Анатомо-функциональная характеристика лимфоузлов разной локализации в молодом возрасте

Трахеобронхиальные лимфоузлы - это лимфоузлы с компактным морфотипом преимущественно выполняющие иммунную функцию в своем лимфатическом регионе, что определяется соответствующей структурно-клеточной организацией лимфоидной ткани [1, 2] в сопоставлении с гидратационными параметрами. При старении снижается функциональная активность органов и систем организма, что определяет необходимость поиска средств, усиливающих их работоспособность и особенно лимфоузлов, обеспечивающих защиту на разных уровнях лимфатического региона. Ряд методов, оказывающих лимфотропное и лимфостимулирующие действие на лимфатические узлы находятся на стадии разработки [3, 4, 5]. Заслуживает внимание фитотерапия. Основным действующим биоактивным веществом растений являются биофлавоноиды, обладающие полифункциональным действи- ем [6]. В связи с этим представляется важным оценить эффективность оригинальной фитокомпозиции в коррекции морфофункциональных параметров лимфоузла с целью замедления старения.

Способность корректировать морфофункциональные параметры позволяют замедлять преждевременное старение органов лимфатической системы [7, 8]. Все это делает актуальным поиск средств с лимфотропным эффектом, способных корректировать морфофункциональные характеристики стареющего лимфоузла за счет изменения структуры и степени гидратации.

Таким образом основной целью работы являлось изучить способность оригинального фитосредства корректировать морфофункциональные параметры лимфоузлов трахеобронхиального лимфатического региона с учетом параметров гидратации на поздних этапах онтогенеза.

Материалы и методы

Эксперимент был проведен на 50 белых крысах самцах Wistar. Условно животные были разделены на две возрастные группы, при этом возраст выбирался при помощи определения соотношения продолжительности жизни крыс и человека с помощью коэффициента 1,7 [9]. У группы молодых животных возраст 3–4 месяца коррелирует с юношеским периодом человека (16-20 лет). У группы старых животных возраст 1,5–2 года соотносится со стариками (65-75 лет). В качестве объекта исследования выбраны трахеобронхиальные лимфоузлы. Крысы получали стандартную диету на основе комбикорма ПК-120-1 со свободным доступом к воде. При этом 25 крыс в течение месяца и в дозе 0,1-0,2 г\кг получали фитосредство, включающие измельченные лекарственные растения (копеечник чайный, бадан, родиол розовая, черника, брусника, смородина черная, шиповник и др.) и компаунд пищевых волокон [10]. Для проведения работы использовались следующие методы:

Гистологический метод – это метод необходимый для исследования клеточного профиля компартментов лимфоузла. В основе метода лежит использование световой микроскопии. Образцы трахеобронхиальных лимфоузлов сначала фиксируют в 10% нейтральном формалине, после чего осуществляют классическую схему проводки и заливки материала в парафин, в конечном счете приготавливают гистологические срезы. Образцы окрашиваются при помощи гематоксилина и эозина, азура и эозина, толуидинового синиго, трихром-ного красителя по C. Masson. Полученные гистологические срезы подвергаются морфометрическому анализу, который выполняется с помощью морфометрической сетки, устанавливаемой на срез лимфоузла. В ходе анализа определяется удельная площадь компартментов лимфатических узлов. Дополнительно в компартментах лимфоузлов осуществлялся подсчет клеток на стандартной площади 2025 мкм² при увеличении микроскопа в 900 раз.

Термогравиметрический метод – это метод применяется с целью изучения гидратационных характеристик трахеобронхиального лимфоузла. Термогравиметри- ческий метод позволяет исследовать общую гидратированность лимфатического узла и водные фракции. Данный метод осуществляли с учетом рекомендаций Н.Ф. Фаращука. Лимфоузлы сначала высушиваются при постоянной температуре с фиксацией изменения массы при помощи аналитических весов. На основе известных объема органа и площади его структур производили расчет объема жидкости, приходящейся на определенный компарт-мент лимфатического узла в соответствии с принципом Кавальери–Акера–Глаголева.

Статистическая обработка полученных данных проводится с помощью программы Excel и StatPlus Pro, AnalystSoft Inc.

