Влияние растительного средства на течение экспериментального гепаторенального синдрома, вызванного комплексом противотуберкулезных средств

Успешность лечения туберкулеза во многом зависит от возможности проведения полного курса терапии туберкулостатиками в адекватных ситуации дозах и режимах. Тем не менее наблюдаемая частота лекарственных осложнений приводит к необходимости смены препаратов, изменения доз, перерывам в лечении, что в итоге может привести к снижению эффективности терапии. Одним из частых осложнений, лимитирующих назначение противотуберкулезных препаратов, является нарушение функций почек и печени на фоне приема указанных средств или уже имеющиеся сниженные функциональные возможности этих органов в результате их отягощенных состояний. По данным литературы, нарушения функций почек разной степени выраженности наблюдаются в 68,3% случаев при назначении туберкулостатиков, а среди больных туберкулезом легких в 16,3% случаев развивается токсический гепатит лекарственной этиологии [4]. Нарушения функционального состояния почек и печени связывают с нефро-и гепатотоксическими свойствами туберкулостатиков [4,5].

В сложившейся ситуации представляется оправданным и логичным предупреждать или максимально снижать токсическое действие противотуберкулезных препаратов. Одним из вариантов решения указанной проблемы, на наш взгляд, является использование растительных средств, которые способны оказывать не только нефро- и гепатопротекторное действие, но и повышать адаптивные возможности организма в целом. Ранее нами были установлены выраженные нефропротекторные свойства комплексного растительного средства, условно названного «нефрофит» при поражениях почек токсической и ишемической этиологии [6].

Целью настоящего исследования явилось определение влияния «нефрофита» на функциональную активность почек и печени при назначении комплекса туберкулостатиков.

Материалы и методы

Исследования проведены на крысах линии Wistar обоего пола массой 160-180 г. Повреждение почек и печени туберкулостатиками моделировали по методике Н.П. Скакуна, О.Е. Табачука (1992). Лабораторным животным внутрижелудочно с 2-часовым интервалом вводили противотуберкулезные препараты (ПТП): изониазид (50 мг/кг), рифампицин (50 мг/кг), пиразинамид (1,5 мг/кг) 1 раз в сутки в течение 14 дней.

Животные опытной группы на фоне введения туберкулостатиков получали комплексный фитоэкстракт «нефрофит», в состав которого входят сухие экстракты: толокнянки обыкновенной – 2 части, ортосифона тычиночного - 4 части, горца птичьего – 3,5 части, десмодиума канадского – 0,5 части, в экспериментально-терапевтической дозе 150 мг/кг массы 1 раз в сутки, внутрижелудочно, в течение эксперимента. Препарат сравнения «канефрон» вводили другой группе животных на фоне введения ПТП в объеме 1,5 мл/кг 1 раз в сутки внутрижелудочно по аналогичной схеме. Животные контрольной группы получали дистиллированную воду в эквиобъемных количествах в аналогичных условиях. На 3-и и 15-е сутки после введения ПТП оценивали функциональное состояние почек и печени общепринятыми методами, а также определяли содержание продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) и активность ферментов антиоксидантной защиты организма (АОЗ). Концентрацию диеновых конъюгатов (ДК) в плазме крови определяли по Гаврилову, Мишкорудной (1983). Концентрацию малонового диальдегида (МДА) определяли в сыворотке крови и в гомогенате почек белых крыс (Osakawa, Matshushita, 1980). Активность каталазы сыворотки крови определяли по Королюк и соавт., (1988). Активность супероксиддисмутазы (СОД) определяли по Чевари и соавт., (1985). Статистическая обработка результатов проводилась с использованием t-критерия Стьюдента. Полученные данные представлены в таблицах 1 - 5.

Результаты и обсуждение

Как следует из данных табл. 1, введение комплекса ПТП у белых крыс на 3-и сутки наблюдения не оказывает заметного влияния на функциональное состояние почек, тем не менее, отмечалась выраженная индукция процессов свободнорадикального окисления биомакромолекул и компенсаторное увеличение каталитической активности. Так, концентрация ДК и МДА в крови почках белых крыс возрастала по сравнению с показателями у интактных животных соответственно в 1,9, 1,5 и 1,6 раза.

