Вирус африканской чумы свиней: культивирование, свойства, индикация. Рубрика в журнале - Сельскохозяйственная биология
Статья научная
Гетерогенность вируса африканской чумы свиней (АЧС) проявляется в различиях по физико-химическим, генетическим, вирулентным, гемадсорбирующим, антигенным свойствам. Представлены результаты исследований экспериментальных смесей и природных изолятов вируса АЧС по гемадсорбирующей активности и антигенной специфичности, которые определяли по результатам реакции задержки гемадсорбции (РЗГАд) и иммунологической пробы. Для исследований было приготовлено три смеси вирулентных изолятов вируса АЧС: 1 - II и IV сероиммунотипов (Кикасса 74 + Бразилия 80); 2 - III и IV сероиммунотипов (Мозамбик 78 + Сан Томе и Принсипи); 3 - I и IV сероиммунотипов (Диаманг + Днопа-Луанда). Изучение смешанной инфекции in vivo проводили в искусственно созданном микроэпизоотическом очаге. Установлено, что при инфицировании животных смесями изолятов вируса АЧС двух сероиммунотипов наблюдается стойкое доминирование по гемадсорбции одного изолята над другим, вследствие чего результаты типизации проб крови свиней контактно инфицированных смесями изолятов в РЗГАд не соответствуют данным иммунологической пробы. Подобный факт, по-видимому, объясняется тем, что в исследуемых биологических материалах имеются варианты вируса АЧС сероиммунотипов, присутствующих в исходных смесях, которые в процессе смешанного инфицирования животных утратили гемадсорбирующие свойства. Показана принципиальная возможность восстановления in vitro гемадсорбирующих свойств присутствующих в смесях негемадсорбирующих вариантов в гемадсорбирующую форму методом пассирования в культуре клеток костного мозга свиньи (КМС) в присутствии специфических задерживающих гемадсорбцию сывороток к изолятам, которые доминировали в смесях по признаку гемадсорбции. В то же время второй подход - использование перемежающихся пассажей в нечувствительной клеточной системе (культура почки сибирского горного козерога) и в клетках КМС результатов не дал. Установлено, что в природе вирус АЧС может встречаться в виде гетерогенной в сероиммунотиповом отношении популяции. Проведенные исследования также продемонстрировали принципиальную возможность создания защиты к изоляту Т-67 при иммунизации животных аттенуированными вариантами, полученными из входящих в его состав вирулентных вариантов четырех сероиммунотипов.
Бесплатно
Статья научная
Многие годы усилия исследователей были направлены на получение и испытание различных аттенуированных вариантов вируса африканской чумы свиней (АЧС) с целью разработки специфических средств профилактики. Аналогичные исследования проводились и во Всероссийском НИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии, в результате чего В.А. Бурлаковым и др. (1979) пассированием в культуре клеток костного мозга свиней (КМС) вирулентного штамма Франция-32, относящегося к 4-му серотипу, был получен аттенуированный вариант вируса АЧС - ФК-135. Установлено, что 25-кратный концентрат этого штамма, выращенного в монослойной культуре клеток КМС, вызывал защиту 85-100 % подсвинков от заражения гомологичным вирулентным вирусом АЧС. Учитывая, что метод глубинного (суспензионного) культивирования технологичнее, производительнее и экономичнее монослойного, представляло интерес изучить антигенную и иммуногенную активность концентрированного эмульгированного вируссодержащего препарата, который был получен на основе аттенуированного штамма ФК-135 вируса АЧС, накопленного в суспензии клеток КМС в биореакторах. Выполненные исследования показали, что при таком культивировании максимальное накопление вируса (7,50-8,00 lg ГАЕ 50/см 3) наблюдали на 4-е сут, а КС-антитела (1:16-1:32) - на 5-6-е сут. Титр вируса, выращенного в монослое клеток КМС в матрасах, оказался на 0,25-0,50 lg ГАЕ 50/см 3 ниже, чем в первом варианте, при слабом отличии по уровню КС-антител в эти же сроки (1:16). Концентрированный эмульгированный препарат на основе штамма ФК-135, выращенного в суспензии клеток КМС в биореакторах, через 7 сут после введения обеспечивал защиту подсвинков против заражения гомологичным вирулентным вирусом в течение 4 мес (срок наблюдения). При этом у привитых животных аттенуированный вирус выделяли из проб крови до 10-14-х сут. Отмечается, что суспензионный метод выращивания аттенуированного штамма ФК-135 в культуре клеток КМС в автоматизированных биореакторах позволяет в контролируемых условиях получать однородный вирусный материал с высокой биологической активностью.
