Влияние биологически активной пищевой добавки «Пектибон» на показатели периферической крови и иммунный статус при удлинении голени методом чрескостного остеосинтеза по Илизарову в эксперименте

Известно, что дефицит кальция в организме приводит к развитию ряда заболеваний и остеопороза в частности [5-7]. Решение данной проблемы является одной из сложнейших задач современной медицины. В РНЦ «ВТО» имени Г.А. Илизарова совместно с ОАО «Деметра» (Москва) на основе продуктов переработки костной ткани и растительного сырья с целью профилактики и лечения остеопороза разработана биологически активная пищевая добавка «Пектибон». Данный препарат представляет собой порошок светло-коричневого цвета, обладающий слабо выраженным кисловатосолоноватым вкусом, содержит высокорастворимые аминоациловые соли кальция и пектинцеллюлозный комплекс. Растительные волокна, входящие в состав препарата, играют важную роль в функционировании ряда органов и систем организма. Не перевариваясь в желудочнокишечном тракте, они влияют на функцию толстого кишечника, ускоряя кишечный транзит и перистальтику, способствуют очищению организма за счет абсорбции желчных кислот, токсинов, предупреждают всасывание ионов тяжелых металлов и радионуклидов [3]. Комбинированное использование пектинсодержащих растительных волокон и аминоациловых солей кальция позволяет направленно стимулировать процессы биологической минерализации костной ткани, а также опосредованно влиять на функции иммунокомпетентных органов [1, 8].

«Пектибон» применяется перорально в сухом виде или в смеси с пищевыми продуктами растительного или животного происхождения различ- ной консистенции в течение 1-3-х месяцев.

Цель данного исследования - изучение влияния биологически активной пищевой добавки «Пектибон» на иммунный статус и пока- затели периферической крови у эксперимен тальных животных в процессе удлинения голе ни методом чрескостного остеосинтеза по Илизарову.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Эксперимент проведён на 11 взрослых беспородных собаках в возрасте от 1-го до 3-х лет, массой тела 19.9 ± 0,6 кг, с длиной голени 18,4 ± 0,6 см. Для удлинения конечности применяли аппарат Илизарова, состоящий из двух дуг и двух колец, на которых фиксировали две взаимоперекрещивающиеся спицы, проведенные через большеберцовую кость (операции проведены к.м.н. С.А. Ерофеевым). Дистракцию начинали через 5 дней после операции и проводили в режиме 1 мм в день в 4 приема в течение 4-х недель. Удлинение голени составило 15 % от исходной длины. На протяжении последней недели дистракции и последующих 30 дней фиксации животным опытной группы в пищу ежедневно добавляли препарат "Пектибон" в количестве 3-х граммов. Контрольную группу составили 4 собаки.

Оценка иммунного статуса проведена на основании комплекса стандартных и унифицированных тестов, предложенных институтом иммунологии МЗ России с незначительными модификациями [2, 4]. Лабораторно - иммунологическое исследование включало подсчёт общего числа лимфоцитов и лейкоцитов в периферической крови в камере Горяева, циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) методом осаждения с полиэтиленгликолем. Подсчёт числа ретикулоцитов осуществляли в мазке крови, окрашенным бриллианткрезиловым синим, содер- жание эритроцитов и уровень гемоглобина определяли посредством фотоэлектрического эритрогемометра. Для морфологического исследования периферической крови использовали окраску препаратов по Романовскому - Гимзе. С целью объективизации влияния биодобавки «Пектибон» на клеточный состав белой и красной крови были применены показатель состояния (ПС) и системный индекс красной крови (СИКК), рассчитываемые по лейкограмме и эритрограмме и используемые для оценки динамики адаптационного процесса и активности репаративного остеогенеза [4].

пс = kee^+m • nL где e, l, m, n - содержание эозинофиллов, лимфоцитов, моноцитов, нейтрофиллов (соответственно) на 105 клеток крови, где к - нормирующий коэффициент, равный 102;

L - количество лейкоцитов в1 мм³ крови.

СИКК= к х эр х Нб, где k - коэффициент размерности, равный 10-8;

эр - количество эритроцитов в мкл крови;

Нб - концентрация гемоглобина, г/ л.

