Вклад профессора П. С. Григорьева в развитие сифилидологии в период его работы в 1-м Московском медицинском институте (1936-1940)

Уже в 1937 г. ассистентами З. А. Якубович и А. А. Варфаломеевой удалось получить непосредственно из крови больного патогенный штамм возбудителя сифилиса и заразить им кролика, что можно было расценивать как крупный научный успех. Наряду с этим был разработан ряд новых оригинальных методик получения чистых культур бледной трепонемы на искусственных питательных средах.

Первоначально способ выращивания таких культур на искусственной питательной среде был разработан П. С. Григорьевым и Г. А. Вольферц еще в лаборатории экспериментального сифилиса в клинике кожных и венерических болезней Саратовского медицинского института (1936) [1].

Сотрудникам кафедры кожных и венерических болезней 1-го Московского медицинского института под руководством проф. П. С. Григорьева удалось не только получить чистую культуру бледной спиро- хеты (первый и второй московские штаммы), но и доказать ее патогенность. Для этой цели культура была введена внутривенно кролику, который спустя 25 дней был забит в состоянии полного видимого здоровья, без каких-либо проявлений сифилиса. При перевивке же внутренних органов и лимфатических узлов здоровому кролику у него развились сифилитический орхит и первичная сифилома, в отделяемом которой при исследовании в темном поле были обнаружены бледные спирохеты. Большое количество бледных спирохет найдено также при обработке гистологических срезов по методу Ливадити — Мануэлиана. Последующие перевивки здоровым кроликам неизменно сопровождались образованием твердых шанкров [2].

Патогенная культура бледной спирохеты была использована П. С. Григорьевым для заражения подопытных животных с целью изучения изменений различных органов и тканей на ранних стадиях экспериментального сифилиса. Особое внимание уделялось ранним реакциям печени при заражении животных патогенной культурой возбудителя сифилиса. Исследования в этом направлении проводились ассистентом А. П. Дубининым и аспирантом П. П. Сме-танкиной. Первый экспериментировал на кроликах, вторая ‒ на белых мышах. Полученные ими данные свидетельствовали о том, что у подопытных животных имелись характерные для сифилиса патогисто-логические изменения в печени, но без обнаружения спирохет в исходном материале. Подводя итоги проведенных научных исследований, авторы высказывались о возможном существовании бледной трепонемы не только в виде типичных форм, но и в виде «зерен». Аналогичного мнения придерживались как отечественные (П. С. Григорьев, М. И. Самосуд, П. Г. Оганесян), так и зарубежные ученые (C. Levaditi, H. J. Wile, N. Tilden), занимавшиеся изучением этого вопроса при экспериментальном сифилисе [3–5].

В экспериментальной работе А. П. Дубинина «Ранние изменения в печени кроликов при заражении их чистой культурой бледных трепонем» убедительно показаны специфические изменения в печени у экспериментальных животных уже при ранних сроках (от 1 до 25 дней). После введения экспериментальным животным чистой культуры она сохраняла свои морфологические свойства при пересевах, а также патогенность при пассажах на кроликах и белых мышах.

Первыми признаками поражения печени являлись: 1) расширение вен и переполнение их кровью; 2) раннее набухание эндотелия сосудов; 3) образование периваскулярных инфильтратов, располагающихся в виде муфт, окружающих капилляры и мелкие вены; 4) клеточный состав инфильтратов — главным образом лимфоидные элементы, плазматические клетки Унна и гистиоциты; 5) в периваскулярной ткани определялись мелкие гнездные инфильтраты, по своему виду соответствующие «милиарным гуммам».

Полученные результаты гистологического исследования печени животных, зараженных сифилитической инфекцией, не позволяют автору с полной уверенностью утверждать о специфичности патологического процесса, поскольку не удалось обнаружить в ткани возбудителя — бледную трепонему. Однако дальнейшие результаты перевивок свидетельствуют о клинических проявлениях сифилиса у животных и нахождением спирохет в твердых шанкрах. Вместе с тем А. П. Дубинин выдвигает концепцию о возможности нахождения бледной спирохеты в пораженной печени в виде других форм, не определяемых визуально в световом микроскопе.

Данное экспериментальное исследование на кроликах в определенной степени проливает определенный свет на этиопатогенез ранних (еще в течение первичной и вторичной инкубации) поражений печени при ранних сифилитических желтухах и ранних гепатитах [6].

