Активность фосфатаз и амилазы в тканях печени у крольчат при введении этанола

Интерес исследователей к изучению механизмов влияния этанола на организм животных и человека всегда был высок. Многочисленные исследования по этому направлению связаны с применением этанола для лечения и наркоза, с изучением влияния этанола на поведение животных и человека.

Вместе с тем работ по выяснению действия этанола на активность ферментов, которые являются тонкими и объективными показателями структурно-функционального состояния клеток, тканей органов и организма в целом, единичны [3,4].

В настоящей работе представлены результаты исследований в тканях различных долей печени у молодых, восемнадцатисуточных и физиологически зрелых, трехмесячных кроликов таких ферментов какα-амилаза, щелочная и кислая фосфатазы в условиях перорального введения 60% (наркотическая доза) этанола. Амилаза катализирует эндогидролиз α-1,4-глюкозидных связей крахмала, гликогена и родственных им полисахаридов до мальтозы, декстринов и других полимеров и является индикатором углеводного обмена. Фосфатазы–ферменты, гидролизирующие эфиры фосфорной кислоты, становятся показателями разнообразных процессов обмена веществ [1].

Материал и методы. Для исследований были использованы 30 и 90 суточные крольчата породы серый великан по 10 голов (контрольные – 5 , экспериментальные – 5) в каждой возрастной группе, выращенные в фермерском хозяйстве Чувашской Республики. Контрольным животным вводили перорально физиологический раствор. Экспериментальным животным перорально вводили 60,0% (наркотическая доза) растворы этанола в дозе 3 г на 1 кг массы животного, приготовленные в физиологическом растворе. Крольчат декапитировали через час после введения этанола, из брюшной полости извлекали печень, промывали ее с холодным физиологическим раствором, разделяли на шесть долей и их замораживали жидким азотом в сосуде Дюара. В научной лаборатории кафедры агрохимии и экологии в тканях шести долей печени фотоэлектроколориметрическим (КФК-2) и спектрофотометрическим (UV-1800) методами с использованием набора реагентов компании ОАО «Витал Девелопмент Корпорэйшн» СПб определяли активность ферментов в соответствии методикам, описанным в справочном пособии [2]. Исследования активности ферментов в пробах тканей печени повторяли дважды. Расчет активности ферментов провели по калибровочным графикам с использованием компьютерной технологии«MicrosoftExcel 2007».

Результаты исследований.

Активность фермента α-амилазы (мг/с*г)) у контрольных восемнадцати суточных крольчат в тканях долей печени составляет: хвостатой – 0,270±0,025, сосцевидной – 0,261±0,037, правой – 0,227±0,036, левой наружной – 0,204±0,026, левой внутренней –0,228±0,031, квадратной – 0,231±0,021.

После введения перорально 60,0% этанола активность α-амилазы в тканях всех изучаемых долей печени у молодых крольчат существенно снижается: хвостовой– на 44,8%, р≤0,001, до

0,149±0,015; сосцевидной – на 47,1%, р≤0,001, до 0,138±0,017; правой – на 37,1%, р≤0,001, до 0,143±0,013; левой наружной – на 25,0%, р≤0,001, до 0,153±0,017; левой внутренней – на 35,5%, р≤0,001, до 0,147±0,018 и квадратной – на 36,6%, р≤0,001, до 0,147±0,013.

Активность α-амилазы у контрольных трехмесячных крольчат в тканях хвостатой, сосцевидной и правой долей печени распределена одинаково и определяется соответственно следующими величинами: 0,130±0,038; 0,125±0,037 и 0,133±0,039. В тканях левой наружной, левой внутренней и квадратной долей печени она также находится примерно на одинаковом уровне, соответственно 0,169±0,049, 0,168±0,044 и 0,160±0,037, однако эти величины достоверно выше, р≤0,01, чем в тканях предыдущих долей.