Забор крови проводился в дооперационном периоде; на 1-й, 2-й, 3-й, 4-й неделе дистракции и на 30-й день периода фиксации.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Анализ иммунологической картины показал следующее: в обеих группах до операции отмечено нормальное число лейкоцитов и лимфоцитов (рис. 1). В группе животных, получавших «Пектибон» отсутствовали статистически значимые изменения данных показателей. В контрольной группе зарегистрировано достоверное снижение содержания лимфоцитов и повышение количества лейкоцитов к окончанию периода фиксации. В опытной группе наблюдалось постепенное повышение числа Т-лимфоцитов в периферической крови. Статистически значимые различия были зафиксированы к концу дистракции (рис. 2). Сходная динамика отмечалась со стороны Т-активных лимфоцитов. В контрольной группе содержание Т- лимфоцитов достоверно снизилось к 4-й неделе дистракции, вернулось к исходному уровню к окончанию эксперимента. Число Т-активных лимфоцитов в этой группе повысившись на 1-й неделе дистракции, уменьшилось на последующих исследуемых этапах. К 30-му дню фиксации данный показатель был достоверно ниже исходного уровня (рис. 3). Содержание ЦИК до операции, а также на протяжении периодов дистракции и фиксации в обеих группах не подвергалось статистически значимым изменениям (табл. 1, рис. 4).

Рис. 2. Динамика содержания Т-лимфоцитов в периферической крови.

Рис. 1. Динамика содержания лимфоцитов в периферической крови.

Рис. 3. Динамика содержания Т-активных лимфоцитов в периферической крови.

Рис. 4. Динамика содержания циркулирующих иммунных комплексов в периферической крови.

Таблица 1.

Динамика иммунологических показателей (M±m)

Сроки наблюдения		Показатели
		Лимфоциты (%)	Т-лимфоциты (%)	Т-акивные лимфоциты (%)	Абс. к-во Т-лимфоцитов (109 /л.)	Абс.к-во Т-активных лимфоцитов (109 /л.)	ЦИК (у.е.)
До операции	Опыт	23,2±2,28	10,0±0,42	8,4±2,99	0,13±0,037+	0,08±0,027	96,4±1,66
	Контроль	27,0±2,0	9,0±1,0	6,5±1,49	0,12±0,015	0,08±0,025	87,0±3,0+
1неделя дистр.	Опыт	23,6±2,2	10,0±1,35	10,4±1,32+	0,14±0,046+	0,09`±0,018	94,5±1,79
	Контроль	22,0±0,0*	7,5±0,49	5,5±2,01	0,12±0,035	0,10±0,075*	96,5±0,49*
3неделя дистр.	Опыт	25,3±5,04	10,3±0,33	7,33±2,02	0,17±0,058*+	0,14±0,071*+	98,0±0,0
	Контроль	22,5±1,25*	8,0±2,0	6,0±2,0	0,09±0,055*	0,07±0,045*	98,0±0,0*
30дней фиксац.	Опыт	21,8±0,69+	12,3±0,01+	7,5±2,06+	0,17±0,016*+	0,10±0,037*+	98,5±6,6
	Контроль	19,5±0,5*	6,5±0,5*	5,0±0,0	0,12±0,025	0,06±0,095*	98,0±1,0*

Примечание: * - p<0.05 различия достоверны по отношению к соответствующим показателям дооперационного периода. + - p<0.05 различия достоверны по отношению к соответствующим показателям контрольной группы.

Динамика показателей красной крови выглядела следующим образом: статистически значимых изменений уровня гемоглобина, числа эритроцитов и ретикулоцитов в группе животных, получавших «Пектибон» зарегистрировано не было. В контрольной группе наблюдалось достоверное снижение гемоглобина к окончанию эксперимента (30-й день фиксации), отмечено значительное повышение числа ретикулоцитов к концу дистракции (250% от исходного уровня) (табл. 2, рис. 5, 6). СИКК в опытной группе до операции составил 0,57±0,032, снизившись на 1-й неделе дистракции (0,46±0,028), уже к окончанию периода дистракции СИКК вернулся к исходному уровню (0,55±0,043). В контрольной группе динамика данного индекса была менее благоприятной. До операции СИКК составил 0,61±0,013, статистически значимые изменения были зафиксированы вначале периода фиксации (0,53±0,024). К окончанию эксперимента СИКК оставался достоверно ниже до-операционного уровня (0,51±0,022).

Анализ клеточного состава белой крови по- казал отсутствие выраженных изменений числа лейкоцитов в опытной группе на протяжении эксперимента и повышение их содержания в контрольной группе к окончанию периода фиксации.. Процентное число лимфоцитов в опытной группе оставалось в пределах нормальных значений, в контрольной группе зарегистрировано достоверное снижение данного показателя на всех исследуемых этапах (рис. 1). К концу периода фиксации количество лимфоцитов периферической крови в контрольной группе составило 75% от дооперационного уровня. Статистически значимых различий в содержании сегментоядерных нейтрофиллов в обеих группах не отмечалось. Число палочкоядерных ней-трофиллов в опытной группе колебалось в пределах нормальных значений, в контрольной группе превысило верхнюю границу нормы на 30-й день фиксации (рис. 7).

