Влияние фракционированного гамма-облучения в первый месяц жизни на когнитивную функцию у мышей

Автор: Атаманюк Н.И., Обвинцева Н.А., Тюхай М.В., Андреев А.И., Пряхин Е.А.

Журнал: Радиация и риск (Бюллетень Национального радиационно-эпидемиологического регистра) @radiation-and-risk

Рубрика: Научные статьи

Статья в выпуске: 4 т.33, 2024 года.

Бесплатный доступ

Высокие дозы ионизирующего излучения являются признанным фактором риска для развития когнитивной дисфункции у человека и экспериментальных животных, тогда как данные о действии малых доз, особенно в режиме хронического или фракционированного воздействия, ограниченны и противоречивы. Цель работы - изучить влияние фракционированного гамма-облучения в кумулятивной дозе 0,1 Гр, 1 Гр и 5 Гр в течение первого месяца жизни на когнитивные функции у мышей C57Bl/6 и морфофункциональные показатели зубчатой извилины гиппокампа облучённых животных. Для оценки когнитивных функций у животных оценивали зрительно-пространственную обучаемость в тесте лабиринт Барнса в возрасте 2 мес. В зубчатой извилине гиппокампа анализировали нейрогенез по определению количества стволовых Prom1+ клеток; синаптическую пластичность по количеству экспрессирующих нейромодулин GAP43+ клеток; нейровоспаление по количеству CD74+ клеток активированной микроглии. Показано стимулирующее действие малых доз фракционированного гамма-облучения в раннем постнатальном периоде на когнитивные функции у мышей, которое снижается с увеличением уровня радиационного воздействия. В основе такого эффекта могут лежать выявленные стимуляция нейрогенеза и повышение синаптической пластичности, а также возможное противовоспалительное действие облучения в кумулятивной дозе 0,1 Гр. Не выявлено негативного эффекта облучения в кумулятивной дозе 5 Гр на когнитивные способности у мышей в лабиринте Барнса, облучение в этой дозе также приводило к активации нейрогенеза и повышению синаптической пластичности, однако менее выраженным, чем при облучении в дозе 0,1 Гр.

Еще

Гамма-излучение, фракционированное облучение, малые дозы, лабиринт барнса, когнитивная функция, память, нейрогенез, нейровоспаление, синаптическая пластичность, радиобиология

Короткий адрес: https://sciup.org/170207402

IDR: 170207402   |   УДК: 539.1.047:599.323.4:591.18   |   DOI: 10.21870/0131-3878-2024-33-4-107-118

Текст научной статьи Влияние фракционированного гамма-облучения в первый месяц жизни на когнитивную функцию у мышей

Острое облучение головного мозга в высоких дозах приводит к когнитивной дисфункции у человека, проявляющейся, как правило, в виде дефицита гиппокамп-зависимых функций обучения, вербально-семантической и пространственной памяти, долгосрочного нарушения запоминания, причём эти эффекты коррелируют с дозой облучения [1]. Более позднее развитие и более медленное восстановление долговременной памяти отмечено при облучении в детском возрасте, что может быть связано с облучением гиппокампа в период активного созревания и нейрогенеза [1]. Согласно Публикации 118 Международной комиссии по радиологической защите [2] порогом для развития когнитивных эффектов считают дозы 1-2 Гр острого облучения для взрослых и дозы более 0,1 Гр для детей, облучённых в раннем возрасте (до 18 мес.).

Изменения когнитивной функции регистрируются также в экспериментах на животных. Действие ионизирующего излучения вызывает длительно сохраняющийся дефицит пространственной памяти у грызунов [1]. В качестве одной из основных причин выявляемых когнитивных нарушений рассматривают изменения нейрогенеза и дифференцировки нейронов в зубчатой извилине гиппокампа, изменение синаптической пластичности, провоспалительную активацию мик-

Атаманюк Н.И .* – ст. науч. сотр., к.б.н.; Обвинцева Н.А. – науч. сотр.; Тюхай М.В. – мл. науч. сотр.; Пряхин Е.А. – зав. отд., д.б.н. ФГБУН УНПЦ РМ ФМБА России. Андреев А.И. – зав. лаб. ПГНИУ.

