Анализ полиморфизма гена метилентетрагидрофолатредуктазы у больных артериальной гипертонией в Республике Мордовия

В Республике Мордовия, как и в Российской Федерации в целом, сердечно-сосудистые заболевания занимают ведущее место в развитии фатальных осложнений. Их последствия приводят к необратимой инвалидизации больных и большим экономическим затратам со стороны как государства, так и пациента [1–3]. Одним из главных факторов риска сердеч- но-сосудистых осложнений (инфаркта миокарда и нарушения мозгового кровообращения) является артериальная гипертония (АГ) [1; 4–5]. Развитие осложнений при АГ связано со многими гемодинамическими факторами, в том числе нарушением в системе свертываемости крови. Рост склонности к повышенному тромбо-образованию при АГ происходит за счет дисбаланса и активации сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза, которое неуклонно прогрессирует с течением основного заболевания. Одним из наиболее значимых факторов активации в системе гемостаза является мутация гена метилентетра-гидрофолатредуктазы (MTHFR) в позициях А1298С и С677Т [6–8].

Полиморфизм данного гена связан с концентрацией гомоцистеина (ГЦ) в крови. В частности, в позиции C677T он влияет на распределение соединений фолиевой кислоты, которая необходима для реметилирования ГЦ. При неспособности регенири-ровать метионин происходит выброс в кровь избытка ГЦ. Полиморфизм гена MTHFR в позиции 1298 (А1298С) при распределении аллелей (гетерозиготность или монозиготность) не играет значимой роли в повышении концентрации общего ГЦ или снижении уровня фолата в плазме [9]. Однако сочетание гетерозиготного генотипа АС гена MTHFR в позиции 1298 и гетерозиготного СТ гена MTHFR в позиции 677Т приводят к таким же изменениям (снижению активности фермента, повышению концентрации ГЦ в плазме и снижению уровня фолата), как при носительстве гомозиготного генотипа 677Т [10–11]. В настоящее время существуют многочисленные данные, указывающие на гомоцистеин как на независимый модифицируемый фактор риска сердечно-сосудистых заболеваний [12–15]. Были выявлены и изучены механизмы ГЦ, влияющие на усиление тромбогенеза и гиперкоагуляцию, а также возможные патогенетические механизмы влияния ГЦ на сосудистую стенку [16–19]. Повышение коагуляционной активности гипергомоцистеинемии связано с угнетением синтеза эндотелиального мембранного белка – тромбомодулина. Вследствие этого запускается каскад нарушений в сосудисто-тромбоцитар- ном звене гемостаза, приводящий к повышению коагуляционных свойств крови [8; 20]. Имеется значительное количество работ, указывающих на го-моцистениемию как на фактор риска развития ишемической болезни сердца, инфаркта миокарда, нарушения мозгового кровообращения, а также на раннее развитие атеросклероза сосудов головного мозга и/или периферических сосудов [12; 21–22].

Крайне интересной является информация о распространенности носительства аллея 677 в популяции. Частота встречаемости носительства гомозиготных генотипов у европейской расы составляет 4–14% [23]; гетерозиготных – ~ 40 %. Дело в том, что по данным проведенных исследований, у больных – носителей генотипа ТТ гена MTHFR уровень ГЦ в крови на 25% выше, чем у лиц с генотипом СС [24], и это прослеживается независимо от места проживания [25]. Наличие носительства генотипа ТТ гена MTHFR в позиции 677 было выявлено в большей степени у лиц европейской расы по отношению к чернокожим африканцам и аборигенам Шри-Ланки и Австралии [26], что указывает на зависимость от этнической принадлежности.

Учитывая роль гена MTHFR в развитии коагуляционных нарушений в плане повышенного тромбообразо-вания, ранее были проведены скрининговые исследования по изучению данного гена у больных АГ в Республике Мордовия, в ходе которых было выявлено преобладание носительства гетерозиготного генотипа СТ гена MTHFR в позиции 677 [27–28]. В настоящее время особый интерес представляет изучение генетических аспектов гена MTHFR при АГ у больных мордовской и русской национальностей, проживающих в разных районах РМ (в частности, Зубово-Полянском) для разработки индивидуальных программ первичной и вторичной профилактики с целью предупреждения развития фатальных и нефатальных осложнений.

