Влияние агонистов 5- и ц-опиатных рецепторов на процесс антителообразования и гиперчувствительность замедленного типа при локальном иммунном ответе

ВЛИЯНИЕ АГОНИСТОВ 5-И ц-ОПИАТНЫХ

РЕЦЕПТОРОВ НА ПРОЦЕСС АНТИТЕЛООБРАЗОВАНИЯ И ГИПЕРЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ЗАМЕДЛЕННОГО ТИПА ПРИ ЛОКАЛЬНОМ ИММУННОМ ОТВЕТЕ

С. В. Гейн, Т. А. Симоненко, С. П. Тендрякова

Пермский государственный университет, 614990, Пермь, ул. Букирева, 15            '

Исследовано влияние селективных лигандов 3- и ц-опиатных рецепторов на реакции клеточ-но опосредованного и гуморального иммунитета в условиях развития локальной формы иммунного ответа. Установлено, что на фоне локальной иммунизации через 3- и ц-опиатные рецепторы опосредуется противоположное влияние как на антителогенез в регионарных лимфатических узлах (ЛУ), так и на выраженность реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ). Селективный агонист р-опиатных рецепторов DAGO оказывал угнетающее действие на уровень антителообразующих клеток и выраженность ГЗТ, в то время как селективный агонист 8-рецепторов усиливал эти процессы. Изменений клеточности регионарных ЛУ в

- группах животных, получавших DADLE, по сравнению с этим показателем у мышей контрольной группы, зарегистрировано не было. Введение DAGO приводило к статистически достоверному снижению количества ядросодержащих клеток в регионарном ЛУ, что свидетельствует о различной роли 3- и ц-рецепторов в регуляции миграции иммунокомпетентных клеток.

В настоящее время важная роль эндогенных опиатов и опиоидных пептидов в регуляции иммунологических процессов не вызывает сомнений (Зозуля и др., 1986, 1990; Корнева и др., 1988; Madden et al., 1995). Различные типы опиатных рецепторов обнаружены практически на всех типах клеток иммунной системы (Корнева и др., 1988; Зозуля и др., 1990; Madden et al., 1995; Harrison et al., 1998; Salzet et al., 2000), что предполагает возможность как прямого, так и опосредованного влияния эндогенных опиоидов на ход иммунных реакций (Пшенникова, 1987; Ляшев, 2000). Именно этим обусловлено, с одной стороны, разнообразие, а с другой - неоднозначность и противоречивость данных, представленных в литературе. Влияние лигандов опиатых рецепторов и опиоидных пептидов наиболее полно изучено в моделях системного иммунного ответа (Зозуля и др., 1990; Jerne et al., 1963), в то время как роль опиатных механизмов в регуляции локальных иммунных реакций изучена недостаточно.

Цель настоящей работы - исследование влияния селективных лигандов 5- и ц-опиатных рецепторов на реакции клеточно опосредованного и гуморального иммунитета в условиях развития локальной формы иммунного ответа.

Материалы и методы исследования

Эксперименты проводили на беспородных мышах-самцах массой 18-25 г. Исследуемые животные были разделены на 7 групп: контрольная и 6 опытных. Характер участия 3- и ц-опиатных рецепторов в регуляции локального иммунного ответа определяли путем изолированного внутрибрюшинного введения в 0,2 мл физиологического раствора животным опытных групп их селективных лигандов DADLE (селективный агонист 3-опиатных рецепторов) в дозах 28,5 мкг/кг, 28,5 нг/кг, 28,5 пг/кг и DAGO (селективный агонист ц-опиатных рецепторов) в дозах 25,5 мкг/кг, 25,5 нг/кг и 25,5 пг/кг. Мышам контрольной группы внутрибрюшинно вводили аналогичный объем физиологического раствора. Через 1 ч после введения препаратов мышей контрольной и опытных групп одновременно иммунизировали введением 108 эритроцитов барана (ЭБ) в 0,02 мл среды 199 под кожу правой стопы. Разрешающую дозу антигена вводили (108 ЭБ в 0,02 мл среды 199 - в стопу у опытных животных; 0,02 мл среды 199 - в стопу контрольных животных) на 4-е сутки. На 5-е сутки эксперимента мышей забивали путем декапитации под эфирным наркозом и проводили оценку выра-

Влияние агонистов 5- и р-опиатных рецепторов на процесс антителообразования ...167

женности гуморального и клеточно опосредованного иммунного ответа, изменения клеточности регионарного (правого), отдаленного (левого) лимфатических узлов (ЛУ) и селезенки. Выраженность гуморального иммунного ответа оценивали по числу антителообразующих клеток (АОК) в регионарном и отдаленном ЛУ, селезенке (Jerne et al., 1963). Выраженность иммунного воспаления при реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) оценивали путём регистрации толщины и массы стопы у животных опытных и контрольной групп (Omnichi et al., 1976). Статистический анализ результатов проводили с использованием непарного t-критерия Стьюдента.

