Вирус африканской чумы свиней: персистенция и диагностика. Рубрика в журнале - Сельскохозяйственная биология
Статья научная
Известно, что вирус африканской чумы свиней (АЧС) может распространяться алиментарно (например, вследствие скармливания животным контаминированных вирусом пищевых и боенских отходов, не подвергнутых термической обработке, комбикормов, не прошедших ветеринарно-санитарную экспертизу и поступивших из неблагополучных районов, и т.п.). Свинина служит сырьем для приготовления солонины, мясных консервов, сала и других пищевых продуктов. Сохраняемость вируса в них окончательно не изучена. Нами впервые выполнены исследования инфекционной активности изолята вируса АЧС, циркулирующего на территории Российской Федерации, в контаминированной продукции свиноводства, кормах, а также в пробах, предназначенных для ветеринарно-санитарного надзора. С этой целью мы экспериментально заражали 3-4-месячных подсвинков с живой массой 20-30 кг, вводя внутримышечно вирусосодержащую кровь. Животных инокулировали изолятом Волгоград-Калач 2012 с исходным инфекционным титром 7,5 lg ГАЕ50/см3 (получен из Государственной коллекции ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии). Через 3 сут после заражения проводили убой, отбирали пробы органов и тканей для выявления вируса, а из мяса изготавливали солонину, мясные консервы и шпик. Кровь, содержащую вирус АЧС, использовали также для искусственной контаминации образцов кормов и питьевой воды. Для изучения влияния температуры хранения образцов на инфекционную активность вируса и на возможность обнаружения фрагментов его генома приготовленные образцы распределили по аликвотам для дальнейшего хранения при различных температурных режимах: 20-25 °С (комнатная температура); 4-6 °С (условия бытового холодильника); -16…-20 °С (температура морозильной камеры). Температуры, выбранные для хранения образцов, соответствовали естественным погодным условиям в разные времена года (20-25 °С летом, -16…-20 °С зимой); температура 4-6 °С, как правило, поддерживается в тамбуре свинарника или кормокухне в зимние месяцы. Через каждые 5 сут отбирали пробы для определения титра вируса АЧС в образцах и выявления его генома. Выделение вируса проводили в первичной культуре клеток костного мозга свиньи в течение 5 сут в двух последовательных пассажах. Результаты учитывали по гемадсорбирующим свойствам вируса (РГАд) и в ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ). Установлено, что вирус АЧС обнаруживается в солонине и шпике, хранившихся при 20-25 °С в течение 16 сут. При температуре хранения 4-6 °С вирус в солонине выявляли в течение срока наблюдения (60 сут). В образцах, хранившихся при отрицательных температурах, вирус АЧС сохранял инфекционную активность на протяжении всего периода исследований (60 сут) и были найдены фрагменты его ДНК. Таким образом, в пробах органов и пищевых продуктах, полученных от свиней убитых в ранние сроки после заражения, инфекционный вирус АЧС сохраняется (в зависимости от условий хранения) длительное время и может представлять серьезную опасность как фактор распространения возбудителя. Полученные данные также позволяют прогнозировать температурные условия, способствующие поддержанию циркуляции вируса в очагах АЧС.
Бесплатно
Лабораторная диагностика хронической и бессимптомной форм африканской чумы свиней
Статья научная
Африканская чума свиней (АЧС, возбудитель - вирус африканской чумы свиней, African swine fever virus, ASFV, семейство Asfarviridae, род Asfivirus ) может протекать сверхостро, остро, подостро, хронически и бессимптомно. В начале эпизоотий болезнь, как правило, проявляется в острой форме, но со временем обычно переходит в хроническую или бессимптомную. Через 7-10 сут после заражения выжившие свиньи вырабатывают вирусоспецифические антитела, которые сохраняются в течение длительного времени. Есть основания предполагать, что в результате многократного пассирования вируса АЧС в популяциях диких кабанов европейских стран в обозримом будущем могут появиться изоляты, вызывающие не острую форму болезни, как в настоящее время, а хроническую или бессимптомную. Нами предпринято сравнительное изучение особенностей лабораторной диагностики хронической и бессимптомной форм АЧС с целью выявления наиболее эффективных методов обнаружения носителей вируса при хроническом или бессимптомном течении инфекции для обоснования тактики диагностических и мониторинговых исследований. Для этого в лабораторных условиях воспроизводили указанные формы болезни, предварительно подобрав соответствующие штаммы или варианты вируса АЧС. Хроническую форму болезни наблюдали у свиньи, которой инокулировали аттенуированный вариант вируса АЧС Ставрополь 01/08 А4С2/9к (после 33-го пассажа) в дозе 106 ГАЕ50. На 5-7-е сут после инокуляции регистрировали характерные для хронической формы инфекции угнетенное состояние и повышение температуры тела животного до 40,5 °С. В сыворотке крови свиньи противовирусные антитела регистрировали с 7-х сут. После ее убоя на 21-е сут в реакции гемадсорбции вирус АЧС в низких титрах был выявлен в пробах тканей селезенки и подчелюстных лимфоузлов, но не обнаруживался в печени и легких. Наличие вирусной ДНК по результатам полимеразной цепной реакции (ПЦР) установили только в пробе ткани подчелюстных лимфоузлов. Во всех исследованных органах методом иммуноблоттинга антитела определялись в титрах 1:20-1:160. В бессимптомной форме АЧС протекала у кабана-сеголетка, которому внутримышечно ввели аттенуированный штамм вируса АЧС МК-200 в дозе 107 ГАЕ50. В сыворотке крови дикого кабана противовирусные антитела регистрировали с 8-х сут. После его убоя на 25-е сут характерных для АЧС патологоанатомических признаков не наблюдали, в пробах исследованных органов вирус АЧС в реакции гемадсорбции и его ДНК по результатам ПЦР не обнаруживались. Вирусоспецифические антитела в пробах печени, селезенки, легких, подчелюстных лимфоузлов определялись в иммуноблоттинге в разведениях 1:40-1:320. Таким образом, возможность выявления антител в пробах селезенки, легких, печени значительно облегчает мониторинг АЧС при проведении ограничительных мероприятий, особенно среди диких кабанов, добытых в охотхозяйствах. Животные, последовательно инфицированные слабовирулентным, а затем вирулентным изолятами вируса АЧС, могут выживать. При этом удается диагностировать болезнь как в ПЦР, так и серологическими методами. Для лабораторной диагностики хронической и бессимптомной форм АЧС, а также проведения мониторинговых исследований следует применять серологические методы.
Бесплатно