Материалы и методы

Было обследовано 113 пациентов с АГ I–II стадии по классификации ВНОК 2008 г. (АД > 140/90 мм рт.ст.), проживающих на территории Зубово-Полянского р-на РМ и обратившихся в ГБУЗ РМ «Зубово-Полянская РБ». Больные АГ мордовской национальности составили 50,4 %, русской – 49,6 %. Группы были репрезентативны по возрастно-половому критерию: средний возраст больных АГ мордовской национальности составил 42,7 ± 0,8 лет, русской – 44,2 ± 1,2 лет (р > 0,05). Соотношение мужчин и женщин в данных группах составило 27 и 73 , 26 и 74 % соответственно.

Диагностика АГ, ее стадии, расчет риска развития осложнений проводились на основании данных анамнеза, лабораторных и инструментальных методов исследований, согласно принятой классификации АГ. Наряду с традиционными клинико-инструментальными исследованиями была осуществлена идентификация аллелей полиморфных маркеров методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Молекулярно-генетические исследования проводились в лаборатории ГБУЗ РМ «Зубово-Полянская РБ»; у всех пациентов было получено информированное согласие на них.

Статистический анализ результатов проведен с помощью пакетов программ «Statistica for Windows 6.0», «SPSS» (версия 14.0), программного обеспечения «MS Excel XP». При сравнении частот генотипов и аллелей в группах больных лиц использовался критерий согласия Пирсона (χ2).

Результаты исследования

При рассмотрении встречаемости носительства полиморфизма гена MTHFR в позиции 677 у больных АГ в зависимости от гендерной принад-

MORDOVIA UNIVERSITY BULLETIN лежности было выявлено преобладание гетерозиготного генотипа СТ у больных АГ мужского пола – 76 % и женского пола – 92 %. «Неблагоприятный» генотип ТТ достоверно чаще встречается у мужчин АГ (20 %) по сравнению с мужчинами – носителями генотипа СС (4 %), а также женщинами – носителями генотипа ТТ (2,5 %).

Анализ полиморфизма гена MTH-FR в позиции 677 в зависимости не только от пола больных, но и национальной принадлежности выявил, что среди больных АГ мордовской национальности, как у мужчин (65 %, р < 0,05), так и у женщин (90 %, р < 0,05) преобладает носительство промежуточного генотипа СТ. Генотип ТТ гена MTHFR в позиции 677, характеризующийся как «неблагоприятный», у больных АГ мордовской национальности встречается только у лиц мужского пола (20 %).

У больных АГ русской национальности также отмечается преобладание носительства генотипа СТ независимо от принадлежности к полу (мужчин – 87 %, женщин – 95 %). Однако в отличие от носительства генотипа ТТ у больных мордовской национальности, который проявился только у лиц мужского пола, у больных АГ русской национальности генотип ТТ встречается только у женщин (2,5 %) (табл. 1).

Таким образом, при сравнительном анализе встречаемости носительства генотипов гена MTHFR в позиции 677 в зависимости от гендерной и национальной принадлежности отмечается низкое носительство «благоприятного» генотипа СС и преобладание гетерозиготного генотипа СТ во всех группах обследованных больных. Носительство «неблагоприятного» генотипа ТТ данного гена выявлено только у больных АГ мужского пола мордовской национальности и, в низком процентом соотношении, – у женщин АГ русской национальности. Выявленное носительство генотипа ТТ гена MTHFR в позиции

677 у больных АГ в данном случае обусловлено национальной принадлежностью.

Т а б л и ц а 1

T a b l e 1

Распределение полиморфизма гена MTHFR в позиции 677 в зависимости от гендерной и национальной принадлежности

Distribution of polymorphism of the MTHFR gene at position 677, depending on gender and ethnicity

Пол, национальность больных АГ / Sex and ethnicity of hypertensive patients	СС, %	СТ, %	ТТ, %
Мужчины, рус. / Male, Russians (n = 15)	13,0 Р1/2 = 0,003	87	–
Женщины, рус. / Female, Russians (n = 41)	2,5 Р1/2 = 0,005	95	2,5 Р2/3 = 0,005
Мужчины, морд. / Male, Mordovians (n = 15)	13,0 Р1/2 = 0,001	67	20,0 Р2/3 = 0,003
Женщины, морд. / Female, Mordovians (n = 42)	10,0 Р1/2 = 0,003	90	–

В группах обследованных больных АГ также был проведен анализ встречаемости генотипов гена MTHFR в позиции A1298C. Отмечено, что преобладание носительства промежуточного генотипа АС гена MTHFR в позиции A1298C характерно для больных АГ мужского и женского пола (62,5 и 63 % соответственно). Однако частота встречаемости «неблагоприятного» генотипа СС гена MTHFR в позиции A1298C у мужчин АГ (30 %) достоверно чаще встречается по сравнению с числом носителей генотипа АА (7 %), а для больных АГ женского пола выявлено достоверно более частое носительство генотипа АА (26,4 %).

