Валидация метода проточной цитометрии при иммунофлуоресцентном исследовании белковых маркёров в ткани с'oлидных новообразований

Уровень экспрессии TUBB3 (%) — количество специфически флуоресцирующих клеток относительно контроля (инкубация клеток только с вторичными антителами). Вычисление проводили с помощью критерия Колмогорова–Смирнова. Все эксперименты выполнены одним исследователем на одном и том же оборудовании.

Результаты: Проведен анализ двух валидационных параметров: сходимости результатов и временнóй стабильности иммунофлуоресцентной окраски.

Сходимость — это оценка воспроизводимости результатов, полученных при многократном анализе одного и того же образца в одинаковых условиях. Оценка сходимости проведена на трёх образцах опухолей разных больных при трёх повторных измерениях экспрессии TUBB3 в каждом образце в двух повторах опыта с интервалом 24 ч. Измерение флуоресценции проведено в течение 1 ч после окрашивания. Для статистического анализа полученных результатов использован коэффициент вариации (CV, %), рассчитанный как отношение среднеквадратического отклонения уровня TUBB3 к его среднему значению.

Для всех образцов опухолей коэффициенты вариации и их средние значения не превысили 20%, что, согласно рекомендациям по аналитической валидации методов, позволяет считать результаты метода сходимыми.

Оценка временнóй стабильности окраски проведена на трёх образцах опухолей при трёх повторных измерениях уровня TUBB3 в каждом образце в одном повторе опыта: сразу после завершения окрашивания (в течение 1 ч), а также через 6 и 24 ч. Для статистического анализа полученных данных использован коэффициент вариации (CV,%) между начальным уровнем экспрессии TUBB3 (в течение 1 ч после завершения окрашивания) и последующими временными точками анализа — 6 и 24 ч.

Средние коэффициенты вариации уровня экспрессии TUBB3 в опухолевых клетках через 6 и 24 ч после завершения окрашивания относительно исходных показателей (в течение 1 ч после окрашивания) составили 7,6% и 9,1 %, соответственно. При таких коэффициентах вариации им-мунофлуоресцентная окраска является стабильной.

Заключение: Показана сходимость и временнáя стабильность результатов количественной оценки экспрессии TUBB3 в ткани сóлидных опухолей при использовании разработанного авторами метода иммунофлуоресцент-ного окрашивания, ассоциированного с проточной цитометрией.

ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЕ ОПУХОЛИ

Российское общество клинической онкологии том / vol. 10 №3s1 • 2020

MALIGNANT TUMOURS

Russian Society of Clinical Oncology