Взаимосвязь соматических мутаций и полиморфизма гена р53 у больных раком молочной железы

Актуальность. При возникновении онкологических заболеваний важную роль играют функционально-значимые полиморфизмы ключевых генов, вовлеченных в процессы за- программированной клеточной гибели (апоптоза), репарации и контроля клеточного цикла. Наиболее известным и хорошо изученным геном, относящимся к данной группе, является онкосупрессор р53, в кодирующей области которого обнаружен функциональный полиморфизм (Arg72Pro). Эти формы белка р53 отличаются способностью связывать компоненты транскрипционного аппарата клетки, активировать транскрипцию, запускать программу апоптоза, физически взаимодействовать с белком р73, а также репрессировать трансформацию первичных клеток. В 50–60 % злокачественных опухолей встречаются мутации гена р53, которые могут приводить к инактивации способности белка р53 тормозить пролиферацию и индуцировать апоптоз. Широкий паттерн таких мутаций (делеции, инсерции, точковые замены) ассоциирован с неблагоприятным прогнозом и плохим исходом заболевания. При злокачественных новообразованиях различных локализаций показана селекция Arg аллеля в опухолевой ткани, ассоциированная с высокой частотой соматических мутаций в гене р53, что взаимосвязано с более агрессивным течением заболевания (Bo-nafe M. et al., 2003). Однако остается не ясной популяционная специфичность этого явления и механизмы ассоциированности мутаций р53 с полиморфизмом при конкретной локализации.

Целью работы явилось исследование взаимосвязи полиморфизма и соматических мутаций гена р53 в крови и опухолевой ткани при раке молочной железы (РМЖ).

Материал и методы. Проанализированы образцы ДНК из крови (n=110) и из опухоли (n=46) больных РМЖ. Оценку полиморфизма 72 кодона гена р53 проводили с помощью ПЦР-ПДРФ (Ara S. et al., 1990). Скрининг соматических мутаций 7-го и 8-го экзонов гена р53 осуществляли с помощью метода ПЦР-SSCP (Бартновский А.Э. и др., 2003). Для проверки гипотезы о значимости различий между исследуемыми группами использовали критерий χ² (при значении абсолютных частот больше 10) и критерий Фишера (при значении абсолютных частот меньше 5). Для отклонения нулевой гипотезы (отсутствие различий) принимали уровни статистической значимости р ≤0,05.

Результаты. В опухолевой ткани больных РМЖ по сравнению с кровью нами было обнаружено повышение частоты Arg/Arg генотипа (63,1 % и 49,0 % соответственно; различия недостоверны ввиду малочисленности исследуемой выборки) и уменьшение частоты гетерозигот

(Arg/Pro→Arg/Arg; 37,3%→21,7%; p=0,059). Можно полагать, что в опухолевой ткани происходит преимущественный отбор клеток с генотипом Arg/Arg. Причиной наблюдаемого, вероятно, служит явление потери гетерозиготности, которое приводит к отбору более «благоприятного» для опухоли аллеля, который часто ассоциируется с прогрессией опухоли (Willers H. et al., 2000). Обнаруженная частота мутаций в 7-м (18,6 %) и 8-м (50,0 %) экзонах согласуется с литературными данными (Dimitrakakis C. et al., 2002), хотя частота мутирования 7 экзона несколько меньше, что скорей всего объясняется специфической амплификацией необходимого фрагмента. При исследовании взаимосвязи полиморфных генотипов с соматическими мутациями нами было показано, что у больных с нормальным статусом 7 экзона гена р53 в опухоли статистически значимо повышена частота Arg аллеля (0,84; p=0,0005) и Arg/Arg генотипа (74,3 %; F=0,059) по сравнению с пациентками, несущими мутации в данном экзоне (0,44; 37,5 % соответственно). Напротив, при сравнении с пациентками, имеющими нормальный статус гена р53 по 7-му экзону в опухоли, у больных с мутантным 7-м экзоном частота Pro аллеля и Pro/Pro генотипа увеличена (0,16→ 0,56, p=0,0005; 5,7%→50,0%, F=0,007 соответственно). Распределение полиморфных генотипов не отличается у пациентов с нормальным и мутантным 8-м экзоном гена р53 в опухоли. В 5 из 46 случаев обнаружены мутации гена р53 в обоих экзонах, причем Pro/Pro генотип трижды был ассоциирован с “двойными” мутациями. Вероятный механизм наблюдаемого заключается в преимущественном «выключении» Pro белка р53, который менее «благоприятен» для опухоли, при помощи соматических мутаций.

Выводы. Таким образом, в опухолевой ткани показан отбор опухолевых клеток с генотипом Arg/Arg. Высокая частота Arg аллеля и Arg/Arg генотипа ассоциируется с отсутствием мутаций в 7-м экзоне гена р53. Показана ассоциация Pro/Pro генотипа с высокой частотой мутаций в 7-м экзоне и с «двойными мутациями». Вероятно, в опухолевых клетках происходит преимущественная и селективная инактивация специфических форм белка-онкосупрессора Р53 соматическими мутациями, что, в конце концов, может привести к более тяжелому и агрессивному течению заболевания.