роглии [3, 4]. Зубчатая извилина, одна из структур гиппокамповой формации, является анатомической основой участия гиппокампа во многих когнитивных процессах, таких как внимание, память, кодирование информации. Это одна из уникальных областей мозга, где обнаруживается нейрогенез у взрослых млекопитающих, анатомическая организация зубчатой извилины грызунов и приматов сходна [5].

Если когнитивные эффекты облучения в высоких дозах изучены достаточно хорошо, данных о влиянии малых доз ионизирующего излучения (до 0,1 Гр редкоионизирующих излучений) на когнитивные функции, память и высшую нервную деятельность в целом гораздо меньше. Острое облучение в дозах порядка 0,1 Гр может оказывать разнонаправленное действие, вызывая как слабые неблагоприятные эффекты на головной мозг [6], так и нейропротективное действие [7]. Для человека доказательства связи между малыми и умеренными дозами излучения и снижением когнитивных способностей регистрируются не во всех исследованиях и требуют дополнительного изучения [8].

Также ограничены экспериментальные и эпидемиологические данные о влиянии хронического или фракционированного облучения. Понимание эффектов длительного воздействия ионизирующего излучения важно для обеспечения радиационной защиты работников ядерной индустрии, космонавтов при длительных космических полётах, населения, проживающего на радиоактивно-загрязнённой территории. Хроническое (на протяжении двух месяцев) и фракционированное (при разделении на 2-4 фракции) рентгеновское облучение в дозах от 0,5-2 Гр способно приводить к изменениям высшей нервной деятельности экспериментальных животных [1], данных о возможном влиянии малых доз ионизирующего излучения в режиме фракционированного или хронического воздействия нет.

Цель данной работы – оценка влияния фракционированного гамма-облучения в кумулятивной дозе 0,1 Гр, 1 Гр и 5 Гр в раннем возрасте на когнитивные функции и морфофункциональное состояние зубчатой извилины гиппокампа у мышей.

Материалы и методы

Работу выполняли на мышах линии C57Bl/6 (питомник SPF-вивария ИЦиГ СО РАН, Новосибирск). Животных подвергали общему внешнему гамма-облучению, разделённому на 20 фракций, в течение первого месяца жизни, начиная с 1-3 сут после рождения ежедневно, 5 дней в неделю, в течение 4 недель.

Были сформированы следующие группы: мыши, облучённые в кумулятивной дозе 5 Гр (20 фракций по 0,25 Гр); мыши, облучённые в кумулятивной дозе 1 Гр (20 фракций по 0,05 Гр); мыши, облучённые в кумулятивной дозе 0,1 Гр (20 фракций по 0,005 Гр); ложное облучение (0 Гр): с животными проводили аналогичные манипуляции и в том же количестве, как и при облучении; биологический контроль (БК) – интактные животные.

Облучение проводили на экспериментальной радиобиологической установке ИГУР-1М с 4 137Cs-источниками. Мощность дозы при облучении в разовых дозах 0,25 Гр и 0,05 Гр составляла 0,72 Гр/мин, для получения разовой дозы 0,005 Гр использовали свинцовые коллиматоры, снижающие мощность дозы до 0,015 Гр/мин. Неравномерность гамма-поля не превышала 10% [9]. Для облучения мышей помещали внутрь установки в домашних клетках, удаляя из них на время облучения кормящих самок.

При расчёте фактически полученной кумулятивной поглощённой дозы для животных каждой экспериментальной группы на основе показаний дозиметра ДКС5350/1 в каждом цикле облучения и расчётных значений стандартных неопределённостей доз облучения на установке ИГУР-1М для мышей были получены следующие значения: для группы 0,1 Гр фактическая доза составила (0,11 ± 0,01) Гр, для группы 1 Гр - (1,00 ± 0,08) Гр, для группы 5 Гр - (5,2 ± 0,4) Гр [9].

В возрасте 1 мес. мышей рассаживали по 10 особей одного пола в отдельные клетки. Животных содержали на стандартном рационе с неограниченной подачей корма и питьевой воды при постоянной температуре воздуха 22 ± 2 °С.

Работа одобрена Этическим комитетом Уральского научно-практического центра радиационной медицины (протокол № 1 от 03.04.2023 г.), выполнена в соответствии с положениями Европейской конвенции по защите позвоночных животных (1986 г., Страсбург).