Бесплатно
Статья научная
Известно, что распространение вируса африканской чумы свиней (АЧС) происходит при алиментарной передаче возбудителя (например, вследствие использования контаминированных вирусом пищевых и боенских отходов, не подвергнутых термической обработке, комбикормов, не прошедший ветеринарно-санитарную экспертизу и поступающий из районов, неблагополучных по АЧС, в случаях, когда перевозка комбикорма осуществлялась в транспортных средствах, не подвергшихся ветеринарно-санитарной обработке). При анализе комбикормов с использованием метода полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) одно из требований заключается в тщательной очистке образцов от крупных частиц и различных химических примесей, которые могут ингибировать реакцию, изменять свойства сорбента и мембранных фильтров на стадии выделения нуклеиновых кислот. Наша цель заключалась в разработке методики пробоподготовки с использованием мембранных фильтров для изучения возможности индикации ДНК вируса африканской чумы свиней в искусственно контаминированном комбикорме с помощью ПЦР. Для контаминации использовали кровь от свиньи, экспериментально зараженной вирусом АЧС (штамм Ставрополь 2009) с инфекционным титром 5,0 lg ГАЕ 50/см 3. Рабочие разведения вируссодержащего материала - 2,0; 3,0; 4,0 и 5,0 lg ГАЕ 50/см 3. Подготовка проб включала фильтрование через марлю, замораживание-оттаивание, низкоскоростное центрифугирование и разделение на фильтрах с диаметром пор 450 мкм. Последующее выделение ДНК вируса АЧС и ПЦР-РВ выполняли согласно инструкции по применению соответствующей разработанной тест-системы. Установлено, что в подготовленных предложенным способом пробах искусственно контаминированного комбикорма ДНК вируса АЧС выявляется в материале с титром вируса не менее 3,0 lg ГАЕ 50/см 3. Таким образом, включение в диагностическую схему рекомендуемой стадии подготовки проб, описанной выше, при анализе комбикорма позволяет получить очищенный от примесей и сконцентрированный материал, который может быть использован для дальнейших исследований на наличие ДНК вируса АЧС с помощью ПЦР-РВ.
Бесплатно
Эффективность различных методов выращивания вируса африканской чумы свиней в гемопоэтических клетках
Статья научная
По вопросам технологии получения вируса африканской чумы свиней (АЧС), в частности об используемых методах культивирования, в доступной литературе имеется весьма ограниченное число публикаций. Кроме того, выбор эффективных клеточных систем также лимитирован. Статья посвящена разработке и сравнительной оценке эффективности приемов выращивания вируса африканской чумы свиней (АЧС) в культурах клеток костного мозга (КМС) и лейкоцитов (ЛС) свиней. Показана возможность использования клеточной суспензии, изготовленной из костного мозга свиней после 24 ч хранения при 4-6 °С, для выращивания вируса АЧС. Вирус, полученный в такой клеточной суспензии, не снижал инфекционной активности и накапливался в титрах 7,25-7,50 lg ТЦД 50/см 3. Изучены условия выращивания вируса АЧС в гемопоэтических клетках с применением стационарных аппаратов типа КАСМ (кассетный аппарат для монослойного культивирования), роллерного способа культивирования в круговом монослое и в суспензии клеток, а также биологических реакторов (ферментеров) для суспензионного культивирования. Во всех вариантах вирус АЧС стабильно накапливался в клетках КМС и ЛС в высоких титрах (7,25-8,00 lg ГАЕ 50/см 3). Однако наиболее эффективным, технологичным и производительным оказалось выращивание вируса АЧС в суспензии гемопоэтических клеток в автоматизированных реакторах. В этом случае титр вируса достигал 7,50-8,00 lg ГАЕ 50/см 3. Анализируя результаты исследований, можно сделать вывод, что перечисленные методы в сравнении с накоплением вируса АЧС в стационарной культуре клеток в матрасах более эффективны и могут применяться при крупномасштабном культивировании этого биоагента с целью получения препаратов для вакцинации и диагностики при АЧС.
Бесплатно
