Адренергическая и серотонинергическая активность нового соединения с антимигренозными свойствами

Согласно одной из доминирующих концепций о патогенезе мигрени, выделяется тригеминально-васкулярное и серотонинергическое звено, в качестве основных триггеров приступов этого заболевания [2]. Одним из перспективных направлений разработки новых лекарственных препаратов для профилактики и купирования мигренозных атак представляется воздействие на серотонинергическую мишень – 5-НТ 2А -рецептор [4]. Считается, что активация данного звена и последующий запуск целого каскада рецепторных реакций опосредует развитие гиперальгезии, церебральной вазоконстрикции и, как следствие, возникновение мигренозного приступа. В связи с этим поиск и разработка новых 5-НТ 2А -антагонистов в качестве корректоров мозгового кровообращения является актуальным направлением в современной экспериментальной фармакологии.

В ранее проведенных нами исследованиях при моделировании мигренозного приступа у крыс было изучено влияние соединения 9-диэтиламиноэтил-2-(4-метоксифенил)имидазо [1,2-α]бензимидазола под лабораторным шифром 1b [1] на показатели скорости кровотока в бассейне церебрального микроциркуляторно-го русла [5]. Полученные данные свидетельствуют о том, что изучаемое соединение устраняет вазоконстрикторные эффекты серотонина

[6]. В связи с тем, что спазмирование краниальных сосудов может быть обусловлено активацией различных рецепторных систем [8], в том числе и адреналиновой системой, а именно альфа-адренорецепторами, становится актуальным изучить возможность влияния соединения Ib на адренергическую систему, и сопоставить данный вид активности с серотонин-блокирующим действием.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ

Изучить влияние соединения Ib на альфа-адренергический и серотонинергический компоненты сосудистого тонуса крыс в тестах in vivo и in vitro .

МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование проводили в два этапа. На этапе исследований in vitro [Блаттнер с со-авт., 1993] соединение Ib было исследовано в тестах фенилэфрин-индуцированного сокращения и 5-НТ2А-индуцированного спазма, на препарате изолированной v. portae крыс и препарате изолированной матки крыс соответственно. Для исследования использовали 20 крыс линии Wistar, массой 250–280 г. После препаровки органный препарат фиксировали в ванночке для изолированных органов (Ugo Basile, Италия) в буфере Кребса-Хенселейта (для пре- парата v. portae) или буфере Де Жалона (для препарата изолированной матки крысы), pH – 7,4; t = 27 °C, при постоянной оксигенации 95 % О2 (Кислородный концентратор, Армед, Россия). О влиянии соединения Ib на адренергическую систему судили по способности (в концентрации 1 мкМ) изменять сократительный ответ v. portae, вызванный фенилэфрином, (Sigma, США) в концентрации 10 мкМ. В качестве препарата сравнения использовали антагонист α-адренорецепторов фентоламин (Sigma, США). Влияние соединения Ib (1 мкМ) на серотонинергическую систему оценивали по изменению сократительного ответа матки при введении серотонина (Sigma, США) в концентрации 1 мкМ. В качестве препарата сравнения использовали блокатор 5-НТ2А-рецепторов – ципрогептадин (Sigma, США), в эквимолярной дозе.

На втором этапе исследование адренергических и серотонинергических эффектов проводилось в условиях in vivo по методикам резерпиновой гипотермии и 5-гидрокситриптофанового (5-ГТФ) гиперкинеза [3, 9].

Для изучения влияния на адренергическую систему использовались крысы-самцы линии Wistar, массой 250–280 г (N = 20). Первой группе животных интрагастрально вводилась дистиллированная вода (интактный контроль). Второй группе вводился симпатолитик – резерпин (Sigma, США) в дозе 2,5 мг/кг внутрибрюшинно и дистиллированная вода в объеме 1 мл интрагастрально. Третья группа вместо воды получала водный раствор соединения Ib в том же объеме, из расчета 10,85 мг/кг веса животного (среднеэффективная доза, демонстрирующая антимигренозный эффект) [4, 6]. Перед началом эксперимента фиксировались исходные показатели ректальной температуры. О влиянии на адренергическую систему судили по выраженности изменений эффекта резерпина (температуры тела и блефароптоза) в интактной, контрольной и опытной группах в контрольной точке 4 часа после его введения.