Для оценки когнитивных функций (пространственное обучение) из каждой экспериментальной группы в возрасте 2 мес. отбирали по 20 самцов и 20 самок для тестирования в лабиринте Барнса.

Лабиринт представляет собой платформу диаметром 120 см с двадцатью отверстиями (диаметр каждого - 5 см), расположенными по краю. Только одно из отверстий ведёт в убежище, пригодное для укрытия мыши (целевое отверстие), остальные отверстия являются ложными. Установка приподнята над полом на 50 см. В качестве раздражающего стимула использовали яркий свет и белый шум громкостью не менее 60 дБ. Для ориентации в пространстве использовали метку с геометрической фигурой, расположенную за пределами установки рядом с целевым отверстием [10].

Мышей обучали ориентироваться в лабиринте в течение 4 дней, каждый день животных помещали в лабиринт по 4 раза с интервалом 20-30 мин, размещая мышь каждый раз в разных квадрантах лабиринта (лабиринт условно делили на 4 квадранта, среднее отверстие одного из них являлось целевым). Поведение животных на установке регистрировали путём видеосъёмки (фотокамера Sony α 56) в течение 3 мин, если за это время животное не находило нужное отверстие, мышь плавно подталкивали к нему. Если мышь заходила в убежище, видеорегистрацию заканчивали. На 5 день проводили итоговое тестирование. Для этого целевое отверстие закрывали задвижкой, делая его неотличимым от всех остальных отверстий на платформе. Регистрировали поведение животных на установке в течение 1,5 мин.

По результатам итогового тестирования определяли следующие параметры: время поиска целевого отверстия (с); трек поиска - расстояние, пройденное мышью от начала теста до целевого отверстия (см); доля времени, проведённого на целевом отверстии за всё время тестирования (%); доля времени, проведённого в квадранте лабиринта с целевым отверстием после нахождения целевого отверстия и обнаружения его закрытым (% от времени, прошедшего с момента обнаружения отверстия до окончания теста). Анализируемые показатели рассчитывали автоматически с помощью программного комплекса AsioOtus Lab (ООО «НПК Открытая Наука», Россия).

Для изучения морфофункционального состояния головного мозга у мышей из каждой группы отбирали по 15 животных (8 самцов, 7 самок) в возрасте 1 мес. После эвтаназии под изофлурановым наркозом выделяли головной мозг, помещали в его 10% нейтральный забуфе-ренный формалин на 72 ч в индивидуальные промаркированные ёмкости. Объём фиксирующей жидкости превосходил объём биологического материала не менее чем в 20 раз. Зафиксированный материал промывали проточной водой 30 мин и проводили вырезку области головного мозга, содержащую зубчатую извилину гиппокампа. Проводку материала осуществляли по общепринятой схеме, согласно действующим нормативам и стандартам, для этого вырезанные кусочки ткани помещали в гистологические кассеты и затем в вакуумный гистопроцессор Tissue-Tek VIP 5 (Sakura, США), проводка включала этап дегидратации с использованием абсолютного изопропилового спирта, а также пропитку несколькими сменами парафина. Все процедуры проводили в условиях пониженного давления и повышенной температуры, после кусочки ткани заливали в парафиновые блоки.

Изготовление гистологических срезов толщиной 2-3 мкм осуществляли на микротоме Microm Ergostar HM 200 (Microm, Германия). Для иммуногистохимического исследования срезы монтировали на предметные стёкла Super Frost Plus (Thermo Scientific, США).

Для оценки уровня нейрогенеза анализировали количество клеток, экспрессирующих белок проминин, маркер раковых стволовых клеток, низкодифференцированных нейральных стволовых клеток (CD133+, Prom1+ клетки) в гранулярном слое зубчатой извилины [11]. Для оценки синаптической пластичности использовали белок GAP43 (нейромодулин), индикатор вновь образующихся синаптических контактов [12], а для оценки нейровоспаления оценивали количество клеток, экспрессирующих CD74, маркер активированной микроглии [13], в молекулярном, гранулярном и полиморфном слое (хилусе) зубчатой извилины гиппокампа.

Для иммуногистохимического исследования использовали концентрированные антитела Prom1 (поликлональное кроличье антитело, рабочее разведение 1/100), Gap43 (поликлональное кроличье антитело, рабочее разведение 1/100), CD74 (поликлональное кроличье антитело, рабочее разведение 1/100) производства Сloud Clone Сorp. (США). Окрашивание проводили с использованием автоматической системы окраски Ventana BenchMark ULTRA.

