Взаимосвязь экспрессии генов CCR5 и RANTES в лейкоцитах крови больных раком молочной железы с полиморфизмом промоторных регионов генов цитокинов

Материал и методы. Обследовано 88 больных РМЖ T1-4N0-3M0. Материалом для исследования служила периферическая кровь. Из лейкоцитов выделяли РНК «горячим фенольным методом» и ДНК методом фенол-хлороформенной экстракции с протеиназой К. Экспрессию генов ССR5 и RANTES в лейкоцитах крови оценивали с помощью метода обратно-транскриптазной ПЦР в режиме реального времени. Экспрессию CCR5 и RANTES выражали в процентах по отношению к конститутивно-экспрессируемому гену-рефери фермента GAPDH (glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase). При помощи ПДРФ-анализа был исследован однонуклеотидный полиморфизм промоторных регионов генов IL4, IL6 и IL10 в позициях -590 С→T, -174 G^C и -592 А^С соответственно. Генотипи- рование TNFа было проведено в позициях -863 С→А, -308 G→А и IL1β в позициях -31C→T, -3954C→T их промоторных регионов. Участки промоторного региона генов амплифицировали с использованием пар специфичных праймеров, затем продукты амплификации подвергали гидролизу эндонуклеазами рестрикции. Детекцию двух полиморфных вариантов гена IL18 проводили, используя аллель-специфическую ПЦР.

Результаты. Экспрессия CCR5 в лейкоцитах крови больных РМЖ до лечения ассоциирована с полиморфизмом промоторного региона гена IL1b -3954C/T rs1143634. У гетерозигот экспрессия CCR5 достоверно в 1,5 раза ниже, чем у гомозигот по мажорному CC аллелю (р=0,0153). Показана ассоциация с экспрессией CCR5 полиморфизма промоторного региона гена IL10 -592C/A rs1800872. У гетерозигот экспрессия CCR5 достоверно в 1,5 раза ниже, чем у гомозигот по мажорному CC аллелю (р=0,0199), при этом редкий аллель А ассоциирован с низкой транскрипционной активностью IL-10 и низкой экспрессией белка, и снижение экспрессии CCR5 у гетерозигот свидетельствует о роли IL10 в up-регуляции экспрессии CCR5 в лейкоцитах крови больных РМЖ до лечения. В нашем случае редкие аллели полиморфного варианта промоторного региона гена TNFa -308G/А rs1800629 и -863 C/A rs1800630, которые уве- личивают транскрипционную активность TNFa, ассоциированы со сниженной экспрессией RANTES в лейкоцитах крови больных РМЖ до лечения. С другими полиморфизмами экспрессия CCR5 и RANTES не ассоциирована. При исследовании полиморфизма гена рецептора CCR5 установлено, что на уровне организма больных РМЖ носительство гетерозиготного генотипа никак не влияет на экспрессию мРНК CCR5 в лейкоцитах крови. В целом полученные данные указывают на новые взаимосвязи генов цитокинов и хемокинов в прогрессии рака молочной железы.