Полученные результаты научных исследований А. П. Дубинина легли в основу его кандидатской диссертации (1940). Работа П. П. Сметанкиной «О ранней реакции тканей печени на патогенную чистую культуру бледной спирохеты» (1940), выполненная на белых мышах, также была представлена в виде кандидатской диссертации (1940) [6, 7].

Заслуживает особого внимания разработанный З. А. Якубович метод консервирования сывороток для серологического диагноза сифилиса высушиванием на целлофане, опубликованный в работе «Консервирование сывороток для серодиагностики сифилиса высушиванием на целлофане» (1939). Подобный метод имел ряд преимуществ перед способами Виноградовой (высушивание сывороток на предметных стеклах) и Кривоносовой (высушивание на гладкой бумаге). Сыворотки, приготовленные по первому способу, с трудом соскабливались со стекла, к ним примешивалась стеклянная пыль; предметные стекла неудобны при пересылке по почте в серологическую лабораторию. Сыворотки же, высушенные по второму способу, неотделимы от бумаги, кусочки которой остаются в пробирке. Все перечисленные недостатки устранены в методе З. А. Якубович: высушенная сыворотка легко и полностью отделялась от целлофана; транспортировка ее была весьма удобной как на целлофановых пластинках, так и per se (срезав сыворотку с целлофана) [8].

В конце 1930-х годов в клинике кожных и венерических болезней 1-го Московского медицинского института была проведена большая комплексная работа по унификации серологических реакций, тщательно проверены все новые методы осадочных реакций, изучались упрощенные методы серодиагностики сифилиса, проводилось изыскание новых, более совершенных антигенов. Количественные методы серодиагностики сифилиса, имеющие большое практическое значение, особенно в связи с новыми методами лечения, изучались З. А. Якубович, Н. В. Нарциссовым и М. И. Самосуд.

По материалам выполненных исследований учеными подготовлены и опубликованы в периодической печати интересные научные работы: З. А. Якубович «Анализ метода Муттермильха и предложение новой модификации активного метода реакции связывания комплемента для серодиагностики сифилиса (1937), «Кожные пробы по Фюллеборну как метод диагностики» (1937), «Иммунологические пробы у субфебрильных больных» (1939), «Комплемент крови при болезнях сердца» (1939), З. А. Якубович, М. И. Самосуд «Проверка реакции Максимова» (1940); их же «Проверка реакции Вайнштейна–Резниковой» (1941) и другие исследования [9].

Научные идеи и направления исследований проф. П. С. Григорьева по проблемам сифилидологии (теоретические и практические), разработанные им, его учениками и соратниками, внесли значительный, часто приоритетный вклад в изучение этиологии и патогенеза сифилитической инфекции и стали широко известны не только в нашей стране, но и за ее пределами.

Разработка упрощенных серологических реакций имела важное значение в борьбе с сифилисом на селе, так как позволяет осуществлять широкое применение серореакций в повседневной практике сельского врачебного участка, в работе венотрядов и венэкспедиций.

Применение упрощенных методов не должно было приводить к снижению требований к качеству самих серореакций, т.е. чувствительности и специфичности, и уменьшать точности получаемых результатов по сравнению с существующими методами.

10 февраля 1936 г. на совещании, проходившем в Объединенном государственном венерологическом институте (г. Москва), были рассмотрены вопросы серодиагностики сифилиса, где особое место в обсуждении занимали упрощенные методы (сероре-акции Григорьева–Рапопорта и Калинина–Гинзбург). Полученные результаты лабораторных исследований упрощенного метода, проведенные под руководством П. С. Григорьева более чем на 20000 сыворотках, свидетельствовали о высокой чувствительности серореакции Григорьева–Рапопорта при всех формах сифилиса. Совпадение результатов с реакцией Вассермана было получено в 96,9% исследований. Учитывая высокую чувствительность упрощенных методов серодиагностики, на совещании было принято решение о рекомендации их к широкому применению в условиях сельской местности в нашей стране.