Гистопрепараты сканировали на гистологическом сканере Hamamatsu Photonics K.K. (Япония), полученный при сканировании цифровой архив анализировали при помощи программы QuPath [14]. Рассчитывали абсолютное и относительное количество Prom1 +, GAP43+, CD74+ клеток в пересчёте на 1 мм2, а также количество всех клеток на 1 мм2 в области хилуса, гранулярного и молекулярного слоя зубчатой извилины гиппокампа.

Данные анализировали в программе Microsoft Exсel и с использованием языка программирования R CRAN [15], результаты выражали в виде средних значений и стандартных ошибок (M ± SE). Оценивали соответствие измеренных показателей в каждой группе нормальному распределению по критерию Колмогорова-Смирнова. Равенство дисперсий проверяли с использованием теста Левена по F-критерию Фишера (FL). Так как все анализируемые показатели соответствовали нормальному распределению, экспериментальные группы сравнивали с помощью t-критерия Стьюдента. Принимали уровень значимости α =0,05. Если статистически значимых отличий между показателями в группах БК и 0 Гр не выявляли, то группы объединяли в общую контрольную группу («контроль»). Если отличия оказывались статистически значимыми, сравнения показателей в облучённых группах проводили с группой ложного облучения (0 Гр). Кроме этого, проводили многофакторный дисперсионный анализ с использованием обобщённой линейной модели для оценки влияния радиационного фактора (линейная зависимость от дозы), пола и фактора стресса, связанного с манипуляциями при облучении животных (принимали, что животные из группы БК не испытывали стресса, а все остальные животные, в том числе из группы 0 Гр, испытывали стресс).

Результаты и обсуждение

При сравнении результатов поведения мышей в лабиринте Барнса на 5-й день тестирования не было выявлено статистически значимых отличий ни по одному из исследуемых параметров между двумя необлучёнными группами, 0 Гр и БК. Поэтому результаты тестирования остальных исследуемых групп сравнивали с показателями общей контрольной группы (контроль).

Все показатели, рассчитанные при тестировании в лабиринте Барнса, у животных, облучённых в суммарной дозе 0,1 Гр, статистически значимо отличались от значений контрольной группы. Все эти изменения указывали на стимуляцию когнитивной функции, улучшение пространственной памяти мышей, облучённых в малой дозе 0,1 Гр. Животным этой группы требовалось на 30% меньше времени для обнаружения целевого отверстия (при сравнении времени поиска с контролем t=3,1; p=0,002); они проходили минимальное расстояние (на 15% меньше, чем в контроле) до целевого отверстия (при сравнении трека поиска с контролем t=2,5; p=0,01), проводили почти в 2 раза больше времени на закрытом целевом отверстии (t=5,7; p<0,001), а также меньше перемещались в другие квадранты лабиринта в поисках укрытия, обнаружив целевое отверстие закрытым (на это указывает увеличение доли времени в целевом квадранте после нахождения целевого отверстия, t=5,8; p<0,001).

Отличия аналогичной направленности, но менее выраженные, выявлены при сравнении группы, облучённой в дозе 1 Гр, и контроля: отмечено сокращение трека поиска (t=2,2; p=0,03) и времени поиска (t=2,1; p=0,04), увеличение доли времени в целевом квадранте после обнаружения отверстия закрытым (t=4,1; p<0,001). Не выявлено статистически значимых отличий показателей поведения мышей, облучённых в дозе 5 Гр, и необлучённых животных.

При проведении многофакторного дисперсионного анализа с использованием обобщённой линейной модели было выявлено, что фактор дозы оказывает статистически значимое влияние на все исследованные в тесте лабиринта Барнса показатели: для показателя длины трека поиска F=2,64; p=0,035, для времени поиска F=3,78; p=0,006, для доли времени на целевом отверстии F=13,63; p<0,001, для доли времени в целевом квадранте после нахождения отверстия F=8,59; p<0,001. При этом фактор пола и фактор стресса, связанного с манипуляциями при облучении, не оказывали статистически значимого влияния ни на один из этих параметров. Однако изменения этих параметров с дозой имели нелинейную, немонотонную зависимость (рис. 1).