Курсовое введение «нефрофита» оказывало антиоксидантное действие, об этом свидетельствовало достоверное снижение уровня накопления ДК и МДА в крови и гомогенате почек животных на 24, 34 и 20 %, также отмечалось выраженное повышение активности каталазы на 70% соответственно по сравнению с показателями у крыс контрольной группы. При этом антиоксидантная активность препарата сравнения «канефрона» значительно уступала действию «нефрофита».

Таблица 1

Влияние «нефрофита» на показатели азотистого обмена, перекисного окисления липидов и активность ферментов АОЗ в сыворотке крови белых крыс при комплексном введении противотуберкулезных препаратов (3-и сутки)

Показатели	Группы
	Интактная	Контрольная (ПТП)	Опытная 1 (ПТП + «Нефрофит»	Опытная 2 (ПТП + «Канефрон»
Креатинин, мкмоль/л	62,00±0,77	64,50±2,35	62,25±1,18	63,78±0,76
Мочевина, ммоль/л	5,37±0,46	5,62±0,41	5,39±0,59	5,45±0,76
ДК, усл. ед.	6,11±0,39	11,45±0,87*	8,73±0,52**	10,63±1,09
МДА в сыворотке, мкмоль/мл	11,45±0,83	17,59±1,56*	11,53±0,94**	15,74±1,26
МДА, нмоль/г ткани	10,30±0,56	16,47±1,52*	13,24±1,28	16,82±1,56
Каталаза, млкат/л	4,01±0,37	4,20±0,45	7,25±0,66**	4,72±0,36

Примечание: здесь и далее * - различия достоверны между группами интакт – контроль, ** - различия достоверны между группами контроль – опыт при Р ≤ 0,05

Как следует из таблицы 2, курсовое введение ПТП вызывает у лабораторных животных умеренное поражение почек, сопровождающееся гиперазотемией, протеинурией, повышением диуреза, снижением скорости клубочковой фильтрации (СКФ) и относительной плотности мочи. Так, на 15-е сутки исследования в сыворотке крови животных контрольной группы наблюдали возрастание концентрации креатинина и мочевины в 1,2 и 1,3 раза соответственно; уровень протеинурии – на 50 %; диурез увеличивается в 1,5 раза, а СКФ снижалась на 26 % по сравнению с данными у интактных крыс. Снижение СКФ, удельного веса мочи и увеличение диуреза у крыс контрольной группы следует рассматривать как проявление угнетения концентрационной функции почек под влиянием комплекса туберкулостатических средств.

Таблица 2

Влияние «нефрофита» на функциональное состояние почек белых крыс при экспериментальной лекарственной нефропатии, вызванной комплексным введением противотуберкулезных препаратов (ПТП) (15-е сутки)

Показатели	Группы животных
	Интактная	Контрольная (ПТП)	Опытная 1 (ПТП + «Нефрофит»)	Опытная 2 (ПТП + «канефрон»)
Креатинин, мкмоль/л	52,10±3,16	63,02±3,98*	54,42±3,02	56,83±5,11
Мочевина, ммоль/мл	5,56±0,32	7,19±0,38*	5,78±0,42	6,45±0,58
Белок в моче, г/л	0,70±0,05	1,05±0,07*	0,65±0,04**	0,78±0,06
СКФ, мкл/мин	173,41±10,34	127,68±9,37*	152,90±8,76	134,82±12,03
Объем мочи за 2 часа, мл/100 г.	80,66±5,02	120,50±6,56*	86,21±4,85**	89,36±7,93
Удельный вес мочи	1030,21±65,47	1021,14±78,01	1029,45±76,31	1024,01±91,22

Курсовое введение «нефрофита» в указанной дозе сопровождалось сохранением функционального состояния почек. В частности, не наблюдали увеличения уровня креатинина и мочевины в сыворотке крови животных опытных групп, роста протеинурии. СКФ повышалась в 1,2 раза; диурез снижался на 28 % по сравнению с контролем. Основные регистрируемые показатели у животных опытной группы к данному сроку наблюдения статистически не отличались от аналогичных данных у интактных крыс.

