Агрегационная активность тромбоцитов и носительство аллельных вариантов генов гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов у пациентов с врожденными пороками сердца с функционально единственным желудочком

Автор: Лугачва Юлия Геннадьевна, Кулагина Ирина Владимировна, Ковалв Игорь Александрович, Кривощеков Евгений Владимирович, Янулевич Ольга Сергеевна, Суслова Татьяна Евгеньевна, Клейн Инна Робертовна

Журнал: Сибирский журнал клинической и экспериментальной медицины @cardiotomsk

Рубрика: Клинические исследования

Статья в выпуске: 4 т.30, 2015 года.

Бесплатный доступ

Цель исследования: проанализировать результаты генетического исследования гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов и их агрегационной активности у пациентов с врожденным пороком сердца (ВПС) с функционально единственным желудочком (ФЕЖС). В исследование включено 50 детей, которым была выполнена хирургическая коррекция ВПС. У всех детей оценивали величину агрегационной активности тромбоцитов на фоне приема кардиомагнила и сопоставляли с результатами генетического тестирования генов рецепторов тромбоцитов для коллагена ITGA2:807С>Т и для фибриногена ITGB3:1565T>C. В группе обследованных пациентов средний уровень агрегации тромбоцитов на фоне индуктора коллаген у носителей СС генотипа гена ITGA2:807 составлял 52,5%, СТ генотипа - 49,0%, а у детей, являющихся носителями ТТ генотипа, - 65,1%. Средний уровень агрегации тромбоцитов на фоне индуктора эпинефрин у носителей ТТ и ТС генотипа составлял 56,3 и 65,8% и достоверно не отличался от показателя агрегации у детей с генотипом СС - 75,6% (р=0,506). В группе обследованных пациентов с ВПС не выявлена взаимосвязь носительства аллельных вариантов генов гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов для коллагена ITGA2:807С>Т и для фибриногена ITGB3:1565T>C с уровнем агрегационной активности тромбоцитов. Отсутствие изменения агрегационной активности тромбоцитов на коллаген наблюдалось у 30%, на эпинефрин - у 38% детей с ВПС на фоне приема кардиомагнила.

Еще

Агрегационная активность тромбоцитов, полиморфизм генов, гликопротеиновые рецепторы тромбоцитов, врожденный порок сердца, дети

Короткий адрес: https://sciup.org/14920062

IDR: 14920062

Текст научной статьи Агрегационная активность тромбоцитов и носительство аллельных вариантов генов гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов у пациентов с врожденными пороками сердца с функционально единственным желудочком

Дети с оперированными и неоперированными ВПС, в том числе с ФЕЖС, с кардиомиопатиями, тяжелыми аритмическими синдромами, а также дети с имплантированными антиаритмическими устройствами, сосудистыми протезами и искусственными клапанами имеют повышенный риск тромботических и/или тромбоэмболических осложнений на различных этапах лечения. Венозные тромбозы и тромбоэмболии в 25% случаев становятся причиной летального исхода у пациентов с ФЕЖС [6, 7]. Эти осложнения ассоциируются с высокой заболеваемостью и смертностью, сводя на нет успехи хирургического лечения и терапии.

Факторами, влияющими на повышение тромбообра-зования в этой группе пациентов, могут служить повторные хирургические и катетерные процедуры, изменения в профиле кровотока из-за пассивного кровообращения и полицитемия. Несмотря на актуальность проблемы, до настоящего времени проведены лишь единичные исследования наследственных нарушений свертывающей системы у детей с врожденными и приобретенными заболеваниями сердца.

Раннее выявление возможных факторов риска тромботических осложнений, а также планирование анти-тромботической терапии и профилактики позволит исключить развитие осложнений, значительно улучшить общий прогноз у детей с ВПС и другими потенциально жизнеугрожающими болезнями сердца и избежать рисков от необоснованного назначения антикоагулянтов.