В условиях функциональной нагрузки с 60,0% этанолом активность фермента α-амилазы у трехмесячных крольчат по сравнению с контрольными достоверно снижается в тканях всех изучаемых долей печени: хвостатой – на 59,2%, р≤0,05, до 0,053±0,004; сосцевидной – на 73,6%, р≤0,001, до 0,033±0,003; правой – на 66,9%, р≤0,05, до 0,044±0,008; левой наружной – на 72,8%, р≤0,001, до 0,046±0,003; левой внутренней – на 71,4%, р≤0,001, до 0,048±0,007 и квадратной – на 73,1%, р≤0,001, до 0,043±0,006.

Активность ЩФ (мкмоль/г*ч) у контрольных восемнадцатисуточных крольчат в тканях всех изучаемых долей печени определяется на относительно низком и примерно на одинаковом уровне: хвостатой –19,2±0,3, сосцевидной – 19,8±0,2, правой – 13,7±0,4, левой наружной – 15,3±0,2, левой внутренней – 16,3±0,2, квадратной – 18,5±0,3.

В экспериментальных условиях, при введении перорально 60,0% этанола, она значительно повышается в тканях всех исследуемых долей печени: хвостовой – до 50,6±0,41, в 2,6 раза,р≤0,001, сосцевидной – до 54,6±0,036, в 2,7 раза, р≤0,001, правой – до 53,0±0,33, в 2,8раза, р≤0,001, левой наружной – до 56,±0,31, в 3,1 раза, р≤0,001,левой внутренней – до 40,4±0,39, в 2,5 раза, р≤0,001 и квадратной – до 40,7±0,44, в 2,2 раза, р≤0,001.

Активность ЩФ в тканях изучаемых долей печени у трехмесячных контрольных крольчат неодинаковая. Она наименьшая и примерно равная в тканях сосцевидной – 149,6±3,6 и правой – 141,4±3,9 долей печени. В тканях хвостатой доли она выше, чем в тканях правой доли и составляет 166,8±4,5,на 17,9%, р≤0,01, левой внутренней –172,2±4,6,на 21,7%, р≤0,01квадратной –185,6±4,5, на 31,2%, р≤0,001 и левой наружной –190,4±5,5, на 34,6%, р≤0,001.

В экспериментальных условиях у трехмесячных крольчат активность ЩФ существенно снижается в тканях всех изучаемых долей печени: хвостатой – на 26,4%,р≤0,001, до 122,7±3,1; сосцевидной – на 28,6%, р≤0,001, до 106,9±4,9; правой – на 23,7%, р≤0,001, до 107,9±3,5; левой наружной – на 36,1%, р≤0,001, до 121,6±3,2; левой внутренней – на 31,7%,р≤0,001, до 117,6±4,2 и квадратной – на 35,7%, р≤0,001, до 119,9±4,3.

Активность КФ (мкмоль/г*ч) в тканях долей печени у контрольных восемнадцатисуточных крольчат относительно низкая и во всех изучаемых ее долях относительно равная: хвостатой – 16,3±0,2, сосцевидной – 13,6±0,3, правой – 16,5±0,2, левой наружной – 19,6±0,3, левой внутренней – 13,9±0,2, квадратной – 17,8±0,3.

После введения наркотической дозы этанола она существенно падает: в тканях хвостовой доли – на 26,2%, р≤0,001, до 12,4±0,012; сосцевидной – на 27,4%, р≤0,001, до 13,5±0,015; правой – на 26,6%, р≤0,001, до 12,4±0,011; левой наружной – на 21,9% р≤0,001, до 15,3±0,013; левой внутренней – на 24,9%, р≤0,001, до 14,2±0,014 и квадратной – на 30,3%,р≤0,001, до 12,4±0,012.

Активность КФ у контрольных трехмесячных крольчат в тканях всех изучаемых долей печени находится примерно на одинаковом уровне и колеблется в следующих пределах:хвостатой – 12,8±0,2, сосцевидной – 18,6±0,3, правой – 17,7±0,2, левой наружной – 16,4±0,4, левой внутренней – 18,7±0,5, квадратной – 18,1±0,3.