Таким образом, в тесте лабиринта Барнса выявлено стимулирующее действие фракционированного гамма-облучения в дозах 0,1-1 Гр в раннем постнатальном периоде на когнитивную функцию (пространственную память) у мышей, не выявлено негативного эффекта облучения в большой дозе 5 Гр на когнитивные способности у мышей.

Результаты оценки количества нейральных стволовых Prom1+ клеток в гранулярном слое зубчатой извилины гиппокампа представлены в табл. 1. Не было обнаружено статистически значимых отличий при сравнении количества Prom1+ клеток в зубчатой извилине у животных групп БК и 0 Гр, поэтому показатели в экспериментальных группах сравнивали с общей группой контроля. Радиационное воздействие привело к многократному повышению содержания Prom1+ клеток в гранулярном слое зубчатой извилины - области активного нейрогенеза. Наиболее выраженной такая реакция была при облучении в кумулятивной дозе 0,1 Гр - в этой группе абсолютное и относительное количество Prom1+ клеток возросло в 35 раз по сравнению с контролем. При облучении в суммарных дозах 1 Гр и 5 Гр отмечено одинаковое 12-кратное превышение количества Prom1+ клеток в группе контроля.

Рис. 1. Изменение времени поиска (А), длины трека поиска (Б), доли времени на целевом отверстии (В), доли времени, проведённого в целевом квадранте после обнаружения отверстия (Г) в лабиринте Барнса в зависимости от дозы облучения.

Сплошная линия – соединение экспериментальных точек путём сглаживания;

‡ – статистически значимые отличия от группы контроля, p<0,05.

При проведении дисперсионного многофакторного анализа с использованием обобщённой линейной модели (R2=0,54) выявлено, что основным фактором, оказывающим влияние на количество Prom1+ клеток в зубчатой извилине гиппокампа, является радиационное воздействие (F=20,31; p<<0,001), тогда как влияние фактора стресса не было статистически значимым.

Таблица 1

Содержание Prom1+ клеток в гранулярном слое зубчатой извилины гиппокампа

Группы

Prom1+ клетки, %

Prom1+ клетки, 100 тыс./мм2

Контроль

1,6±0,3

18±3

0,1 Гр

56±8‡

690±100‡

1 Гр

21±6‡

250±80‡

5 Гр

19±7‡

210±70‡

Примечание: ‡ – статистически значимые отличия от значения в группе объединённого контроля, р<0,05.

При сравнении синаптической пластичности, оцениваемой по экспрессии белка нейромо-дулина (GAP43+ клетки), в группах БК и 0 Гр выявлено статистически значимое снижение числа (t=3,25; p<<0,001) и доли (t=2,82; p<<0,001) GAP43+ клеток в молекулярном слое зубчатой извилины в группе ложного облучения 0 Гр (табл. 2). Поэтому количество GAP43+ клеток в остальных экспериментальных группах сравнивали с группой 0 Гр.

Во всех облучённых группах выявлено статистически значимое увеличение доли и числа GAP43+ клеток в гранулярном и молекулярном слоях зубчатой извилины (табл. 2). Облучение в дозе 0,1 Гр приводило к 2-3-кратному увеличению этих показателей в молекулярном слое и к 5-кратному увеличению в гранулярном слое, с дальнейшим увеличением уровня радиационного воздействия эти показатели сохранялись на том же уровне, что и при облучении в малой дозе 0,1 Гр. В области хилуса зубчатой извилины изучаемые показатели не имели статистически значимых отличий от группы 0 Гр.

При проведении многофакторного дисперсионного анализа с использованием обобщённой линейной модели (R2=0,37) было выявлено, что стресс, связанный с манипуляциями при облучении животных, статистически значимо снижал число GAP43+ клеток в молекулярном слое зубчатой извилины (F=6,52; p=0,01). Радиационный фактор оказывал статистически значимое влияние на количество GAP43+ клеток в молекулярном (F=10,42; p<0,001) и гранулярном (F=6,28; p<0,001) слоях зубчатой извилины.

