Выделение раковых клеток из крови больных с целью цитоморфологической диагностики злокачественных опухолей

Одним из основных показателей состояния и качества оказания онкологической помощи является достоверность морфологического подтверждения наличия злокачественного новообразования, которая в 2008 г. имеет прирост всего 0,3% [1]. Учитывая тот факт, что морфологическая верификация диагноза рака до начала лечения является непременным правилом онкологической диагностики, а также то, что игнорирование этого правила приводит к клиническим ошибкам, более чем у ¼ больных и задерживает начало лечения, следует рассматривать цитологическое исследование как одно из важнейших мероприятий в комплексном обследовании больных [2].

Основной тенденцией в развитии современной клинической онкологии остается стремление к выявлению злокачественных опухолей на раннем этапе их развития, что требует дальнейшего совершенствования методов диагностики. Важность подобного направления исследований вполне понятна, так как только при раннем выявлении злокачественных новообразований (ЗНО) существующие на сегодняшний день методы лечения могут привести к наибольшему успеху. Так, по данным Национального центра санитарного просвещения населения РФ, самая высокая скорректированная выживаемость (95%) отмечена при I стадии процесса. Диагностика злокачественных опухолей во II стадии процесса несколько снижает 5-летнюю выживаемость, которая составляет 79%. Диагностика опухолей в III стадии процесса дает 55%. Диагноз в IV стадии – это вероятность прожить 5 лет у 14,6% всех онкологических больных.

Цель исследования: разработать метод гемофильтроцитологического исследования крови и оценить его клиническую значимость для морфологической диагностики злокачественных новообразований (ЗНО).

Материалы и методы

В исследование были включены 93 больных с новообразованиями органов ЖКТ, легких и яичников. Из них 48 мужчин и 45 женщин. Возраст обследуемых пациентов составил от 23 до 71 года. Средний возраст – 47 лет.

Перед исследованием крови осуществляли сборку устройства для микропросеивания венозной крови. На дно стеклянного цилиндра, заключенного в пластиковый кожух, помещали пластмассовую решетку с закрепленным на ней с помощью металлического кольца калиброванным фильтром. Через верхнее отверстие в стеклянный цилиндр наливали из пробирки венозную кровь больного, взятую независимо от приема им пищи из локтевой вены в количестве 9 мл, разведенную в 1 мл 3,8% раствора цитрата натрия в соотношении 9:1. Затем пропускали исследуемую цитратную кровь через калиброванный фильтр с диаметром пор 6 мкм, при этом происходит задержка раковых клеток в осадке на фильтре. Осадок наносили на предметные стекла, предварительно обезжиренные и охлажденные для лучшего прилипания клеток и высыхания. Фиксировали мазки-отпечатки 3% спиртовым раствором Лейшмана 2-4 мин. Затем смывали дистиллированной водой и красили азур-эозиновой смесью в соотношении 3:1 в течение 6-8 минут. После покраски промывали дистиллированной водой, сушили на воздухе и приступали к просмотру под микроскопом с увеличением х 200.

Результаты исследования и их обсуждение

При специальном поиске раковых клеток, циркулирующих в крови больных, обнаружить эти клетки до недавнего времени не удавалось.

Одним из патогенетических механизмов, способствующих развитию злокачественных новообразований, является активация ангиогенеза. Благодаря образованию новых сосудов опухоль более 2 мм в диаметре получает необходимые для роста и сосудистой инвазии питательные вещества и кислород, поскольку поддержание жизнеспособности таких опухолей за счет одной пассивной диффузии уже не- возможно [3, 4]. Ангиогенез – сложный процесс, в регуляции которого участвуют как стимулирующие, так и ингибирующие факторы [5]. Он начинается тогда, когда доминируют факторы, стимулирующие ангиогенез. К их числу в первую очередь относятся фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), фактор роста фибробластов (FGF) и трансформирующие факторы роста альфа и бета, они известны как факторы «запуска» ангиогенеза [6, 7].

VEGF – это один из наиболее активных регуляторов как физиологического, так и патологического ангиогенеза [8]. Он способствует росту сосудистой сети внутри опухоли, однако и структурно, и функционально эта сеть отличается от нормальной и характеризуется незрелостью сосудов, их повышенной проницаемостью, извитостью. В развитии таких патологических сосудов существенную роль играет действие VEGF на эндотелиальные клетки [9]. Высокая экспрессия VEGF в конечном итоге приводит к повышению проницаемости сосудов in vitro, что ведет к увеличению интерстициального и внутриопухолевого давления, а следовательно, способствует проникновению опухолевых клеток в сосудистое русло. Таким образом, уже в начальных стадиях новообразований высока вероятность развития карцинемии.

Из 93 больных, подвергнутых гемофильтроцитологическому исследованию крови, у 87 были обнаружены опухолевые клетки. Морфологическая оценка позволила обнаружить у 60 пациентов в клетках признаки, характерные для аденокарценомы и плоскоклеточного рака, у 27 обследованных отдифференцировать опухоль в виду недостаточности патогномоничных признаков не удалось (табл. 1).

Таблица 1 Морфологические особенности выявленных опухолей

К сожалению, у 6 онкологических больных гемофильтроцитологическое исследование крови не выявило карцинемию. Следовательно, достоверность данного метода исследования на основании полученных результатов составила 93,5%.

Обнаруженные у 87 больных злокачественные опухоли распределили по стадиям (табл. 2).

Таблица 2

Распределение злокачественных новообразований по стадиям

Невозможно не отметить тот факт, что кровь, наверное, наиболее доступный объект в организме человека для быстрого и повсеместного исследования. Кроме того, она в виду своей жидкостной структуры не подлежит гистологической обработке, следовательно, ее гемофильтроцитологическое исследование является единственно возможным методом морфологической диагностики.

Заключение

Таким образом, гемофильтроцитологическое исследование крови позволяет: 1) эффективно выявлять у больных на амбулаторном этапе обследования злокачественные новообразования; 2) в большинстве случаев определять гистологическую форму опухоли, тем самым повышать процент морфологического подтверждения диагноза.