После введения в организм трехмесячных крольчат экспериментального 60% этанола активность фермента значительно снижается в тканях всех долей печени: в хвостатой – на 68,0%,р≤0,001, до 5,7±0,13;

сосцевидной – на 56,5%, р≤0,001, до 8,1±0,19; правой – на 54,8%, р≤0,001, до 8,0±0,17; левой наружной – на 59,2%, р≤0,001, до 6,7±0,16; левой внутренней – на 75,9%, р≤0,001, до 4,5±0,15 и квадратной – на 65,2%, р≤0,001, до 6,3±0,18.

Обсуждение результатов.

Повышенная активность α-амилазы в тканях печени в экспериментальных условиях у восемнадцати суточных крольчат, на наш взгляд, вызвана с повышением потребностей энергетических ресурсов тканях в печени при этаноловой нагрузке, с увеличением затрат энергии в организме у молодых крольчат. У физиологически зрелых крольчат трехмесячных, обнаруживается достоверно снижение активности этого фермента, что, вероятно, объясняется с подключением других приспособительных систем организма при чрезмерной этаноловой нагрузке.

Влияние фосфатаз на обменные

ЛИТЕРАТУРА: 1.Лабораторные методы исследования в клинике: справочник // Под ред

процессы зависит от кислотно-щелочных отношений. Можно полагать, что под влиянием этанола у восемнадцати суточных крольчат происходит сдвиг среды в щелочную сторону, что обуславливает у них повышение активности фермента ЩФ и снижение активности КФ. У трехмесячных, наоборот, в условиях введения в организм 60% этанола уровень фермента ЩФ и КФ уменьшается в связи с повышением чувствительности у физиологически зрелых животных к этанолу.

Заключение. В разных долях печени у контрольных разновозрастных крольчат активность α-амилазы, щелочной и кислой фосфатаз определяется на разных уровнях, обнаруживаются и их возрастные отличия.

В экспериментальных условиях после введения перорально 60% раствора этанола реакция каждого исследуемого фермента специфическая и зависит от вида ткани долей печени и возраста животных.

В.В. Меньшикова. – М.: Медицина, 1987. – 308 с. 2. Методы биохимического анализа:

справочное пособие // Под ред. Б.Д. Кальницкого. – Боровск : КолосС, 1997. – 356 с. 3. Пурсанов, К. А . Влияние гепарина, протамин сульфата, этанола и их сочетанного применения на показатели сна экспериментальных животных / К. А. Пурсанов, А. Е. Хомутов, А. Г.Бутылин

В. С.Слободянюк // Медицинский альманах, 2009. –№ 3(8). – С. 136–137. 4. Пурсанов, К. А. Модификация гепарином активности аминотрансфераз при действии пчелиного яда и этанола / К.А. Пурсанов, З. В. Перепелюк // Актуальные вопросы и тенденции развития биологии, химии, физики: материалы международной заочной научно-практической конференции. – Новосибирск: Сибирская ассоциация консультантов– 2012.

АКТИВНОСТЬ ФОСФАТАЗ И АМИЛАЗЫ В ТКАНЯХ ПЕЧЕНИ У КРОЛЬЧАТ ПРИ ВВЕДЕНИИ ЭТАНОЛА

Игнатьев Н.Г., Иванова А.Н Резюме

Реакция исследуемых ферментов в тканях изучаемых долей печени свидетельствует, что 60% раствор этанола значительно нарушает обменные процессы, происходящие в тканях печени и подавляет компенсаторные возможности ферментосинтезирующих систем печени у крольчат обоих возрастов.

THE ACTIVITY OF PHOSPHATASE AND AMYLASE IN LIVER TISSUES FROM RABBITS WITH THE INTRODUCTION OF ETHANOL

Ignatiev N.G., Ivanova A.N.