Анализ экспрессии провоспалительных цитокинов в лейкоцитах у больных с гриппоподобными заболеваниями

Материалы и методы. В качестве биологического материала для исследования использовали венозную кровь добровольцев (пациентов с ГПЗ, а также здоровых волонтёров). Выделение белых клеток крови проводили с использованием реактива Lymphosep (BioWest). Экстракцию РНК проводили с использованием реагента TRIzol (Thermo Fischer Scientific). Анализ уровней экспрессии цитокинов проводили методом ОТ-ПЦР с использованием диагностических тест-систем, разработанных в ФГБУ «НИИ гриппа им. А. А. Смородинцева» Минздрава России,предназначенных для проведения научных исследований (не для использования в медицинской диагностике или лечении). Для диагностики возбудителей ГПЗ проводили анализ назофарингеальных мазков пациентов с использованием реагентов «АмплиСенс ОРВИ-скрин-FL» и «АмплиСенс N. meningitidis / H. influenzae /S. pneumoniae-FL».

Результаты. Всего за эпидемический сезон 2018–2019 годов было обследовано 364 пациента в возрасте от 18 до 90 лет, проживающих в Санкт-Петербурге (Российская Федерация). Все пациенты имели лёгкие или умеренные симптомы, характерные для гриппоподобных респираторных инфекций,такие как насморк или заложенность носа, умеренная лихорадка (до 39 °C), миалгия и боль в горле. ОТ-ПЦР анализ мазков из носа и горла позволил диагностировать 62,91% заболеваний, из которых более половины (36,26 %) были обусловлены инфекциями вируса гриппа (А или Б). Превалирующими после вирусов гриппа вирусными инфекциями являлись риновирус (6,92 %), коронавирус (3,14 %) и парагрипп (2,52 %). 8,8 % случаев ГПЗ были обусловлены бактериальными патогенами. У 37% пациентов с симптомами ГПЗ возбудитель обнаружить не удалось.При анализе уровней экспрессии цитокинов было обнаружено, что уровни мРНК ФНО-альфа, и ИФН-лямбда были достоверно выше в лейкоцитах всех групп пациентов с ГПЗ по сравнению с группой здоровых добровольцев. Умеренное, но статистически значимое повышение экспрессии ИЛ-6 также наблюдалось при вирусных инфекциях, включая грипп, а также при ГПЗ неизвестного происхождения, по сравнению с контрольной группой.Однако в случае ИЛ-6 в лейкоцитах не было выявлено различий между ГПЗ бактериального генеза и здоровыми донорами.Концентрация ИЛ-6 в периферической крови используется для оценки интенсивности системных цитокиновых реакций и прогноза цитокинового шторма. Отсутствие значимых изменений экспрессии ИЛ-6 в лейкоцитах у пациентов с бактериальным ГПЗ можно объяснить тем, что индукция экспрессии ИЛ-6 вторична, и его продукция, по-видимому, стимулируется первичными цитокинами ФНО-альфа и ИФН-лямбда (а не респираторными патогенами).

Выводы.

1) До начала 2020-го года (пандемии COVID-19) грипп являлся превалирующим патогеном, вызывающим респираторные заболевания в эпидемический осенне-зимний период;

Работа выполнена в рамках Государственного задания на проведение фундаментальных исследований 0784-2020-0023.