5-НТ 2А – опосредованные эффекты исследовалось в тесте 5-гидрокситриптофанового (5-ГТФ) гиперкинеза. В качестве индуктора использовался 5-ГТФ (Sigma, США) в дозе 300 мг/кг внутрибрюшинно. Об уровне серотонинергической активности судили по выраженности показателей гиперкинеза, проявлявшегося в спонтанных встряхиваниях головой (твитчингах), в группах контроля, получавшего дистиллированную воду и 5-ГТФ интрагастрально, и опытной, получавших соединение Ib интрагастрально, в дозе 10,85 мг/кг и 5-ГТФ. Регистрация эффекта проводилась в течение 1 часа после введения анализатора, с интервалами в минуту.

Статистическая обработка данных проводилась в программе GraphPad Prism v5.0 с использованием однофакторного и двухфакторного дисперсионного анализа с посттестом Ньюмена-Кеулса.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

При исследовании адренергической активности соединения Ib на препарате изолированной портальной вены было установлено, что для него, в концентрации 1 мкМ, характерно незначительное снижение выраженности прессорного эффекта фенилэфрина, на (1,5 ± 0,4) %, в отличие от препарата сравнения – фентоламина, для которого в концентрации 1 мкМ наблюдалось снижение данных показателей на (38,4 ± 1,5) % (p < 0,05) (рис. 1).

Рис. 1. Влияние соединения Ib на фенилэфрин-индуцированное сокращение v. portae крыс (М ± m)

Примечание: * – отличие достоверно относительно показателей контроля, ∆ – отличие достоверно относительно препарата сравнения – фентоламина, критерий Ньюмена-Кеулса (p < 0,05).

В условиях серотонин-индуцированной модели спазма было установлено, что соединение Ib в концентрации 1 мкМ снижает выраженность спастического эффекта серотонина на (51,3 ± 2,5) %, не уступая при этом препарату сравнения ципрогептадину в дозе 1 мкМ [48,4 ± 2,5 %] (pис. 2).

Таким образом, на моделях in vitro статистически значимого влияния соединения Ib в концентрации 1 мкМ на адренергическую систему не было выявлено, при этом изучаемое соединение оказывало выраженное антисеро-тониновое действие.

Рис. 2. Влияние соединения Ib на 5-HT 2А -опосредованное изменение сократительной способности матки крыс (М ± m)

Примечание: * – отличие достоверно относительно показателей контроля, критерий Нью-мена-Кеулса (p < 0,05).

При исследовании адренергических свойств на модели in vivo после введения резерпина в группе контроля наблюдалось развитие гипотермии и блефароптоза. Предварительное введение опытной группе соединения Ib не вызвало статистически значимых различий в данных показателях между группой резерпинового контроля и опытной группой (pис. 3). При этом в группе интактного контроля не наблюдалось развития данных эффектов.

Рис. 3. Влияние соединения Ib на показатели теста «Резерпиновая гипотермия» (М ± m)

Примечание: * – изменение достоверно относительно показателей интактного контроля, критерий Ньюмена-Кеулса (p < 0,05).

При исследовании серотонин-блоки-рующей активности в тесте 5-ГТФ гиперкинеза были получены статистически значимые различия в показателях опытной группы по отношению к показателям группы контроля, что подтверждает выраженное влияние соединения Ib на серотониновую систему (pис. 4), которое было также сопряжено с показателем времени. Так, в группе контроля наблюдалось динамическое, статистически значимое нарастание показателей твитчинга, с последующим снижением в период с 30 по 60 мин. В опытной группе наблюдалось достоверное, стойкое проявление серотонин-блокирующей активности, наиболее выраженное в диапазоне с 20 по 30 мин.

Рис. 4. Влияние соединения Ib на выраженность 5-ГТФ гиперкинеза (М ± m)

Примечание: * – изменение достоверно относительно показателей контроля, двухфакторный дисперсионный анализ (время, вещество) (p < 0,05).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В ходе данного исследования было выявлено, что соединение Ib не обладает адренергической активностью, что подтверждается тестами как in vivo , так и in vitro , в то время, как в отношении серотонинергической системы для данного соединения подтверждена высокая ингибирующая активность. Полученные данные позволяют предположить отсутствие у данного соединения системных адреналин-опосредованных сосудистых свойств, которые являются значимыми побочными эффектами для известных 5-НТ 2А -антагонистов, таких как ципрогептадин и кетансерин.