Гликопротеиновые рецепторы тромбоцитов имеют первостепенное значение для адгезии и агрегации и, следовательно, для осуществления гемостатической функции тромбоцитов [3]. Таким образом, полиморфизм генов, регулирующих экспрессию или активность этих рецепторов, может оказывать влияние на течение и исходы любого заболевания, в патогенез которого вовлечена система гемостаза. Генетический полиморфизм гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов широко распространен среди жителей европейских стран. По данным M.J. Quinn, E.J. Topol [20], вклад генетических факторов в вариабельность реактивности тромбоцитов составляет около 30%. В работе C. O’Donnell et al. [19] было показано, что наследственные факторы вносят существенный вклад (20–30%) в состояние агрегации тромбоцитов, в то время как на долю различных клинических параметров приходится от 4 до 7%.

Цель настоящего исследования: оценить результаты генетического исследования рецепторов тромбоцитов и их агрегационную активность у пациентов с ВПС с ФЕЖС.

Материал и методы

В исследование включено 50 детей с ФЕЖС, которым была выполнена хирургическая коррекция ВПС, средний возраст – 3,85 (3,0; 5,0) лет. У всех пациентов было проведено молекулярно-генетическое исследование с диагностикой аллельных вариантов генов гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов: ITGA2:807 С>Т (рецептор тромбоцитов для коллагена GP Ia-IIа, n=30) и ITGB3:1565T>C

(рецептор тромбоцитов для фибриногена GP IIb-IIIa, n=50). Генотип определяли методом полимеразной цепной реакции с использованием коммерческих наборов реагентов (ДНК-Технология, Россия). Исследования проводились на детектирующем амплификаторе “ДТ-96”, (ООО “НПО ДНК – Технология”, Россия). У всех детей оценивалась функциональная активность тромбоцитов на фоне приема кардиомагнила (37,5–112 мг/cутки) на 5–7-е сутки после оперативного вмешательства. Функциональную активность тромбоцитов оценивали методом турбодиметрической агрегатометрии (агрегометр AggRAM, Helena Laboratories, Великобритания). В качестве индукторов агрегации тромбоцитов использовали эпинефрин (2 ммоль/мл) и коллаген (10 мкг/мл). Количество тромбоцитов определяли кондуктометрическим методом (гематологический анализатор ABX PENTRA 80 (Horiba Medical, Франция).

Статистическая обработка данных проводилась с помощью пакета программ SPSS 20.0. При описании количественных данных использовались следующие расчетные показатели: Ме (IQR), где Me – медиана, IQR (Interquartile range) – интерквартильный размах между значениями 25–75 перцентилей (при распределении данных, отличающихся от нормального). Для показателей, характеризующих качественные признаки, указывали абсолютное число и относительную величину в процентах. Достоверность различия показателей между группами оценивали с помощью критерия Краскела–Уоллиса для множественных сравнений, в случае попарного сравнения – с помощью критерия Манна–Уитни. С целью преодоления проблемы множественных сравнений применялась поправка Бонферрони. Различия считали статистически значимыми при достижении уровня значимости р<0,05.

Результаты и обсуждение

При обследовании пациентов с ВПС были получены следующие результаты генетического тестирования. У 13 детей отмечался нормальный генотип (СС) гена рецептора тромбоцитов для коллагена GP Ia-IIа, у 14 выявлено гетерозиготное носительство (СТ), у 3 – гомозиготное (ТТ). Рецептор GPIa-Ia относится к группе интегринов и играет фундаментальную роль в адгезии тромбоцитов к коллагену [3, 8, 18]. Полиморфизм C807T ассоциируется с повышением плотности рецептора на тромбоцитах и других клетках и усилением адгезии тромбоцитов [8, 16]. По данным литературы, у взрослых носительство аллеля Т807 сопровождается увеличением риска инфаркта миокарда (ИМ) [11, 22]. Вместе с тем в ряде исследований связи между развитием тромбозов артериальных сосудов и носительством этой мутации обнаружено не было [10, 11]. Данных о носительстве данного полиморфизма у детей немногочисленны [1].