В обеих группах ПС в дооперационном периоде не имел достоверных отличий и составил 7,6±0,7 и 7,7±0,9 соответственно. На этапе дистракции в обеих группах было зарегистрировано снижение данного показателя. Статистически значимые различия в группе животных, получавших «Пектибон», были отмечены на 4-й неделе дистракции (ПС – 5,0±0,2), в контрольной группе – на 2-й неделе дистракции (ПС –

5,7±0,3). К окончанию периода фиксации в опытной группе ПС вернулся к исходным значениям (ПС – 7,5±0,5), в контрольной группе остался достоверно ниже дооперационного уровня (ПС – 5,2±0,8).

до операции 1 нед.дистр. 2 нед.дистр. 3 нед.дистр.       30

дн.фиксац.

до операции 1 нед. дистр. 2 нед. дистр. 3 нед. дистр.     30 дн.

фиксац.

Рис. 6. Динамика содержания ретикулоцитов в периферической крови.

Рис. 5. Динамика уровня гемоглобина.

до операции 1 нед. дистр. 2 нед. дистр. 3 нед. дистр.     30 дн.

фиксац.

Рис. 7. Динамика содержания моноцитов в периферической крови.

Примечание: пунктирными линиями обозначены нормативные границы исследуемого показателя.

Динамика показателей красной крови (M±m)

Таблица 2.

Сроки наблюдения		Показатели
		Гемоглобин (г/л.)	Эритоциты (1012/л.)	Ретикулоциты (‰)
До операции	Опыт	120±3,8	4,5±0,15+	3,6±0,78+
	Контроль	125±5,0	5,0±0,0	1,5±0,10
1неделя дистракции	Опыт	113±4,8	4,2±0,12+	4,8±0,58+
	Контроль	115±5,0	4,6±0,05	2,5±0,48*
2неделя дистракции	Опыт	115±5,1	4,3±0,28+	5,0±0,73
	Контроль	120±0,0	4,8±0,15	4,0±1,0*
3неделя дистракции	Опыт	118±0,2+	4,3±0,25+	5,0±0,83+
	Контроль	125±5,0	4,9±0,05	9,1±1,48*+
30дней фиксации	Опыт	118±2,5+	4,8±0,14	4,2±0,75
	Контроль	105±7,0*	4,6±0,45	5,5±1,48*

Примечание: * - p<0.05 различия достоверны по отношению к соответствующим показателям дооперационного периода. + - p<0.05 различия достоверны по отношению к соответствующим показателям контрольной группы.

Динамика показателей белой крови (M±m)

Таблица 3.

Сроки наблюдения		Показатели
		Лейкоциты (109/л.)	Моноциты (%)	Палочко-ядерные нейтрофиллы (%)	Сегменто-ядерные нейтрофиллы (%)
До операции	Опыт	7,5±0,77	3,6±0,18+	4,4±0,49	60,3±0,89
	контроль	7,7±0,39	2,5±0,49	4,5±0,29*	60,5±0,49
1неделя дистракции	Опыт	8,7±0,78+	4,8±0,67*	5,3±0,18*+	59,0±0,68
	контроль	7,2±0,38	4,6±0,49*	6,5±0,48*	57,5±2,48
2неделя дистракции	Опыт	9,2±1,24	4,7±0,69	6,0±0,48*+	59,0±1,36*
	контроль	8,4±2,36	4,2±0,48*	4,5±0,49*	58,0±0,0
3неделя дистракции	Опыт	10,4±0,18*+	5,6±1,0*+	5,8±0,67*	59,8±1,26
	контроль	6,5±1,08	3,0±0,5	5,0±2,0	58,0±2,0
30дней фиксации	Опыт	8±0,98+	4,2±0,57*	5,5±0,48*	58,4±1,36+
	контроль	11,4±1,58*	4,0±0,0*	7,0±2,0*	62,2±2,0

Примечание: * - p<0.05 различия достоверны по отношению к соответствующим показателям дооперационного периода. + - p<0.05 различия достоверны по отношению к соответствующим показателям контрольной группы.

ВЫВОДЫ

• 1.    У животных, получавших «Пектибон», нормализация показателей периферической крови отмечается в более ранние сроки по сравнению с контрольной группой.

• 2.    В процессе удлинения голени методом чрескостного остеосинтеза имеет место активация Т-клеточного звена иммунитета у животных при применении биологически активной пище-

• вой добавки «Пектибон» и умеренный Т-клеточный иммунодефицит на этапе конца дистракции у животных контрольной группы.

• 3.    Наблюдаемая иммунологическая динамика свидетельствует о влиянии биологически активной пищевой добавки «Пектибон» на функции иммунокомпетентных органов.