Анализ патогистологических, гистохимических, иммуногистохимических изменений в печени крыс в динамике при экспериментально воспроизведенной модели первичного гипотиреоза

Различные дисфункции эндокринных органов являлись и являются одними из ведущих в этапах формирования патологических процессов заболеваниях различных органов и систем органов. Такая патофизиологическая связь характерна и для нарушения функциональной активности щитовидной железы. Гипотиреоз как синдромальное состояние, связанное со снижением тиреоидных гормонов в организме, бывает первичным, вторичным и периферическим.

Чаще встречается у лиц женского пола в возрастном диапазоне от 30 до 50 лет [1]. В популяции более распространен первичный гипотиреоз, причиной которого могут являться аутоиммунный тиреоидит, воздействие на щитовидную железу радиоактивного йода, выраженные йод-дефицитные состояния, аномалии развития самой железы, послеродовый «безболевой» тиреоидит с гипотиреозом [2]. В 76 % случаев отмечается гипотиреоз, развившийся в течение первого года жизни после субтотальной резекции щитовидной железы [3]. Именуемый часто «великим притворщиком», гипотиреоз имеет многогранные и малоспецифичные клинические симптомы, что порой приводит в замешательство врачей-клиницистов и отсрочивает во времени постановку окончательного диагноза и назначение соответствующей терапии. Патологические состояния щитовидной железы через коррелирующие с ними изменения структуры и качества, эффективности влияния вырабатываемых ею гормонов влекут за собой метаболические структурные и функциональные расстройства повсеместно. На сегодняшний день известны следующие «маски» гипотиреоза: терапевтическая, хирургическая, гинекологическая, гематологическая, эндокринологическая, психиатрическая, неврологическая, нефрологическая, отоларингологическая, дерматологическая [4]. Не остаются без внимания и органы ге-патобиллиарной системы, в частности печень. Достаточно изучены патогенетические связи ти-реотоксических состояний со структурно-функциональными изменениями в печени [5, 6].

Однако литературные данные, обосновывающие и отображающие характерные специфические морфологические изменения в ткани печени при той или иной форме и разновидности гипотиреоза, малочисленны, что подтверждает факт недостаточности информации, отображающей суть этой весьма актуальной проблемы.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ

Провести комплексное гистологическое, гистохимическое и иммуногистохимическое исследование печени крыс при экспериментально воспроизведенной модели первичного послеоперационного гипотиреоза.

МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальная модель первичного гипотиреоза была воспроизведена на 86 животных – крысах. Отбирались лишь половозрелые здоровые крысы-самцы, с вариацией их весового диапазона от 250 до 300 г. Методом для создания первичного гипотиреоза был выбран наиболее, по нашему мнению, оптимальный – хирургический с проведением тотальной тиреоидэктомии. В процессе работы придерживались международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных. Этапы операции: 1-й этап – премедикация с последующим общим обезболиванием с применением препарата «Золител-100» в расчете 1,5 мг на 100 г массы тела животного, миолоре-лаксация кситазин гидрохлоридом в расчете

3 мг на 1 кг массы животного; 2-й этап – фиксация животного, обработка хирургического поля; 3-й этап – разрез кожи шеи по срединной линии, расширение раны, отодвигали мягкие ткани до четкой визуализации трахеи, отсекали единым блоком щитовудную железу; 4-й этап – гемостатические мероприятия, ушивание операционной раны, с последующей обработкой ее метиленовым синим. Выведение животных из эксперимента производили на 7, 14, 21, 28, 35, 45-е сутки. Основными этапами гистологической проводки тканевых образцов печени крыс после их фиксации в забуференном 10%-м формалине на протяжении 10 суток явились проведение кусочков опытного материала через спиртсодержащие вещества и изготовка из них в дальнейшем парафиновых блоков.

С каждого блока готовили стандартные гистологические срезы, которые окрашивали гистологическими и гистохимическими красителями (гематоксилин-эозин, пикрофуксин по Ван Гизону толуидиновый синий, судан-3, ШИК – реакция по А. Л. Шабадашу). В основе иммуногистохимического исследования лежал перок-сидазно-антипероксидазный метод. Для исследования динамической степени выраженности процессов апоптоза в печени крыс и корреляции их с выраженностью клеточных пролиферативных изменений использовали основные 3 маркера – каспаза-3, Bcl-2 и Ki 67. Достоверность результатов достигали использованием +/- контролей антител. Обработку статистических данных производили с применением программ Microsoft Office Excel 2007 (Microsoft, США), Statistica 6.0 (Statsoft Inc, США), использованием рангового однофакторного дисперсионного анализа Краснела – Уоллича, апостериорных критериев. Статистически значимыми изменениями считали те изменения, при которых р < 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В процессе эксперимента у лабораторных крыс после тиреоидэктомии регистрировались различные микроскопические изменения в печени.

Через неделю от начала эксперимента микроскопические изменения были минимальными и проявлялись лишь в неравномерном полнокровии центральных вен, синусоидных капилляров, очаги перивазального слабо выраженного отека, фокусы стаза, сладжирования эритроцитов. Характерная дольковая структурность органа сохранена. Гепатоциты обычной формы, размеров, образуют балки, цитоплазма их эозинофильная с наличием мелкой зернистости вокруг отдельных ядер, ядерно-цитоплазматическое соотношение в пределах нормальных значений.