Эксперимент на животных проведен в соответствии с принципами биоэтики, правилами лабораторной практики, изложенными на Женевской конференции (1971), и в документах «Об утверждении правил лабораторной практики», «О гуманном обращении с экспериментальными животными» (Минздрав СССР № 775 от 12.08.1977), «Международных рекомендациях по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1985), руководство по лабораторным животным [11] и в соответствии с приказом МЗ РФ № 267 от 19.06.2003. Выведение из опыта и болезненные манипуляции на животных выполняли под общим эфирным наркозом. Исследование одобрено этическим комитетом ФГБНУ «Научноисследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии» (протокол № 126 от 30.11.2016).

Результаты и обсуждения .

С возрастом в трахеобронхиальных лимфатических узлах отмечается дегидратация и инволюция лимфоидной ткани, связанная с изменением клеточного профиля компартментов лимфоузла [8, 12].

Возраст индуцированная дегидратация проявляется уменьшением общей воды на 8,2% и снижением доли свободной фракции воды. Подобное изменение водного баланса отражает коэффициент гидратации, который поднимается в 2 раза. Дополнительно снижение водного компонента, обусловлено уменьшением площади лимфатических синусов. В свою очередь сокращение площади лимфатических си- нусов и увеличение доли коркового вещества (при этом физическая площадь также сокращается) приводит к дополнительной компоктизации трахеобронхиального лимфоузла, что отражается в подъёме индекса К/М. Соединительнотканная капсула трахеобронхиальных лимфоузлов увеличивается почти в 3 раза. Описанные структурные изменения сопровождаются перестройкой клеточного профиля. Отмечается уменьшение численной плотности бластов лимфоцитов во всех структурно-функциональных зонах на фоне увеличения ретикулярных клеток и появления клеток с признаками деструкции.

Использование фитокомпозиции позволяет увеличить количество общей воды, тем самым способствуя повышению гид-ратированности трахеобронхиального лимфоузла (табл. 1). На фоне повышения гидратации отмечается возрастание объема межклеточной жидкости в 2,8 раза, что положительно влияет на функции иммунокомпетентных клеток. Такое перераспределение водных фракций позволяет достичь коэффициента гидратации сопоставимого с молодыми животными. На фоне фитостимулированного снижения коэффициента гидратации отмечается повышение плотности трахеобронхиального лимфоузла (табл. 1).

Фитотерапия позволяет сохранить компактный морфотип трахеобронхиального лимфоузла, что отражается в величине индекса К/М, равной 2,39 ± 0,08 (без коррекции - 2,86 ± 0,08). Использование фитотерапии способствует увеличению площади лимфоидных узелков с герминативным центром (в 2,1 раза), синусной системы (в 1,5 раза) на фоне уменьшения межузелковой части коры (табл. 2). Реактивный ответ лимфоидных узелков связан с усилением клеточной пролиферации, что повышает иммунный ответ по гуморальному типу.

Морфометрическое исследование показало, что использование фитосредства приводит к изменению клеточного профиля в структурно-функциональных зонах трахеобронхиального лимфоузла. Так в лимфоидных узелках наблюдается увеличение лимфобластов в 1,4 раза, средних лимфоцитов в 1,3 раза, малых лимфоцитов в 1,4 раза. При этом численная плотность макрофагов в лимфоидных узелках у старых животных, получивших фитосбор, не имела статистически значимых отличий в сравнении с лимфоидными узелками старых животных в отсутствии фитостимуляции. В паракортикальной области после приема фитокомпозици отмечается уменьшение числа ретикулярных клеток в 1,8 раза и макрофагов в 1,4 раза, при этом численная плотность остальных клеток в пределах значений, имеющих место у старых животных без фитокоррекции. Мозговые тяжи в условиях фитостимуляции характеризуются повышением числа плазмоцитов в 1,7 раза, малых лимфоцитов в 1,2 раза и снижением числа макрофагов в 1,4 раза, эозинофильных гранулоцитов в 1,8 раза. В субскапулярном и мозговом лимфатических синусах на фоне БАФ стимуляции отмечается повышение численной плотности макрофагов.

Выводы

Возраст-индуцированные изменения трахеобронхиального лимфоузла проявляются дегидратацией, инволюцией лимфоидной ткани с уменьшением структурно-функциональных зон и пролиферации лимфоидных клеток. Дренажная и иммунная функции трахеобронхиального лимфоузла снижается при старении.

Прием оригинальной фитокомпозиции положительно влияет на структуру и функцию трахеобронхиального лимфоузла. Фитотерапия способствует повышению общей гидратированности и доли свободной фракции воды, увеличивает размерность компартментов, особенно лимфоидных узелков и синусной системы, повышает клеточную пролиферацию в структуре трахеобронхиального лимфоузла. Все это является важным для обеспечения дренажной и иммунной функции лимфоузла на этапе позднего онтогенеза, когда он претерпел возраст-обусловлен-ные изменения.