Для гена рецептора тромбоцитов для фибриногена GP IIb-IIIa у 39 пациентов с ВПС определялся нормальный генотип (ТТ), у 9 – гетерозиготный (ТС), у 2 – гомозиготный (СС). Рецептор GPIIb/IIIa играет ключевую роль в процессах адгезии и агрегации тромбоцитов [2, 3, 10, 18]. Мутации генов, кодирующих α- и β-цепи фибриногено- вого рецептора тромбоцитов, могут приводить к повышению чувствительности рецептора к специфическим лигандам, что сопровождается повышенной агрегацией тромбоцитов и, следовательно, увеличением риска тром-бообразования [9, 18]. В отечественной литературе описана взаимосвязь полиморфизма у детей с ишемическим инсультом [4, 5].

С целью профилактики тромботических осложнений детям с ВПС после оперативного вмешательства проводили дезагрегантную терапию. У всех детей оценивали величину агрегационной активности тромбоцитов на фоне приема кардиомагнила и сопоставляли с результатами генетического тестирования генов рецепторов тромбоцитов для коллагена и фибриногена. Количество тромбоцитов в группе обследованных детей составляло 269 (217; 290)х109/л.

При анализе результатов агрегатометрии у детей с ВПС на фоне кардиомагнила выявляется вариабельность агрегационного ответа тромбоцитов на коллаген и эпинефрин. В группе обследованных пациентов средний уровень агрегации тромбоцитов на фоне индуктора коллаген у носителей СС генотипа гена ITGA2:807 составлял 52,5%, СТ генотипа – 49,0%, а у детей, являющихся носителями ТТ генотипа, – 65,1% (табл. 1). По данным N. Beckerath [8], уровень экспрессии рецепторов GPIa/IIa

Таблица 1

Агрегационная активность тромбоцитов в группе обследованных пациентов в зависимости от генотипа тромбоцитарного рецептора для коллагена GP Ia-IIа

Полиморфизм

Генотип

Агрегационная активность тромбоцитов (%)

Критерий Краскела–Уоллиса

Критерий Манна–Уитни

CC(n=13)

52,5 (22,0; 79,8)

р12=0,77

ITGА2

CT(n=14)

49,0 (23,7; 65,6)

χ 2=0,855

р13=0,54

C 807 T (n=30)

TT(n=3)

65,1 (45,5; 65,1)

р=0,652

р23=0,31

Примечание: Ме – медиана; IQR – интерквартильная широта [25-й процентиль – 75-й процентиль]; р – уровень значимости различий (критерий Манна–Уитни); критерий множественных сравнений Краскела–Уоллиса, с поправка Бонфер-рони.; р – уровень значимости различий между 1 – “дикий” тип, 2 – гетерозигота, 3 – гомозигота; здесь и далее.

Таблица 2

Агрегационная активность тромбоцитов в группе обследованных пациентов в зависимости от генотипа тромбоцитарного рецептора для фибриногена GP IIb-IIIa

Полиморфизм

Генотип

Агрегационная активность тромбоцитов (%)

Критерий Краскела–Уоллиса

Критерий Манна–Уитни

TT(n=39)

56,3 (41,8; 77,9)

р12=0,66

ITGB3

TC(n=9)

65,8 (46,2; 77,7)

χ 2=1,364

р13=0,28

T 1565 C (n=50)

CC(n=2)

75,6 (71,3; 80,0)

р=0,506

р23=0,34

Таблица 3

Взаимосвязь носительства аллельного варианта гена рецептора тромбоцитов: ITGA2:807 С>Т и агрегационной активности тромбоцитов на коллаген

Группы детей

Генотип

р

1-я группа

2-я группа

ITGA2:807 CC (n=13)                ITGA2:807 CT/ТТ (n=17)

Агрегация (%)

24,3 (18,9; 52,85) (n=9)                42,2 (20,37; 52,5) (n=12)

87,8 (76,75; 90,22) (n=4)              76,7 (67,05; 81,95)* (n=5)

> 0,05

> 0,05

зависит от генотипа и коррелирует с интенсивностью коллагениндуцированной адгезии и агрегации тромбоцитов.