К концу 2-й недели эксперимента сосудистые нарушения сохранялись, степень их выраженности возрастала: большая часть центральных вен с явлениями полнокровия, стаза, перивенулярный отек центролобулярных зон определялся повсеместно. Серозная отечная жидкость все больше скапливалась в перисину-соидальных пространствах, вокруг междольковых вен. Обнаруживались фокусы слабого разволокнения соединительной периваскулярной ткани с сохранением структурности коллагеновых волокон. В этот период появились признаки вакуольной и мелкокапельной гидропической дистрофии в цитоплазме гепатоцитов преимущественно 1-й зоны ацинусов, что повлияло на сдвиг ядерно-цитоплазматического соотношения в печеночных клетках в сторону цитоплазмы. В окрашенных толуидиновым синим соединительнотканных пучках картины метахромазии обнаружено не было.

К концу 3-й недели продолжающиеся местные гемодинамические нарушения способствовали диффузному распространению серозной отечной жидкости, захватывая перипор-тальную зону. Отдельные балки из гепатоцитов становятся сдавленными, происходит смещение центрально расположенного ядра. Цитоплазма печеночных клеток 3,2 ацинарных зон с картиной усиливающейся гидропической дистрофии и появлением первых гепатоцитов с баллонизацией. Перинуклеарно впервые в этот период выявляются мелкозернистые желтоватые включения липидов. При окраске суданом-3 липидные внутриклеточные включения приобретали желто-оранжевый цвет. Увеличивается число двуядерных гепатоцитов. При окраске толуидиновым синим в волокнах соединительной появляется реакция метахромазии.

На 4-й неделе эксперимента усиливаются гемодинамические нарушения: отек носит диффузный характер, увеличиваются участки разволокнения соединительнотканных волокон с набуханием основного их вещества, участками распада коллагеновых волокон. Истонченные печеночные балки местами начинают приобретать извитую конфигурацию. Усиливаются признаки белково-жировой дистрофии в виде увеличения количества гепатоцитов с гидропическими изменениями цитоплазмы, а также гепатоцитов с мелкозернистой жировой дистрофией, вовлекающие 1,2, 3-ю зоны большинства долек. В пе-рипортальной зоне в этот период обнаруживаются первые небольшие, неравномерно рассеянные лимфоплазмоцитарные инфильтраты.

Все чаще встречаются одиночные лимфоциты в перисинусоидальном пространстве.

К концу 5-й недели появляются гепатоциты с признаками баллонизации. Встречаются участки кариорексиса, плазморексиса - первые признаки колликвационного некроза. Отдельные гепатоциты (преимущественно 3-й зоны) с первыми мелкокапельными цитоплазматическими включениями нейтрального жира преимущественно в 3-й зоне. Усиливаются лимфоплазмоцитарные скопления.

На 45-е сутки интенсивность дистрофически-некротических изменений растет. Все большее количество гепатоцитов подвергается некро-биотическим изменениям с формированием лакун, заполненных серозной жидкостью. Повсеместно встречаются регенерирующие пролиферирующие гепатоциты.

Лимфоплазмоцитарная инфильтрация встречается повсеместно. Появляются очаги пролиферации фибробластов перицентрально, пери-портально.

К концу 45-х суток обнаружены первые тонкие соединительнотканные септы, направляющиеся от центролобулярных зон отдельных долек к аналогичным в области тирад. При окраске на пикрофуксин по Ван Гизону эти соединительнотканные волокна приобретают красный цвет.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Выявленные опытным путем гистологические, отдельные гистохимические и иммуногистохимические изменения показали, что при экспериментально воспроизведенном первичном послеоперационном гипотиреозе в печени крыс развиваются сосудистые нарушения в виде венозного полнокровия, диффузного серозного отека, тяжелых обменно-дистрофических нарушений гепатоцитов с преобладанием белковой дистрофии над жировой, с последующим цитолизом и некротическими изменениями, влекущими за собой нарушения архитектоники органа, лимфоплазмоцитарной инфильтрацией, фокусами разрастания фиброзных волокон. Показано увеличение экспрессии каспазы-3 и снижения экспрессии маркера Bcl-2, что, в свою очередь, наиболее объективно охарактеризовало состояние системы «апотоз-антиапотоз» в печени при первичном гипотиреозе. На ряду с деструктивным процессами были обнаружены признаки регенерации и репарации, которые к концу 45-х суток начали исчерпываться, что отобразилось на примере снижения показателе индекса пролиферативной клеточной активности в этот период как показателя активации компенсаторных защитных клеточных механизмов.

М.: Готар Медиа, 2016.

действие антиоксидантов при тиреоидной пан-креатопатии // Вестн. СГУ. 2011. № 3, вып. 74.

С. 31–33.

ные аспекты синдрома гипотиреоза: диагностика и лечение // Эффективная фармакотерапия.

ния заболеваний щитовидной железы // Рус. мед.

журнал. 2003. № 17. С. 751.

осложнения гипотиреоза // Справ. поликлинич.

врача. 2008. № 2. С. 4–6.