Антиоксидантная активность суммарных извлечений травы гречихи посевной

Куркин Владимир Александрович, доктор фармацевтических наук, профессор, заведующий кафедрой фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии.

Антиоксиданты - вещества, блокирующие образование высокоактивных свободных радикалов или способствующие очищению от них клеток организма. При этом они предотвращают или замедляют окисление молекулярным кислородом; предохраняют биологические субстраты от самопроизвольного окисления. Антиоксиданты применяются также в качестве лекарственных средств при сердечно-сосудистых, глазных заболеваниях, сопровождающихся усилением перикисного окисления липидов (инфаркт миокарда, глаукома и др.) [4].

В медицине успешно применяются лекарственные растения, содержащие флавоноиды, которые обладают широким спектром биологической активности, в том числе антиоксидантной, капилляроукрепляющей, ангиопротектор-ной, ярким представителем которых является рутин, относящийся к группе витамина Р [3,7].

Рис. 1. Рутин

При недостаточности витамина Р наблюдается снижение резистентности капилляров, которое устраняют путем назначения препаратов, обладающих Р-витаминной активностью. Важно также отметить, что рутин обладает не только выраженным капилляроукрепляющим, но и антиоксидантным, гепатопротекторным действием. Кроме того, заслуживает внимания и гиполипидемический эффект, заключающийся в существенном снижении (на 30-40%) концентрации в сыворотке крови бета-липопротеидов и триглицеридов [1, 6].

К перспективным источникам получения флавоноидных препаратов и препаратов рутина можно отнести траву гречихи посевной (Fagopyrum sagittatum Gilib.), широко культивируемой в средней полосе России, однако по-прежнему остается нерешенной проблема стандартизации сырья данного растения. В цветущих побегах гречихи посевной в качестве основного компонента содержится до 3-5% рутина, а также сопутствующие ему другие флавоноиды — кверцетин, изокверцитрин и др. [4].

Целью настоящей работы является фито-химическое исследование надземной части травы гречихи посевной на содержание в ней рутина и суммы флавоноидов в плане обоснования целесообразности использования травы гречихи посевной в качестве отечественного источника антиоксидантных лекарственных средств.

Исследовали образцы надземной части гречихи посевной, культивируемой в Самарской области: Средне-Волжский филиал ГУ ВИЛАР (пос. Антоновка), Самарский ботанический сад. Образцы сырья собирали в фазу цветения. Спектрофотометрическое исследование осуществляли с использованием спектрофотометра «Specord 40» (Analytik Jena).

Для проведения фитохимического исследования необходимо было: - подобрать оптимальный экстрагент;

• -    провести сравнительный анализ различных органов растения для выявления той части, в которой содержание рутина будет наиболее максимальным;

• -    разработать метод тонкослойной хроматографии (подобрать оптимальные условия и более эффективную систему растворителей);

• -    разработать методику количественного определения рутина.

Для определения подлинности травы гречихи посевной была разработана методика тонкослойного хроматографирования (ТСХ). При этом нами было предложено использование в данной методике государственного стандартного образца (ГСО) рутина. В задачу исследования входил подбор системы растворителей и способа детектирования зон адсорбции на хроматограмме, позволяющих идентифицировать флавоноиды. Разделение флавоноидов было наиболее оптимальным в системе растворителей: хлороформ-метанол-вода (26:14:3) («Силуфол УФ 254» или «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ»). В данных условиях четко разделяются флавоноидные и фенилпропаноидные соединения. Для обнаружения веществ на хроматограмме использовали детекцию в УФ-свете (254 нм и 366 нм). На хроматограмме обнаруживается доминирующее пятно с Rf - 0,4 (рутин), а также проявляются другие пятна, в частности, пятно фиолетового цвета с величиной Rf - 0,2 (хлорогеновая кислота), с Rf - 0,8 (кверцетин) и с Rf - 0,6 (изокверцитрин).

Для оценки количественного содержания рутина, содержащегося в траве гречихи посевной, была предложена методика хроматоспект-рофотометрии и была обоснована целесообразность использования ГСО рутина. Установлено, что оптимальными параметрами экстракции являются: 70% этиловый спирт, соотношение сырье-экстрагент 1:40, время экстракции — 60 мин. 0,03 мл извлечения (1:40) на 70% спирте наносят микропипеткой на линию старта пластинки «Силуфол УФ 254» или «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ» в виде полос: первая полоса с извлечением на 70% этиловом спирте, вторая - 0,01 мл раствора ГСО рутина, третья - контроль. Пластинку хроматографии -руют в системе: хлороформ - метанол - вода (26:14:3) восходящим способом. В УФ-свете (254 нм) отмечают флуоресцирующие пятна рутина с величиной около R_f - 0,4. Отмеченные зоны слоя сорбента с рутином и зону контрольного опыта вырезают и количественно переносят в колбы вместимостью 10 мл, элюируют 5 мл 95% этиловым спиртом при встряхивании в течение 1 ч и раствор фильтруют. Оптическую плотность полученных элюатов измеряют на спектрофотометре «Specord 40» (Analytik Jena) в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 362 нм на фоне элюата контрольного опыта. Процентное содержание рутина в сырье в пересчете на абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле:

_v V х V 3 х D х 5 х m 0 х 100 х 100 X ;

V 2 х V 4 х D 0 х 5 х (100 - W )

где V 1 - объем извлечения, мл; V₂ - объем раствора ГСО рутина, мл; V₃ - объем элюата ГСО рутина, взятый для нанесения на хроматограмму, мл; V₄ - объем извлечения, взятый для нанесения на хроматограмму, мл; D - оптическая плотность раствора при Х =362 нм; D₀ - оптическая плотность раствора ГСО рутина при Х =362 нм; m - масса навески сырья, г; m₀ - масса навески ГСО рутина, г; W - потеря в массе сырья при высушивании, %.

Содержание рутина в траве гречихе посевной, культивируемой в Самарской области, находится в диапазоне 2,50-3,70%. Также нами был разработан способ получения рутина из травы гречихи посевной. В результате проведенных технологических исследований выход рутина составил около 1,0%, что позволяет положительно оценить перспективу получения отечественного препарата из травы гречихи посевной.

Выводы: предложены новые подходы к стандартизации сырья гречихи посевной. Разработаны оригинальные методики определения показателей качества сырья, которые рекомендованы для включения в нормативную документацию, а также показана перспектива использования в медицине нового вида лекарственного растительного сырья — трав ы гречихи посевной.