Вопрос о применении упрощенных методов серодиагностики сифилиса служил предметом специального обсуждения серологической секции ΙV Всесоюзного съезда венерологов (1937), на котором принято решение: 1) для городских и лабораторных лабораторий (в том числе для лабораторий вендиспансеров) использовать обязательный минимум постановки реакции Вассермана в комплексе с одной из осадочных реакций; 2) для медицинских участков, венотрядов и венэкспедиций устанавливается следующий комплекс серореакций: активный метод Григорьева — Рапопорта и цитохолевая реакция; при невозможности постановки последней применяется реакция Кана или реакция комкообразования Гехт– Мюллера.

В постановлении съезда сформулировано предложение подвергнуть широкой проверке ряд новых упрощенных методов, разработанных отечественными учеными в 1930-е годы: капельный метод Григорьева — Рапопорта, модификацию Гинзбург — Калинина с активином, активную модификацию Ванштейна — Резниковой и осадочную реакцию по методу Израэльсон.

По данным С. С. Панкова (1940), уже в 1938 г. в 26 лабораториях различных лечебных и научно-исследовательских учреждений СССР была проведена проверка упрощенных методов серодиагностики сифилиса, а именно реакций: Григорьева–Рапопорта — в 18 лабораториях, Гинзбург–Калинина — в 1 лаборатории, Израэльсон — в 5 лабораториях, Гехт– Мюллера — в 6 лабораториях.

Представленные систематизированные материалы 9 лабораторий о результатах параллельной постановки реакции Григорьева–Рапопорта с реакцией Вассермана (охватывающие 28272 исследования) свидетельствовали, что при первичном, вторичном и третичном манифестном сифилисе процент положительных серореакций является в среднем почти совершенно одинаковым. Колебания с преобладанием чувствительности реакции в ту или иную сторону на- блюдались лишь в материалах тех лабораторий, где количество исследований не являлось особенно значительным. При латентном сифилисе в материалах большинства лабораторий отмечается небольшое повышение чувствительности реакции Григорьева– Рапопорта по сравнению с реакцией Вассермана. Аналогичные результаты отмечены и у больных с врожденным сифилисом. При висцеральном сифилисе результаты серологических реакций по обоим методам были почти одинаковы.

Проведенная обработка анкетного материала разных лабораторий в конце 1930-х годов еще раз подтвердила правильное и своевременное решение серологической секции ΙV Всесоюзного съезда венерологов о рекомендации реакции Григорьева–Рапопорта в качестве одного из упрощенных методов серодиагностики сифилиса в сельской местности.

В работе П. С. Григорьева «О патогенности чистых культур бледной спирохеты», опубликованной в журнале «Вестник венерологии и дерматологии» (1939) обобщен многолетний труд ученого по разработке метода получения с первого посева чистой культуры возбудителя сифилиса, что позволяло обеспечивать научную чистоту эксперимента для выяснения патогенности бледной трепонемы. Полученные в 1937 г. первый и второй московские штаммы бледной трепонемы были использованы П. С. Григорьевым для доказательства о возможности получения многочисленных их генераций, а затем изучения их патогенности. Проведенные экспериментальные исследования свидетельствовали, что первый московский штамм обладает патогенностью для кролика, вызывая у него типичные в клиническом, гистологическом и бактериологическом отношении первичные шанкры и явления в последующем генерализованного сифилиса. Этот штамм, пропассированный через белых мышей путем внутривенного впрыскивания, в дальнейшем сохраняет свою вирулентность для кроликов. По этому поводу П. С. Григорьев пишет: «Таким образом, опыт показывает, что наша культура оказалась после однократного пассажа через кролика патогенной, дав явные клинические, несомненно, подкрепленные бактериоскопически проявления кроличьего сифилиса» [2].

Представленные результаты исследований (по мнению автора) дают право отечественной сифилидологии на приоритет в разработке методики получения безупречно чистых культур бледной спирохеты сразу в чистом бактериологическом виде, а также на впервые доказанную патогенность для кролика искусственно выращенных чистых культур возбудителя сифилиса.

В заключении своей работы П. С. Григорьев пишет, что полученные результаты исследования привлекут к себе внимание экспериментаторов и могут стать основой для научных перспектив экспериментального изучения патогенеза сифилиса. Патогенная культура, полученная по этому методу, может послужить успеху для работы в области серологии сифилиса (разработке получения чистого специфического антигена), а также служить исходным материалом для экспериментов в области изготовления биопрепаратов для специфической терапии сифилиса.

