Анализ кариотипа иммуностимулированны В-лимфоцитов больных хроническим лимфолейкозом

Введение . Хронический лимфолейкоз (ХЛЛ) — злокачественное лимфопролиферативное заболевание,субстратом которого являются зрелые В-лимфоциты. Хромосомные аберрации имеют важное прогностическое значение при ХЛЛ. Наиболее часто встречающиеся хромосомные нарушения, такие как делеция 11q22, 13q14, 17p13 и трисомия 12 определяются методом FISH у 80 % больных. Выполнение стандартного цитогенетического исследования (СЦИ)с использованием В-клеточных митогенов (LPS+TPA) затруднено в связи с низкой митотической активностью опухолевых В-лимфоцитов. Применение при культивировании олигонуклеотида DSP30 в сочетании интерлейкином-2 (DSP30+IL2) увеличивает пролиферативную активность опухолевых клеток ХЛЛ. Комплексный кариотип (три и более хромосомных нарушений)является независимым неблагоприятным прогностическим фактором, однако, по литературным данным, для ХЛЛ прогностически значимым является выявление 5 и более аберраций. В ряде исследований описана высокая ассоциация комплексного кариотипа с делецией 17р13. Показано,что выявленные при кариотипи-ровании несбалансированные транслокации и транслокации с вовлечением локуса генов IGH как в составе комплексного кариотипа так и изолированно ассоциируются с более низкой общей выживаемостью, укорочением времени до начала терапии и плохим ответом на лечение. Таким образом, прогностическое значение имеют как количественные, так и качественные нарушения, выявляемые в кариотипе у больных ХЛЛ.

по январь 2019 года. Всем больным выполнено СЦИ с использованием при культивировании DSP30+IL2 (из них 50 больным проведено СЦИ с LPS+TPA) и FISH с ДНК-зондами для выявления трисомии 12, делеций 13q14, 11q22, 17p13. Исследования выполнены 42 пациентам до начала терапии и 29 пациентам, получавшим лечение,с резистентным и рецидивирующим течением заболевания.

Результаты . Анализ результатов кариотипи-рования 50 больных показал высокую эффективность выявления аберрантного и комплексного кариотипа в культуре с DSP30+IL2 — у 36 (72 %) и у 13 (26 %) больных по сравнению с LPS+TPA — у 15 (33 %) и 5 (11 %). Выявлено достоверное различие между количеством метафаз с хромосомными аномалиями, полученными при культивировании с DSP30+IL2 и LPS+TPA (V=490.5, p<0,05). По результатам СЦИ 71 больного с использованием DSP30+IL2 аберрантный кариотип выявлен в 52 (73 %) случаях. При сравнении данных СЦИ и FISH по-казано,что частота выявления делеций 13q14 11q22 и 17p13 выше при FISH-исследовании однако кариотипирование позволяло детализировать структурные нарушения в этих локусах. В кариотипе были выявлены делеции хромосомы 13 с потерей различных регионов (q11q14, q12q14, q14q21, q14q22, q14q34) и у 8 больных транслокации с вовлечением локусов 13q14, 11q22 и 17p13, сопровождающиеся де-лециями в данных локусах и подтвержденные методом FISH. Частота выявления трисомии 12 при СЦИ, напротив, превышала таковую при FISH-исследовании за счет выявления частичной трисомии 12 и дупликации региона q13q22 у 2 больных. Методом СЦИ комплексный кариотип был определен у 22 (31 %) пациентов, из них у 11 из 22 (50 %) выявлены 5 и более хромосомных нарушений. В группе больных до начала терапии комплексные нарушения в количестве 5 и более выявлены у 3 из 42 (7 %), из них только у одного выявлена делеция 17р13 методом FISH. В группе больных с резистентным и рецидивирующим течением 5 и более аберраций

V Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «ГЕНЕТИКА ОПУХОЛЕЙ КРОВЕТВОРНОЙ СИСТЕМЫ —

ОТДИАГНОСТИКИ К ТЕРАПИИ»

Санкт-Петербург 26–27 апреля 2019 г.

определены у 8 из 29 (28 %), при этом деле-ция 17р13 при FISH-исследовании выявлена только у 4 из 8 (50 %). Различные структурные аберрации,не входящие в стандартную диагностическую панель при FISH-исследовании были детектированы методом СЦИ у 38 (54 %) пациентов. Несбалансированные и сбалансированные транслокации выявлялись в 28 (39 %) и 18 (25 %) случаях соответственно. Отмечены повторяющиеся точки разрыва хромосом:1q 2q, 3p, 4q, 6q, 7p, 8р, 17p. Несбалансированные транслокации вне комплексного кариотипа определялись у 10 из 28 (36 %) больных. У 6 из 18 (33 %) пациентов были выявлены сбаланси- рованные транслокации, затрагивающие локус генов IGH (14q32) — t(2;14)(p14–15; q31–32) t(6;14)(p21; q32), t(8;14)(q24; q32), t(9;14)(p13; q31–32), t(14;19)(q32; q13).

Выводы . Выполнение СЦИ с использованием при культивировании DSP30 и IL2 наряду с методом FISH позволяет выявлять дополнительные хромосомные аберрации,в том числе комплексные нарушения кариотипа, несбалансированные транслокации и транслокации с вовлечением генов IGH , определяющие неблагоприятный прогноз ХЛЛ,и выделять группу больных высокого риска для дальнейшей разработки терапевтического подхода.