Данные, приведенные в таблице 3, свидетельствуют, что введение ПТП сопровождается выраженной индукцией процессов ПОЛ и снижением активности эндогенной антиокислительной системы организма. Так, на 15-е сутки эксперимента наблюдали повышение содержания ДК и МДА в сыворотке крови и почках белых крыс соответственно в 2,3; 1,4 и 1,5 раза; одновременно с этим происходило снижение активности каталазы и СОД на 29 и 45 % соответственно по сравнению с показателями у крыс интактной группы.

Таблица 3

Влияние «нефрофита» на показатели перекисного окисления липидов и активность ферментов АОЗ в сыворотке крови белых крыс при комплексном введении противотуберкулезных препаратов (15-е сутки)

Группы животных	ДК, усл. ед.	МДА, в сыворотке крови, мкмоль/л	МДА, мкмоль/г ткани почки	Каталаза, млкат/л	СОД, в эритроцитах, мкмоль/л
Интактная	5,81±0,42	13,28±0,65	14,01±1,27	8,60±0,61	14,06±1,26
Контрольная (ПТП)	10,34±0,72*	19,17±1,70*	21,59±1,76*	6,10±0,36*	7,69±1,04*
Опытная 1 (ПТП + «Нефрофит»	7,18±0,56**	13,94±0,76**	16,01±0,96**	8,61±0,77**	12,32±0,86**
Опытная 2 (ПТП + «Канефрон»	8,26±1,01	15,92±1,49	17,36±1,52	7,92±0,49	11,41±0,91

Курсовое введение «нефрофита» животным, получавшим ПТП, сопровождалось достоверным снижением накопления продуктов пероксидации липидов в крови и почках белых крыс. Так, под влиянием испытуемого средства происходило снижение концентрации ДК в сыворотке крови на 30 %; концентрации МДА в крови и почках белых крыс - на 27 и 26 % соответственно по сравнению с показателями у крыс контрольной группы. Наряду с этим, у животных, получавших фитоэкстракт, повышалась активность каталазы и СОД в сыворотке крови в 1,4 и 1,6 раза по сравнению с показателями у крыс контрольной группы. Антиоксидантная активность препарата сравнения в этих условиях уступала таковой у «нефрофита».

Как следует из таблицы 4, при сочетанном введении белым крысам изониазида, рифампицина и пирази-намида в указанных дозах в сыворотке крови повышается активность мембраносвязанных ферментов : аланинаминотрансферазы (АлТ) и аспартатаминотрансферазы (АсТ) в 2,2 и 1,5 раза соответственно по сравнению с показателями у крыс интактной группы. Наряду с этим, отмечали повышение в сыворотке крови: тимоловой пробы в 2,1 раза, концентрации общего билирубина в 7 раз, активности щелочной фосфатазы на 30% соответственно с аналогичными показателями у интактных крыс.

Влияние «нефрофита» на функциональное состояние печени белых крыс при комплексном введении противотуберкулезных препаратов (15-е сутки)

Таблица 4

Показатели	Группы животных
	Интактная	Контрольная (ПТП)	Опытная (ПТП + «Нефрофит»
АсТ, ЕД/л	38,41±2,68	86,01±5,17*	66,34±3,79**
АлТ, ЕД/л	58,09±4,17	87,59±7,01*	69,18±4,39**
Тимоловая проба, ЕД	0,81±0,05	1,70±0,08*	1,06±0,05**
Общий   билирубин, мкм/л	3,36±0,16	23,59±1,87*	19,56±1,23
Щелочная фосфатаза, ЕД/л	4,52±0,31	5,87±0,31	5,56±0,29

Под влиянием «нефрофита» на фоне введения туберкулостатиков наблюдали менее выраженные проявления цитолиза, холестаза, улучшалась белковообразующая функция печени. Так, уровни активности АсТ и АлТ и концентрация билирубина в сыворотке крови были ниже на 23, 21 и 17 % соответственно, показатель тимоловой пробы ─ на 38 % ниже по сравнению с аналогичными данными у животных контрольной группы.