Таблица 2

Содержание GAP43+ клеток в зубчатой извилине гиппокампа

Группа

GAP43+ клетки, %

GAP43+ клетки, 100 тыс./мм2

Молекулярный слой

БК

58±7

44±5

0 Гр

32±7*

23±4*

0,1 Гр

72±9†

63±8†

1 Гр

73±9†

62±8†

5 Гр

71±6†

66±3†

Гранулярный слой

БК

2,4±0,5

20±4

0 Гр

1,5±0,3

13,7±2,9

0,1 Гр

8,1±1,9†

82±20†

1 Гр

10,9±2,6†

105±29†

5 Гр

6,2±0,7†

55±8†

Хилус

БК

2,1±0,8

3,3±1,2

0 Гр

2,5±0,9

4,4±1,7

0,1 Гр

7,2±2,7

13±5

1 Гр

6,3±2

10±4

5 Гр

4,1±1,5

8±3

Примечания: * – статистически значимые отличия от БК, р<0,05; † – статистически значимые отличия от группы 0 Гр, р<0,05.

Не обнаружено статистически значимых отличий при сравнении контрольных групп БК и 0 Гр по содержанию клеток активированной микроглии (CD74+ клеток) в области зубчатой извилины гиппокампа, поэтому показатели в экспериментальных группах сравнивали с общей группой контроля (табл. 3).

При попарном сравнении было выявлено статистически значимое снижение доли CD74+ клеток в молекулярном слое зубчатой извилины гиппокампа в группе мышей, облучённых в дозе 0,1 Гр (t=3,27; p=0,002). Кроме этого, статистически значимым было снижение доли CD74+ клеток в хилусе при облучении в дозе 0,1 Гр (t=2,41; p=0,02) и повышение этого показателя при облучении в дозе 5 Гр (t=2,08; p=0,04). Во всех группах не было выявлено статистически значимого изменения числа CD74+ клеток в зубчатой извилине.

При проведении многофакторного дисперсионного анализа с использованием обобщённой линейной модели (R2=0,20) было выявлено, что фактор стресса не оказывает статистически значимого влияния на анализируемые показатели, а фактор дозы оказывал статистически значимое влияние только на абсолютное количество CD74+ клеток в молекулярном слое зубчатой извилины (F=3,75; p=0,017). При этом нужно отметить нелинейную зависимость числа CD74+ клеток от дозы: при облучении в дозе 0,1 Гр этот показатель снижается, а затем при увеличении дозы фракционированного облучения возрастает и на участке от 0,1 до 5 Гр удовлетворительно описывается линейной функцией (R2=0,25; F=10,6; p=0,003).

Таблица 3

Содержание CD74+ клеток в зубчатой извилине гиппокампа

Группы

CD74+ клетки, %

CD74+ клетки, 100 тыс./мм2

Молекулярный слой

Контроль

3,2±0,6

2,7±0,3

0,1 Гр

1,18±0,21‡

1,9±0,4

1 Гр

2,1±0,4

2,2±0,4

5 Гр

3±0,4

3,5±0,3

Гранулярный слой

Контроль

0,34±0,05

3,9±0,5

0,1 Гр

0,49±0,09

6,2±1,2

1 Гр

0,21±0,10

2,5±1,3

5 Гр

0,47±0,09

5,5±1

Хилус

Контроль

0,88±0,2

2,5±0,9

0,1 Гр

0,32±0,12‡

0,9±0,3

1 Гр

1,26±0,6

3,1±1,5

5 Гр

1,6±0,29‡

3,9±0,7

Примечание: ‡ – статистически значимые отличия от значения в группе общего контроля, р<0,05.

При оценке общего количества клеток в разных зонах зубчатой извилины было выявлено статистически значимое увеличение плотности клеток в молекулярном слое у мышей группы 0 Гр на 16% по сравнению с группой БК (табл. 4) (t=2,43; p=0,018). Поэтому далее показатели плотности клеток в области зубчатой извилины в экспериментальных группах сравнивали с показателями для группы 0 Гр.

Статистически значимые отличия по показателю плотности клеток были выявлены в группе мышей, которых подвергали облучению в дозе 0,1 Гр. Здесь отмечено увеличение плотности клеток только в молекулярном слое зубчатой извилины на 26% по сравнению с группой 0 Гр (табл. 4) (t=2,67; p=0,009). В других зонах зубчатой извилины статистически значимых изменений этого показателя отмечено не было.

