,6±0,4	6,3±0,4	<0,05
Эозинофилы, %	2,1±0,2	1,9±0,2	>0,05	2,0±0,2	2,2±0,2	>0,05
Палочкоядерные, %	7,9±0,5	8,6±0,6	>0,05	5,1±0,4	2,1±0,2	<0,05
Сегментоядерные, %	70,1±2,9	69,8±1,9	>0,05	67,7±4,7	64,4±3,2	>0,05
Лимфоциты, %	15,2±1,4	14,9±0,8	>0,05	19,1±0,9	24,7±0,9	<0,05
Моноциты, %	4,6±0,3	4,8±0,2	>0,05	6,1±0,4	5,6±0,5	>0,05
СОЭ, мм/ч	39±2,6	40±3,1	>0,05	36±3,2	31±2,9	>0,05

рожей без применения внутрисосудистого УФО крови на 11-12-е сутки нахождения в стационаре изменения со стороны периферической крови носили несущественный характер, за исключением количества лейкоцитов, которое уменьшилось почти на 25%, вероятно, за счет уменьшения доли палочкоядерных форм. Из данных представленной таблицы следует, что фотомодификация крови сопровождалась выраженной стимуляцией лимфоцитов, количество которых превышало данные контрольной группы на 50%.

При оценке ультраструктуры лимфоцитов было отмечено, что все клетки как контрольной, так и опытной групп сохраняли структурную целостность. Плазматическая мембрана лимфоцитов формировала многочисленные микроворсины и выросты, а ядра клеток имели характерное распределение гетерохроматина. При сравнении лимфоцитов опытной и контрольной групп было выявлено, что клетки пациентов, подвергшихся лечению с использованием внутрисосудистого УФО крови, имели в 2,5 раза большее количество микроворсин и выростов, образуемых плазматической мембраной. Увеличение количества микроворсин, образуемых плазматической мембраной, приводило увеличение площади поверхности клеток. Кроме того, в опытной группе лимфоциты содержали большее количество цистерн гранулярного эндоплазматического ретикулума, в 2,7 раза возрастала объемная плотность везикулярных структур в цитоплазме, отмечался рост численной плотности свободных полисомальных рибосом. В контрольной группе в цитоплазме лимфоцитов были выявлены немногочисленные цистерны гранулярного эндоплазматического ретикулума, комплекса Гольджи, прикрепленные и свободные полисомаль-ные рибосомы и лизосомы. Кроме описанных изменений, в опытной группе по сравнению с контрольной обращало на себя внимание увеличение плотности митохондрий лимфоцитов.

Описанные морфологические изменения лимфоцитов, полученных из крови больных с тяжелыми формами рожи после применения внутрисосудистой фотомодификации крови, свидетельствуют о структурно-функциональных изменениях клеток. Возникшую под воздействием сеансов внутрисосудистого УФО крови перестройку лимфоцитов следует рассматривать как показатель повышенной функциональной активности, в частности за счет активации белок-синтетической функции клеток. Вышеизложенное позволяет обосновать саногенное влияние, оказываемое внутрисосудистым УФО крови у больных с тяжелыми формами рожи, основанное на структурно-функциональной перестройке лимфоцитов. Как следует из представленных данных, использование внутрисосудистого УФО крови в комплексном лечении пациентов с тяжелыми формами рожи сопровождается выраженным саноген-ным действием, что связано со структурно-функциональной перестройкой лимфоцитов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Структурно-функциональные изменения Т- и В-лимфоцитов при внутрисосудистом УФО крови представлены увеличением объемной плотности везикулярных структур в цитоплазме лимфоцитов, плотности свободных полисомальных рибосом, количества микроворсин и выростов, образуемых плазматической мембраной. Выявленные ультраструк-турные изменения лимфоцитов свидетельствуют о повышении их функциональной активности, включая белок-синтетическую функцию, что сопровождается поступлением в кровоток широкого спектра регуляторных и эффекторных продуктов.