Эти материалы исследований были доложены П. С. Григорьевым на состоявшемся очередном Украинском съезде дерматовенерологов 28 сентября 1938 г.

Для практических врачей-венерологов особую роль играет работа П. С. Григорьева «Значение ре- акции Вассермана» (1937), в которой он на основании многолетнего опыта убедительно показал, какое важное диагностическое значение в распознавании латентного сифилиса, lues ignorata, специфических заболеваний сердечно-сосудистой системы, а также поздних проявлений этой инфекции имеет своевременно сделанная реакция Вассермана и выводит из затруднительного положения врача, спасая жизнь и трудоспособность больному. «Совершенно случайно мне, ‒ пишет П. С. Григорьев, ‒ удалось спасти молодую женщину от ампутации ноги: опухоль коленного сустава была принята за саркому, реакция Вассермана не была произведена: анамнез и клиническая картина не давали повода заподозрить сифилис. Все же по моему настоянию операция была отложена до результатов реакции Вассермана; последняя оказалась резко положительной. Курс специфического лечения ликвидировал «саркому», нога больной была спасена».

Только один клинический случай, который приводит П. С. Григорьев, убеждает врачей в своей повседневной практической деятельности не пренебрегать в проведении реакции Вассермана для исключения или подтверждения у пациента сифилитической инфекции. Кроме того, он убедительно показал важность и необходимость постановки серологических реакций в плане диагностики заболевания, а также для оценки эффективности специфической терапии и критериев для снятия пациентов с диспансерного наблюдения.

В период работы в 1-м Московском медицинском институте П. С. Григорьев продолжал оставаться научным консультантом по вопросам изучения экспериментального сифилиса у сотрудников кафедры кожных и венерических болезней Саратовского медицинского института. Под его руководством выполнена работа В. В. Дроздова «Влияние высоких температур и консервированной крови на морфологию и биологию бледных спирохет» (1939), представляющая практический интерес не только для венерологов, но и для хирургов, военных врачей, занимающихся в своей деятельности переливанием крови.

На основании литературных данных и 32 опытов с подогреванием культуральных спирохет при температуре от 45 до 60˚С с разными временными экспозициями ученые приходят к следующему заключению: прекращение движения после подогревания не является надежным признаком для суждения о гибели спирохет.

Во второй части работы изучался вопрос, касающийся влияния консервированной крови на жизнедеятельность культуральных бледных спирохет при условии ее хранения при температуре от +4 до +6°С в течение 10 суток. В результате серии проведенных опытов было констатировано, что кровь, консервированная ИПК и цитратом натрия, не обладает спирохе-тоцидным действием, по крайней мере в отношении культуральных бледных трепонем. Это обстоятельство обязывало исследователей продолжать поиски консервантов крови, не влияющих на ее качество, и в то же время обладающих достаточным стерилизующим действием на возбудителя сифилиса. Параллельно этим мероприятиям необходим самый тщательный серологический контроль за донорами и постоянное врачебное наблюдение [10]. Полученные материалы исследования В. В. Дроздова легли в основу его диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук.

Вопросами экспериментальной венерологии П. С. Григорьев занимался не только в возглавляемой им клинике кожных и венерических болезней, но и как председатель комиссии Ученого медицинского совета при отделе борьбы с кожными и венерическими болезнями Наркомздрава СССР. Так, в 1939–1940 гг. на заседании комиссии Ученого медицинского совета неоднократно заслушивались и обсуждались вопросы, касающиеся новых современных методов серодиагностики сифилиса, в том числе и упрощенных серореакций, наиболее удобных для работы в сельской местности. Вновь предлагаемые методики по постановке серологических реакций подвергались тщательной проверке в разных лабораториях специализированных лечебных учреждений (венерологические диспансеры и научно-практические венерологические институты), где особое внимание уделялось их высокой чувствительности, срокам и простоте выполнения. Наряду с этим большое внимание уделялось подготовке врачей-лаборантов, занимающихся постановкой серологических реакций.

Таким образом, разносторонняя научная деятельность, высокая эрудиция профессора П. С. Григорьева, многочисленные выполненные им и его сотрудниками экспериментальные исследования в области сифилидологии принесли ему всеобщее заслуженное признание коллег как одному из ведущих и наиболее авторитетных венерологов нашей страны первой половины ХХ столетия.