В нашем исследовании достоверных различий уровня агрегации тромбоцитов между генотипами рецептора тромбоцитов для коллагена ITGA2 C807T не выявлено. Средний уровень агрегации тромбоцитов на фоне индуктора эпинефрин у носителей ТТ и ТС генотипа составлял 56,3 и 65,8% и достоверно не отличался от показателя агрегации у детей с генотипом СС – 75,6% (р=0,506) (табл. 2).

Наличие полиморфизма обусловливает усиление сигнальных функций гликопротеинового комплекса и перестройку цитоскелета тромбоцитов после активации. Гомозиготное носительство Leu33Pro GPIIb-IIIa считают фактором риска развития ИМ и ишемического инсульта, особенно у лиц моложе 50 лет. Носительство полиморфизма как в гетеро-, так и в гомозиготном состоянии увеличивает опасность рестеноза после коронарного стентирования [15], а также может быть причиной развития резистентности к терапии аспирином [23]. В то же время ряд исследователей [13, 21] отрицают наличие связи между носительством этой мутации и развитием тромбоза артериальных сосудов либо считают риск развития тромбоза, обусловленный этим фактором, минимальным [12].

По мнению некоторых авторов, носительство этой мутации может способствовать увеличению риска возникновения венозных тромбозов [17], другие, напротив, отрицают связь наличия мутации с повышенной вероятностью развития венозных тромбозов [14, 18, 21].

Определенное значение для эффективного влияния кардио-магнила на агрегационную активность тромбоцитов имеет индивидуальная чувствительность пациента к препарату. Детей с ВПС разделили на две группы в зависимости от выраженности агрегационной активности и носительства аллельных вариантов генов тромбоцитарных рецепторов. В 1-ю группу вошли дети с величиной максимальной агрегации тромбоцитов на коллаген от 18,9 до

Таблица 4

Взаимосвязь носительства аллельного варианта гена рецептора тромбоцитов: ITGB3: 1565T>C и агрегационной активности тромбоцитов на эпинефрин

Группы детей

Генотип

р

1-я группа

2-я группа

ITGB3:1565 ТТ (n=39)        ITGB3:1565ТС/СС (n=11)

Агрегация (%)

48,4 (36,5; 56,2) (n=25)       55,6 (40,9; 67,2) (n=6)

79,8 (77,4; 89,5) (n=14)        79,2 (75,3; 84,7) (n=5)

>0,05

>0,05

гационной активности тромбоцитов на фоне приема кардиомагнила.

Заключение

  • 1.    Анализ результатов молекулярно-генетического исследования пациентов с ВПС не выявил взаимосвязи генотипа гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов для коллагена ITGA2:807С>Т и для фибриногена ITGB3:1565T>C с величиной агрегационной активности.

  • 2.    Высокая степень агрегационной активности тромбоцитов на коллаген сохранялась у 30% на фоне приема кардиомагнила.

  • 3.    Величина агрегационной активности тромбоцитов на эпинефрин не отличалась от контрольных значений у 38% детей с ВПС.

52,85%, во 2-ю – от 67,05 до 90,22%. В этих группах проанализировали взаимосвязь средних значений агрегационной активности тромбоцитов на фоне приема карди-омагнила в зависимости от носительства гликопротеинового рецептора тромбоцитов для коллагена ITGA2:807С>Т (табл. 3). У детей 1-й группы с генотипом ITGА2 СС степень агрегации тромбоцитов на коллаген составляла 24,3%, с генотипом ITGА2 СТ/ТТ – 42,2% (р>0,05). Различия в агрегационном ответе между носительством гликопротеинового рецептора тромбоцитов для коллагена ITGA2:807С>Т в группе обследованных детей статистически не значимы.