При проведении многофакторного дисперсионного анализа с использованием обобщённой линейной модели было выявлено, что фактор стресса не оказывал статистически значимого влияния на плотность клеток ни в одном из отделов зубчатой извилины гиппокампа. Таким образом, несмотря на выявленные при попарном сравнении отличия группы 0 Гр и БК по плотности клеток в молекулярном слое зубчатой извилины, эффект снижения этого показателя при действии стресса не подтверждается другими методами статистического анализа. Статистически значимое влияние фактора дозы было выявлено при анализе плотности клеток в молекулярном слое зубчатой извилины (F=4,16; p=0,007). Здесь фракционированное гамма-облучение приводило к росту показателя, который в дальнейшем при увеличении дозы снижался и статистически значимо не отличался от значения в группе 0 Гр.

Таблица 4

Плотность клеток в разных зонах зубчатой извилины гиппокампа (100 тыс./мм2)

Группа

Молекулярный слой

Гранулярный слой

Хилус

Бк

85±4

1106±25

241±12

0 Гр

99±4*

1180±70

230±10

0,1 Гр

125±9†

1220±16

250±9

1 Гр

105±4

1160±20

232±15

5 Гр

111±5

1160±40

244±18

Примечания: * – статистически значимые отличия от БК, р<0,05; † – статистически значимые отличия от группы 0 Гр, р<0,05.

Заключение

Проведённые исследования выявили стимулирующее действие фракционированного гамма-облучения в кумулятивных дозах 0,1 и 1 Гр в раннем постнатальном периоде на когнитивную функцию (пространственную память) у мышей. Не показано негативного эффекта облучения в большой дозе 5 Гр на когнитивные способности у мышей в лабиринте Барнса.

Физиологической основой выявленного эффекта стимуляции когнитивных способностей при облучении в малых и средних дозах может быть активация процессов нейрогенеза в зубчатой извилине гиппокампа у мышей [3-5]. В наших исследованиях у животных с максимально выраженной стимуляцией когнитивной функции, выявленной в лабиринте Барнса (облучённые в дозе 0,1 Гр), регистрировалось и максимально выраженная стимуляция нейрогенеза: отмечено увеличение в 35 раз числа нейральных стволовых Prom1+ клеток в гранулярном слое зубчатой извилины и повышение на 16% общей плотности клеток в молекулярном слое зубчатой извилины.

Другим механизмом, связанным с когнитивной функцией, может быть повышение синаптической пластичности [4]. В наших исследованиях в группе, облучённой в дозе 0,1 Гр, зарегистрировано 5-кратное увеличение числа клеток, экспрессирующих нейромодулин – маркер новых синаптических контактов (GAP43+ клетки). При облучении в дозах 1 Гр и 5 Гр отмечено менее выраженное увеличение числа стволовых клеток, но сопоставимое с группой 0,1 Гр число клеток, экспрессирующих нейромодулин.

Известно, что провоспалительная активация микроглии является фактором, ассоциированным с ухудшением когнитивной функции и памяти [3, 4, 7]. В данной работе выявлено снижение доли клеток активированной микроглии (CD74+ клеток) в молекулярном слое и хилусе зубчатой извилины у мышей, облучённых в дозе 0,1 Гр, но не общего количества этих клеток.

Таким образом, было выявлено стимулирующее действие малых доз фракционированного гамма-облучения в раннем постнатальном периоде на когнитивную функцию у мышей, которое снижается с увеличением уровня радиационного воздействия. В основе такого эффекта лежит стимуляция нейрогенеза и повышение синаптической пластичности, а также возможное противовоспалительное действие облучения в малой дозе. Дальнейшие исследования необходимы для изучения обучаемости и памяти, а также морфо-функциональных изменений в головном мозге у мышей в отдалённые сроки после облучения.