Таблица 1. Гидратационные характеристики трахеобронхиального лимфатического узла старых животных до и после использования биологически активного фитосбора (БАФ)

Параметр	До БАФ (n=40)	После БАФ (n=40)
Объем воды, %	58,65±0,62	66,35±0,92*
Масса воды, мг	4,48±1,05	7,76±0,61#
Объем лимфы в синусах, мм3	2,19 ± 0,32	2,23 ± 0,37*
Объем межклеточной жидкости, мм3	0,71 ± 0,19	1,98 ± 0,56*
Объем общей воды, мм3	9,93 ± 1,03	8,55 ± 1,38*
Объем свободной воды, мм3	2,90 ± 0,36	4,21 ± 1,02*
Объем связанной воды, мм3	7,03 ± 0,73	4,34 ± 0,64**
Коэффициент гидратации	2,42 ± 0,08	1,03 ± 0,04##
Плотность	1,30 ± 0,27	1,71 ± 0,13*

P > 0,05*; P < 0,001#; P < 0,05**; P < 0,01##;

Таблица 2. Перестройка компартментов трахеобронхиального лимфоузла на фоне использования биоактивного фитосбора (БАФ) на поздних этапах онтогенеза

Структура лимфоузла и индексы	Без БАФ (n=20)	После БАФ (n=20)
Капсула	1,45 ± 0,14	9,04 ± 0,48*
Субкапсулярный синус	1,68 ± 0,15	4,50 ± 0,22##
Межузелковая часть коры	5,45 ± 0,61	4,28 ± 0,24*
Лимфоидный узелок без герминативного центра (Ф 1 )	2,19 ± 0,12	4,32 ± 0,21##
Лимфоидный узелок с герминативным центром (Ф 2 )	4,71 ± 0,29	4,62 ± 0,46##
Паракортикальная область	10,54 ± 0,27	12,28 ± 1,11*
Мозговые тяжи	9,87 ± 0,36	16,63 ± 1,62##
Мозговой лимфатический синус	2,38 ± 0,34	5,61 ± 0,61**
Корково-мозговое соотношение (индекс К/М)	2,12 ± 0,12	1,43 ± 0,11*

P > 0,05*; P < 0,05**; P < 0,01##;

Таблица 3. Количественная характеристика клеток на единице площади структурнофункциональных зон трахеобронхиального лимфоузла до и после использования биоактивного фитосбора (БАФ)

Компартмент	Клетки	До БАФ	После БАФ
Лимфоидные узелки	Лимфобласты	5,38±0,23	2,21±0,14##
	Средние лимфоциты	9,05±0,28	9,86±0,44##
	Малые лимфоциты	13,63±0,30	15,35±0,61#
	Макрофаги	3,35±0,16	2,16±0,15*
Паракортикальная область	Лимфобласты	3,48±0,12	1,83±0,11*
	Средние лимфоциты	6,20±0,16	4,36±0,22*
	Малые лимфоциты	10,35±0,46	6,86±0,14*
	Ретикулярные клетки	1,33±0,09	1,45±0,11#
	Макрофаги	1,83±0,14	1,29±0,11##
	Плазмоциты	2,08±0,09	0,76±0,08*
	Эозинофильные гранулоциты	0,28±0,02	0,23±0,03*
Мозговые тяжи	Плазмобласты	1,63±0,09	1,86±0,17*
	Плазмоциты	5,72±0,27	6,39±0,17#
	Малые лимфоциты	6,83±0,23	5,80±0,25##
	Средние лимфоциты	5,43±0,16	4,69±0,31*
	Макрофаги	2,33±0,14	1,68±0,11##
	Ретикулярные клетки	1,13±0,07	1,36±0,12*
	Эозинофильные гранулоциты	0,25±0,02	0,24±0,03#
Мозговой лимфатический синус	Малые лимфоциты	8,55±0,30	6,20±0,31*
	Макрофаги	2,80±0,14	2,31±0,11##
	Ретикулярные клетки	1,30±0,05	1,78±0,11*
	Плазмоциты	1,78±0,09	1,21±0,08*
	Эозинофильные гранулоциты	0,15±0,02	0,18±0,03*

P > 0,05*; P < 0,001#; P < 0,01##;