Во 2-й группе у детей с генотипами ITGА2 СС и ITGА2 СТ/ТТ агрегационная активность тромбоцитов была сопоставима между собой и составляла 87,8 и 76,7% (р>0,05) соответственно. Среди обследованных детей, независимо от носительства генотипа ITGА2 у 9 из 30 (30%) пациентов не происходило изменения агрегационной активности тромбоцитов на фоне приема кардиомагнила. Контрольные значения агрегационной активности тромбоцитов на коллаген составляли 65–85%.

При сопоставлении вариантов агрегационной активности тромбоцитов (индуктор эпинефрин) на фоне приема кардиомагнила в зависимости от носительства гликопротеинового рецептора тромбоцитов для фибриногена ITGB3:1565T>C получили результаты, представленные в таблице 4. В 1-ю группу вошли дети с величиной максимальной агрегации тромбоцитов на эпинефрин от 36,5 до 67,2%, во 2-ю – от 75,3 до 89,5%.

В 1-й группе детей агрегационная активность тромбоцитов на эпинефрин при носительстве ITGB3:1565 ТТ генотипа составляла 48,4%, а при генотипе ТС/СС – 55,6%. Различия в агрегационном ответе между носительством гликопротеинового рецептора тромбоцитов для фибриногена ITGB3:1565T>C в группе обследованных детей с ВПС статистически не значимы.

Во 2-й группе у детей с генотипами ITGB3:1565 ТТ и ТС/СС агрегационная активность тромбоцитов была сопоставима между собой и составляла 79,8 и 79,2% соответственно (р>0,05). Среди обследованных детей, независимо от носительства генотипа ITGB3 у 19 из 50 (38%) пациентов не происходило изменения агрегационной активности тромбоцитов на фоне приема кардиомагни-ла. Контрольные значения агрегационной активности тромбоцитов на коллаген составляли 70–90%.

Носительство аллелей рецептора для фибриногена ITGB3:1565 ТС/СС, по мнению ряда авторов, может обусловливать отсутствие или недостаточное снижение агре-

Сведений о роли наследственных нарушений гликопротеиновых рецепторов у детей с врожденными заболеваниями сердца недостаточно. Отсутствие рекомендаций по стратегии назначения антикоагулянтов и управления системой свертывания крови у детей свидетельствует о необходимости и перспективности продолжения исследований в этой области, включая изучение сочетания полиморфизма тромбоцитарных рецепторов и установленных факторов риска тромбообразования.

Список литературы Агрегационная активность тромбоцитов и носительство аллельных вариантов генов гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов у пациентов с врожденными пороками сердца с функционально единственным желудочком

