Влияние иммобилизированной гиалуронидазы на мобилизацию прогениторных клеток гранулоцитарным колониестимулирующим фактором

Актуальность. Полученные в последние годы сведения о свойствах и закономерностях жизнедеятельности мультипотентных клеток-предшественников открыли возможность развития нового направления в лечении многих заболеваний – с помощью клеточной терапии. При этом наиболее физиологичным подходом к решению задач регенеративной медицины является фармакологическая стимуляция эндогенных стволовых клеток (СК). Ранее в экспериментах in vitro и in vivo была показана возможность модификации функций прогени- торных клеток различных классов с помощью нативной гиалуронидазы. В определенных условиях данный фермент расщепляет гиалуроновую кислоту межклеточного матрикса до полимеров, активирующих процессы клеточного деления и дифференцировки, а также вызывает усиление индуцируемого внешними факторами выхода СК в кровь. В то же время практическое применение нативной гиалуронидазы в качестве средства для регенеративной медицины не представляется возможным вследствие проявления ее активности в отношении СК лишь в случае применения в высокотоксичных дозах. В то же время существует нанотехнология электроннолучевого синтеза, позволяющая получать практически нетоксичные иммобилизированные препараты белковой природы.

Цель исследования – изучить влияние иммобилизированной (им) гиалуронидазы (ГД) на состояние костномозгового пула клеток-предшественников и их мобилизацию, индуцированную гранулоцитарным колониестимулирующим фактором (Г-КСФ).

Материал и методы. ИмГД в дозах 1000, 500, 250 и 50 ЕД/кг вводили внутрибрюшинно и перорально интактным мышам и животным, получавшим Г-КСФ в мобилизующем режиме. Иммобилизацию фермента осуществляли на полиэтиленгликоле с молекулярной массой 1500 дальтон (Да) путем воздействия направленным потоком ускоренных электронов с энергией электронов 2,5 мегаэлектронвольт (МэВ). В качестве препарата сравнения использовали нативную ГД, которую вводили внутрибрюшинно в дозе 1000 ЕД/кг. С помощью культуральных методов в костном мозге и периферической крови определяли содержание кроветворных и мезенхимальных прогениторных клеток.

Результаты. Введение препаратов ГД при- водило к значительному увеличению числа прогениторных клеток различных классов в костном мозге. При этом влияние имГД при ее как парентеральном, так и пероральном приеме существенно превосходило таковое у препарата нативного фермента. Отмечалось более значимое увеличение содержания эритроидных (Э), грануломоноцитарных (ГМ), фибробластных (Ф) колониеобразующих единиц (КОЕ) и мезенхимальных стволовых клеток (МСК) в костном мозге, а также стимуляция индуцируемой Г-КСФ мобилизации предшественников в периферическую кровь под влиянием имГД. При этом наиболее выраженный усиливающий мобилизацию эффект у препарата имГД наблюдается при использовании дозы в 50ЕД/кг, когда количество КОЕ-Ф у данных животных составляло 138, 1213, 187% на 3, 5, 8-е сут в периферической крови соответственно от аналогичных показателей у мышей, получавших только Г-КСФ.

Выводы. Выявленная активность иммобилизированной ГД в отношении клеток-предшественников позволяет рассматривать его в качестве потенциального высокоэффективного средства для регенеративной медицины и гематологии.