Результаты и их обсуждение

При анализе результатов контрольной группы обращает на себя внимание увеличение уровня АОК регионарного ЛУ, по сравнению с уровнем отдаленного ЛУ. В отдаленном ЛУ и селезенке выявлен фактически фоновый уровень АОК. Среднее число АОК в селезенке оказалось в среднем в

Изменения числа антителообразующих клеток, клеточности селезенки, правого и левого лимфатических узлов, а также выраженности реакции ГЗТ на 5-й день иммунного ответа на фоне введения DADLE и DAGO

Св С К cl	Экспериментальное воздействие	Число животных	Селезенка		Правый лимфатический узел		Левый лимфатический узел		Интенсивность иммунного воспаления
			Число ЯСК на орган (хЮ6)	Logic числа АОК на орган	Число ЯСК на орган (хЮ6)	logic числа АОК на орган	Число ЯСК на орган (хЮ6)	Logic числа АОК на орган	Индекс реакции по толщине стопы, %*	Индекс реакции по массе стопы, %*
1-я	Контроль	10	259,2± 28,71	1,32± 0,45	16,68± 0,78	1,75± 0,32	6,58± 0,55	0,56± 0,22	38,3912,95	48,0113,94
2-я	DADLE 28,5 мкг/кг	10	167,7± 10,15**	0,99± 0,41	16,14± 1,79	2,53+ 0,17**	11,28± 1,80**	0,76± 0,23	41,7214,91	67,34112,08
3-я	DADLE. 28,5 нг/кг	10	221,1± 25,88	2,31± 0,40	19,52± 3,39	1,74± 0,11	7,7± 0,96	0,95± 0,14	46,2414,27	57,7612,65**
4-я	DADLE 28,5 пг/кг	6	129,5± 17,53**	1,06± 0,48	11,6± 2,39	1,99+ 0,31	5,43± 1,41	0,52± 0,24	36,6414,45	34,9913,20**
5-я	DAGO 25,5 мкг/кг	10	222,3± 13,71	0,97± 0,40	10,40± 1,68**	1,35± 0,39	4,62± 0,63**	0,13+ 0,09	26,0913,57**	34,2615,46**
6-я	DAGO 25,5 нг/кг	9	204,67± 18,37	1,03± 0,41	14,60± 2,85	0,64+ 0,33**	4,56± 0,82**	0,55± 0,19	23,8612,51**	9,5612,69**
7-я	DAGO 25,5 пг/кг	8	147,38± 13,39**	1,44± 0,43	11,35± 1,40**	2,02± 0,34	4,23+ 0,49**	0,25+ 0,12	33,73+5,02	44,2112,88

Примечание. *- индекс реакции (И.Р.) рассчитывали по формуле И.Р. = -------• 100%,

.                                    Рк опытных групп мышей; Рк - то же в контрольной группе.

где Ро - показатели массы и толщины стопы в конечности ** -р<0,05 по отношению к контрольной группе.

На 5-е сутки эксперимента у животных контрольной группы развивается выраженная реакция гиперчувствительности замедленного типа, оценку которой проводили классическим методом - по выраженности локального иммунного воспаления. Как видно из таблицы, на фоне введения DADLE в дозе 28,5 нг/кг у животных 3-й группы наблюдается статистически достоверная стимуляция выраженности иммунного воспаления (сравнение с жи-

500 раз меньше, чем их число при системном иммунном ответе (Кеворков и др., 1993). Таким образом, при выбранной схеме иммунизации развивалась локальная форма гуморального иммунного ответа с преимущественным вовлечением в реакцию на антиген регионарного ЛУ.

Как видно из представленной таблицы, у животных 2-й группы на фоне введения DADLE в дозе 28,5 мкг/кг наблюдается статистически достоверное увеличение числа АОК в регионарном ЛУ, по сравнению с их числом у животных контрольной группы. Более низкие дозы препарата на уровень АОК в правом ЛУ влияния не оказывают. В то же время ц-агонист DAGO в дозе 25,5 нг/кг у животных 6-й группы статистически достоверно снижает количество АОК в регионарном ЛУ по сравнению с этим показателем у животных контрольной группы. Таким образом, на фоне локальной иммуннизации через 8- и ц -опиатные рецепторы опосредуется противоположное влияние на антителогенез в регионарных ЛУ.

вотными контрольной группы) по индексу массы, в то же время более низкая доза препарата (28,5 пг/кг) вызывает у животных 4-й группы угнетение данного показателя. Селективный агонист ц-опиатных рецепторов DAGO оказывал выраженное угнетающее действие на ГЗТ в дозах 25,5 мкг/кг, 25,5 нг/кг как по индексу массы стопы, так и по ее размерам.

По нашим данным, развитие локального иммунного ответа сопровождается статистически значимым увеличением клеточности регионарных лимфатических узлов в сравнении с клеточностью отдаленных ЛУ у всех групп животных. Изменений клеточности регионарных ЛУ в группах животных, получавших DADLE зарегистрировано не было. В отдаленном ЛУ DADLE в дозе 28,5 мкг/кг повышает общее число ядросодержащих клеток (ЯСК). Введение DAGO приводит к статистически достоверному снижению содержания ЯСК в регионарном ЛУ у животных 5-й и 7-й групп и в отдаленном ЛУ - у животных 5, 6, 7-й групп. Помимо этого, в селезенке на фоне введения DADLE и DAGO наблюдалось снижение содержания ЯСК во 2-й, 4-й и 7-й группах. Из вышесказанного следует, что введение лигандов опиатных рецепторов оказывает существенное влияние на процессы миграции и клеточного перераспределения в иммунной системе, механизмы которых недостаточно ясны. На наш взгляд, выраженность ГЗТ и индукция ан-тителогенеза не всегда могут быть связаны с увеличением клеточности соответствующего органа. Так, повышение уровня АОК в регионарном ЛУ на фоне введения DADLE у животных 2-й группы и снижение этого показателя на фоне введения DAGO у животных 6-й группы не сопровождается изменениями количества ЯСК данного органа.

Таким образом, полученные результаты указывают на важную роль 5- и ц-агонистов в регуляции гуморальных и клеточно опосредованных иммунных реакций в условиях развития локальной формы иммунного ответа. Эффекты, реализуемые через стимуляцию 8- и ц-опиатных рецепторов, могут носить разнонаправленный характер.