  • Львова О.А. Генетически детерминированные нарушения гемокоагуляции как причина ишемических инсультов у детей//Журнал неврологии и психиатрии. Инсульт. -2011. -№ 12. -С. 3-9.
  • Макацария А.Д., Бицадзе В.О. Тромбофилии и противотромботическая терапия в акушерской практике. -М.: Триада-Х, 2003. -903 с.
  • Окороков А.Н. Диагностика болезней внутренних органов. -М.: Медицинская литература, 2002. -Т. 5. -489 с.
  • Скоромец А.А., Тадтаева З.Г., Па Т.Е., Скоромец А.П. Генетические признаки тромбофилии при инсульте у детей и подростков//Вестник С-Петерб. ун-та. -2011. -№ 4. -С. 62-68.
  • Чугунова О.Л., М.В. Шумихина, Н.Л. Козловская, А.И. Гуревич Функциональное состояние почек и почечной гемодинамики у детей с наследственной тромбофилией//Нефрология и диализ. -2012. -Т. 14, № 4. -С. 224-235.
  • Airan B., Sharma R., Chowdhury U.K. et al. Univentricular repair: is routine fenestration justified?//Ann. Thorac. Surg. -2000. -Vol. 69. -P. 1900-1906.
  • Azakie A., McCrindle B.W., Arsdell G.V. et al. Extracardiac versus lateral tunnel cavopulmonary connections at a single institution: impact on outcomes//J. Thorac. Cardiovasc. Surg. -2000. -Vol. 122. -P. 1219-1228.
  • Beckerath N. Glycoprotein Ia gene C807T polymorphism and risk for major adverse cardiac events within the first 30 days after coronary artery stenting//Blood. -2000. -Vol. 95, No. 11. -P. 3297-3301.
  • Bennett J.S., Catella-Lawson F., Rut A.R. et al. Effect of the PlA2 alloantigen on the function of b3-integrins in platelets. Blood. -2001. -Vol. 97, No. 10. -P. 3093-3099.
  • Bussel J.B. Platelets: New understanding of platelet glycoproteins and their role in disease//Hematology (Am. Soc. Hematol. Educ. Program). -2000. -P. 222-240.
  • Corral J. Role of the 807 C/T polymorphism of the a 2 gene in platelet GP IA collagen receptor expression and function effect in thromboembolic diseases//Thromb. Haemost. -1999. -Vol. 81, No. 6. -P. 951-956.
  • Feinbloom D. Assessment of hemostatic risk factors in predicting arterial thrombotic events//Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology. -2005. -Vol. 25. -P. 2043-2053.
  • Herrmann S. The Leu33/Pro polymorphism (PlA1/PlA2) of the glycoprotein IIIa (GPIIIa) receptor is not related to myocardial infarction in the ECTIM Study. Etude Cas-Temoins de l’Infarctus du Myocarde//Thromb. Haemost. -1997. -Vol. 77. -P. 1179-1181.
  • Hooper W.C. The relationship between polymorphisms in the endothelial cell nitric oxide synthase gene and the platelet GPIIIa gene with myocardial infarction and venous thromboembolism in African Americans//Chest. -1999. -Vol. 116. -P. 880-886.
  • Kastrati A. PlA Polymorphism of platelet glycoprotein IIIa and risk of restenosis after coronary stent placement//Circulation. -1999. -Vol. 99. -P. 1005-1010.
  • Kunicki T. Variability of integrin alpha 2beta 1 activity on human platelets//Blood. -1993. -Vol. 82. -P. 2693-2703.
  • Lane D.A. Role of hemostatic gene polymorphisms in venous and arterial thrombotic disease//Blood. -2000. -Vol. 95, No. 5. -P. 1517-1532.
  • Newman P.J. The human platelet alloantigens, PlA1 and PlA2, are associated with a leucine33/proline33 amino acid polymorphism in membrane glycoprotein IIIa, and are distinguishable by DNA typing//J. Clin. Invest. -1989. -Vol. 83. -P. 1778-1781.
  • O’Donnell C.J., Larson M.G., Feng D. et al. Genetic and environmental contributions to platelet aggregation: the Framingham Heart Study//Circulation. -2001. -Vol. 103, No. 35. -P. 3051-3056.
  • Quinn M.J., Topol E.J. Common variations in platelet glycoproteins: harmacogenomic implications//Pharmacogenomics. -2001. -Vol. 2, No. 4. -P. 341-352.
  • Ridker P. PIA1/A2 polymorphism of platelet glycoprotein IIIa and risks of myocardial infarction, stroke, and venous//Lancet. -1997. -Vol. 349 -P. 385-388.
  • Santoso S. Association of the platelet glycoprotein ia c807t gene polymorphism with nonfatal myocardial infarction in younger patients//Blood. -1999. -Vol. 93, No. 8 -P. 2449-2453.
  • Szczeklik F. Reasons for resistance to aspirin in cardiovascular disease//Circulation. -2002. -Vol. 106. -P. 181-182.
Еще
Статья научная