Учитывая полученные результаты полиморфизма гена MTHFR в позиции 677 и данные литературных источников относительно «привязки» носительства «неблагоприятных» генотипов к этническим группам населения, особый интерес вызвал анализ полиморфизма гена MTHFR в позиции A1298C у обследованных больных АГ 138

в зависимости от национальной принадлежности.

Среди больных русской национальности независимо от принадлежности к полу достоверно доминирует носительство промежуточного генотипа АС гена MTHFR в позиции A1298C. Частота встречаемости генотипа СС как у мужчин, так и у женщин русской национальности с АГ достоверно выше, чем генотипа АА (табл. 2).

У обследованных больных АГ мордовской национальности мужского пола отмечается отсутствие носительства «благоприятного» генотипа АА гена MTHFR в позиции A1298C. В данной группе больных отмечается преобладание промежуточного генотипа АС и носительство «неблагоприятного» генотипа СС (33,7 %) (Там же). Для женщин АГ мордовской национальности выявлено преобладание носительства промежуточного генотипа АС гена MTHFR в позиции A1298C над генотипом АА, но данное преобладание не достигает χ2 (Там же).

Т а б л и ц а 2

T a b l e 2

Распределение полиморфизма гена MTHFR в позиции A1298C в зависимости от гендерной и национальной принадлежностии

Distribution of polymorphism in the MTHFR gene A1298C positions depending on gender and ethnicity

Пол, национальность больных АГ / Sex and ethnicity of hypertensive patients	АА, %	АС, %	СС, %
Мужчины, рус. / Male, Russians (n = 15)	13 Р1/2/3 = 0,001	53,3	33,7
Женщины, рус. / Female, Russians (n = 41)	9,7 Р1/2 = 0,001	71 Р2/3 = 0,003	19,3
Мужчины, морд. / Male, Mordovians (n = 15)	–	73 Р1/2/3 = 0,001	27
Женщины, морд. Female, Mordovians (n = 42)	43 Р1/2/3 = 0,001	54,7	2,3 Р1/2/3 = 0,004

Таким образом, анализ полиморфизма исследуемого гена MTHFR в позиции A1298C выявил преобладание носительства гетерозиготного генотипа АС и встречаемость «неблагоприятного» генотипа СС у всех обследованных больных АГ независимо от гендерной и национальной принадлежности. В то же время сравнительный анализ носительства генотипа СС гена MTHFR в позиции A1298C у больных АГ показал, что у больных мордовской национальности мужского пола отсутствует носительство генотипа, характеризующегося как «благоприятный». Частота встречаемости генотипа СС у женщин русской национальности достоверно выше, чем у женщин c АГ мордовской национальности.

Заключение

У обследованных больных АГ, проживающих в Зубово-Полянском р-не РМ, было выявлено достоверное преобладание встречаемости гетерозиготных генотипов гена MTHFR незави- симо от пола и национальной принадлежности. Однако частота носительства «неблагоприятных генотипов» ТТ в позиции 677 и СС в позиции A1298C гена MTHFR более характерна для мужчин АГ мордовской национальности.

Носительство генотипа СС гена MTHFR в позиции A1298C встречается у всех обследованных больных АГ. Учитывая, что наиболее значимым в развитии повышенного тромообра-зования является сочетание носительства гетерозиготных и монозиготных генотипов СС и ТТ, то группой риска развития тромбофилических состояний являются больные АГ мужского пола мордовской национальности.

Полученные результаты не противоречат данным ранее проведенных исследований по изучению полиморфизма гена MTHFR у больных АГ (группу больных составили обследуемые из 11 районов РМ), в ходе которых было выявлено, что гетерозиготный генотип СТ встречается достоверно чаще у лиц мордовской национальности.