Список литературы Влияние фракционированного гамма-облучения в первый месяц жизни на когнитивную функцию у мышей

  • Атаманюк Н.И. Влияние средних и малых доз ионизирующего излучения на высшую нервную деятельность человека и животных //Медицина экстремальных ситуаций. 2023. № 3. С. 5-13.
  • ICRP, 2012. ICRP Statement on tissue reactions and early and late effects of radiation in normal tissues and organs – threshold doses for tissue reactions in a radiation protection context. ICRP Publication 118 //Ann. ICRP. 2012. V. 41, N 1-2. P. 1-322.
  • Liu Y., Ma H., Wang Y., Ren B., Liu L., Sun A., Tang F. Neonatal exposure to low-dose X-ray causes be-havioral defects and abnormal hippocampal development in mice //IUBMB Life. 2023. V. 75, N 6. P. 530-547.
  • Kempf S.J., Casciati A., Buratovic S., Janik D., von Toerne C., Ueffing M., Neff F., Moertl S., Stenerlöw B., Saran A., Atkinson M.J., Eriksson P., Pazzaglia S., Tapio S. The cognitive defects of neonatally irradiated mice are accompanied by changed synaptic plasticity, adult neurogenesis and neuroinflammation //Mol. Neurodegener. 2014. V. 9. P. 57. DOI: 10.1186/1750-1326-9-57.
  • Кичигина В.Ф., Шубина Л.В., Попова И.Ю. Роль зубчатой извилины в осуществлении функций гиппо-кампа: здоровый мозг //Журнал высшей нервной деятельности им. И.П. Павлова. 2022. T. 72, № 3. С. 317-342.
  • Pasqual E., Boussin F., Bazyka D., Nordenskjold A., Yamada M., Ozasa K., Pazzaglia S., Roy L., Thierry-Chef I., de Vathaire F., Benotmane M.A., Cardis E. Cognitive effects of low dose of ionizing radiation – Lessons learned and research gaps from epidemiological and biological studies //Environ. Int. 2021. V. 147. P. 106295. DOI: 10.1016/j.envint.2020.106295.
  • Ung M.C., Garrett L., Dalke C., Leitner V., Dragosa D., Hladik D., Neff F., Wagner F., Zitzelsberger H., Miller G., de Angelis M.H., Rößler U., Vogt Weisenhorn D., Wurst W., Graw J., Hölter S.M. Dose- dependent long-term effects of a single radiation event on behaviour and glial cells //Int. J. Radiat. Biol. 2021. V. 97, N 2. P.156-169.
  • Collett G., Craenen K., Young W., Gilhooly M., Anderson R.M. The psychological consequences of (perceived) ionizing radiation exposure: a review on its role in radiation-induced cognitive dysfunction //Int. J. Radiat. Biol. 2020. V. 96, N 9. P. 1104-1118.
  • Шишкина Е.А., Атаманюк Н.И., Перетыкин А.А., Пряхин Е.А. Дозы на весь организм и их неопределённость при облучении мышей на гамма-радиобиологической установке ИГУР-1М //АНРИ. 2024. T. 117, № 2. C. 63-75.
  • O’Leary T.P., Brown R.E. The effects of apparatus design and test procedure on learning and memory per-formance of C57BL/6J mice on the Barnes maze //J. Neurosci. Methods. 2012. V. 203, N 2. P. 315-324.
  • Beckervordersandforth R., Deshpande A., Schäffner I., Huttner H.B., Lepier A., Lie D.C., Götz M. In vivo targeting of adult neural stem cells in the dentate gyrus by a split-cre approach //Stem Cell Reports. 2014. V. 2, N 2. P. 153-162.
  • Borges K., McDermott D.L., Dingledine R. Reciprocal changes of CD44 and GAP-43 expression in the dentate gyrus inner molecular layer after status epilepticus in mice //Exp. Neurol. 2004. V. 188, N 1. P. 1-10.
  • Jenrow K.A., Brown S.L., Lapanowski K., Naei H., Kolozsvary A., Kimet J.H. Selective inhibition of micro-glia-mediated neuroinflammation mitigates radiation-induced cognitive impairment //Radiat. Res. 2013. V. 179, N 5. P. 549-556.
  • Bankhead P., Loughrey M.B., Fernández J.A., Dombrowski Y., McArt D.G., Dunne P.D., McQuaid S., Gray R.T., Murray L.J., Coleman H.G., James J.A., Salto-Tellez M., Hamilton P.W. QuPath: Open source software for digital pathology image analysis //Sci. Rep. 2017. V. 7, N 1. P. 16878. DOI: 10.1038/s41598-017-17204-5.
  • R Core Team. R: A language and environment for statistical computing. R Foundation for Statistical Compu-ting, Vienna, Austria, 2022. [Электронный ресурс]. URL: https://www.R-project.org (дата обращения 16.07.2024).
Еще