При патоморфологическом исследовании было установлено, что сочетанное введение ПТП оказывает повреждающее действие на канальцы коркового слоя почек, в частности, на проксимальные канальцы. Просветы канальцев представлялись расширенными, многие из них были заполнены белковыми и гиалиноподобными массами. Эпителий канальцев был подвержен разной степени дистрофии (рис.1): некоторые эпителиальные клетки были увеличены в объеме и представляли собой рыхлые образования с небольшими компактными ядрами; другие клетки, наоборот, представлялись уплощенными и не содержали ядер или ядра имели бледную окраску. Также встречались канальцы в состоянии деструкции с разрушенными эпителием и базальной мембраной. На фоне курсового введения «нефрофита» отмечено его защитное действие на структуры канальцев. На рис. 2 просматриваются канальцы с сохраненными эпителием и базальной мембраной. Просветы канальцев свободны от возможных включений. При морфометрической оценке подтверждено нефрозащитное влияние данного средства (табл. 5).

Таблица 5

Влияние «нефрофита» на площадь и периметр канальцев при нефропатии, вызванной комплексным введением противотуберкулезных препаратов (ПТП) (15-е сутки)

Показатели	Группы животных
	Контрольная (ПТП)	Опытная (ПТП +«нефрофит»)
Площадь канальцев, мкм²	959,81±38,79	412,57±12,53**
Периметр канальцев, мкм	150,31±7,54	83,04±4,72**

Выводы и заключение . Таким образом, комплексное введение лабораторным животным рифампицина, изониазида, пиразинамида в указанных дозах сопровождается развитием полиорганной патологии, характеризующейся как гепаторенальный синдром и способствует развитию синдромов: цитолиза (повышение активности ферментов АсТ и АлТ), холестаза (возрастание активности щелочной фосфатазы, гипербилирубинемия) и мезинхимального воспаления (повышение показателя тимоловой пробы), а также вызывает снижение белково-синтетической функции печени, на что указывало повышение осадочной тимоловой пробы. Эти данные согласуются с положением о биотрансформации указанных препаратов, происходящих в основном в печени, вызывая ее токсические изменения [5]. Поражение почек при назначении ПТП характеризовалось незначительной азотемией, протеинурией, снижением скорости клубочковой фильтрации, умеренным повышением диуреза и гипостенурией. На фоне медикаментозного гепаторенального синдрома у белых крыс развивался оксидативный стресс с понижением возможностей эндогенной антиокислительной защиты. Также комплексное введение ПТП сопровождалось дистрофическими изменениями эпителия проксимальных канальцев и реакцией интерстициальной ткани.

Курсовое введение «нефрофита» животным на фоне ПТП сопровождалось нефропротекторным и умеренным гепатозащитным влиянием, благодаря способности данного полиэкстракта экранировать отрицательное действие противотуберкулезных препаратов. Этот эффект обусловлен комплексом биологически активных веществ, прежде всего фенольной природы, оказывающих антиоксидантное, мембраностабилизирующее действие [7]. Кроме того, в дополнительных сериях экспериментов было установлено стимулирующее влияние «нефрофита» на макрофагальное звено иммунитета при азати-оприновой иммуносупрессии у мышей линии СВА х F1 [1]. Также было показано, что данный полиэкстракт подавляет активность каспазы-3 в гомогенате почек белых крыс при их ишемии/реперфузии [8], что характеризует его как средство, ингибирующее индуцированный апоптоз. Эти наблюдения имеют определенное значение, поскольку есть данные, свидетельствующие о важной роли ускорения процессов ПОЛ при назначении ПТП как фактора, способствующего развитию указанных нарушений, а также роли индуцированного апоптоза в генезе лекарственных повреждений почек [9]. Очевидно, благодаря указанным свойствам «нефрофита», обеспечивается его положительное влияние на течение гепаторенального синдрома при использовании комплекса противотуберкулезных средств.

Рис. 1. Почка крысы. Контроль. 15-е сутки исследования. Расширение канальцев. Наличие в просвете канальцев белково-гиалиновоподобных цилиндров. Окраска гемотоксилин-эозином. Увел. 10х40

V С<

О о

«♦о

1 .. »'L 0

У О ;*•* "Л

“оу о

0_ф 1ft ^ ^^

• V^" ⁰ Г¹^

-0      $, .@ “ •

° '\- V ■■' ^и v**^ \. ч ^и |1Р‘      ‘*^к

Рис. 2. Почка. Курсовое введение «Нефрофита». 15 сутки исследования. В проксимальных канальцах почки отсутствуют белково-гиалиновые цилиндры. Окраска гематоксилин-эозином. Увел. 10х40