Антитела к ксенои эндобиотикам у больных раком молочной железы

Заболеваемость раком молочной железы (РМЖ) в России на протяжении многих лет находится на первом месте и составляет 19,8% от общего числа онкопатологии у женщин [1]. В связи с этим исследования роли экзогенных и эндогенных факторов, влияющих на возникновение, развитие и прогноз течения болезни по-прежнему являются актуальными. Известно, что важную роль в процессе пролиферации и мета

Аносова Татьяна Петровна, научный сотрудник лаборатории     иммунохимии.     Е-mail:     tm-

Поленок Елена Геннадьевна, кандидат фармацевтических наук, заведующая лабораторией иммунохимии

Аносов Михаил.Петрович, научный сотрудник лаборатории иммунохимии

Красильникова Ксения Сергеевна, научный сотрудник лаборатории иммунохимии

Костянко Михаил Владимирович, ведущий инженер-технолог лаборатории иммунохимии

Вержбицкая Наталья Евгеньевна, кандидат медицинских наук, заведующая патолого-морфологическим отделом

Гуров Евгений Александрович, ведущий инженер-технолог лаборатории иммунохимии

Вафин Илгиз Ахметович, главный врач

Рагожина Светлана Егоровна, заместитель главного врача по медицинской части

Антонов Александр Витальевич, заведующий маммологическим отделением

Глушков Андрей Николаевич, доктор медицинских наук, профессор, директор стазирования РМЖ имеют стероидные гормоны [2, 3]. Предполагается, что химические канцерогены группы полициклических ароматических углеводородов, в частности, бензо[а]пирен (БП), принимают участие в возникновении РМЖ [4]. Особый интерес вызывают исследования антител (АТ) к низкомолекулярным ксено- и эндо-биотикам при бластомогенезе, коль скоро такие АТ могут существенно влиять на проявление биологических свойств и стероидных гормонов, и химических канцерогенов [5, 6]. Изучением антител (АТ) к БП и его аддуктам с ДНК занимались лишь несколько групп авторов. Petruzzelli S. et al. [7] выявили АТ к аддуктам БП с ДНК у индивидуумов, проживающих в крупном индустриальном центре, особенно у курящих при наличие рака легкого в анамнезе. Chagnaud J.L. et al. [8] впервые обнаружили повышенные уровни АТ к БП класса А (IgA АТ-БП) у больных раком и предраком молочной железы. Взаимосвязей между гистологической формой рака, размером опухоли, наличием или отсутствием метастазов и уровнями АТ к БП выявлено не было. Ранее нами были выявлены IgA АТ-БП у больных РМЖ [9]. Исследования АТ к эндобиотикам (стероидным гормонам) у больных РМЖ не проводились.

Цель работы : изучить особенности образования IgG и IgM АТ к БП, прогестерону (ПГ) и эстрадиолу (ЭС) у больных раком молочной железы, определить их прогностическое значение.

Материалы и методы. В обследовании приняли участие женщины в постменопаузе, больные РМЖ (n=123), с гистологическим диагнозом инфильтрующая карцинома, которые поступали в Областной клинический онкологический диспансер г. Кемерово. У большинства женщин была выявлена II стадия заболевания (71,5%), I и III стадии составили 2,5% и 26% соответственно. Средний возраст женщин -61,6±9,5 лет. В группу сравнения вошли условно здоровые женщины (n=50), у которых в аннам-незе не было заболеваний молочной железы. Средний возраст женщин группы сравнения -53,8±6,8 лет. Материалом для анализа послужила сыворотка крови, которая забиралась в аликвоты и хранилась при -20^оС в течение недели. Забор материала осуществлялся согласно этическим стандартам в соответствии с Хельсинской декларацией 2000 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ № 266 от 19.06.2003 г. Все лица, участвовавшие в исследовании, дали информированное письменное согласие на участие в нем. Определение АТ к БП, ЭС и ПГ проводили с помощью модифицированного нами неконкурентного иммунофер-ментного анализа [10]. Конъюгаты БП-бычий сывороточный альбумин (БП-БСА) были синтезированы по оригинальной методике [11]. Конъюгат ЭС-БСА был синтезирован присоединением БСА к эстрадиолхинонам, полученным окислением ЭС солью Фреми. Коньюгат ПГ-БСА был получен путем конъюгации геми-глутарата 21-гидроксипрогестерона и БСА карбодиимидным способом. Уровни АТ к гаптенам выражали в относительных единицах и вычисляли по формуле:

AT-X=(ODx-bca-ODbca)/ODbca где Х= БП или ЭС или ПГ; ODx-bCA - связывание АТ с конъюгатом гаптен-БСА, ODbCA - связывание с БСА. Уровень АТ-Х показывает, во сколько раз связывание с гаптеном превышает связывание с белком-носителем.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием ППП STATISTICA 6.0 (StatSoft, Inc., USA). Ненормальный характер распределения показателей определили с помощью критерия Шапиро-Уилка и в дальнейшем статистически значимые различия между групп-пами выявляли с помощью непараметрического критерия х2 с поправкой Иейтса на непрерывность вариации и U-критерия Манна-Уитни при уровне значимости p<0,05. Отношение шансов

(OR) рассчитывали с доверительным интервалом (CI) при 95% уровне значимости. Для оценки пороговых значений уровней АТ был проведен ROC-анализ [12] и рассчитаны величины AUC, характеризующие прогностическую значимость показателей. В качестве отличных классификаторов, имеющих высокую прогностическую значимость, учитывали показатели уровней АТ к гаптенам с AUC>0,8.

Результаты и обсуждение. В результате проведенных исследований выявлено наличие IgG и IgM АТ к БП, ЭС и ПГ у больных РМЖ и у здоровых женщин. У женщин с РМЖ уровни IgG Ат к БП, ЭС и ПГ были в 1,7-1,9 раз выше по сравнению со здоровыми (медианы: АТ-БП 3,6 против 1,9, р=0,002; АТ-ЭС 4,6 против 2,7, р=0,002; АТ-ПГ 3,2 против 1,7, р=0,0006 соответственно). Та же закономерность прослеживается и для АТ класса М: у женщин с РМЖ уровни АТ к трем гаптенам превышали таковые у здоровых женщин в 1,6-1,8 раз (медианы: АТ-БП 3,6 против 2,3, р=0,00005; АТ-ЭС 2,6 против 1,4, р=0,00005; АТ-ПГ 4,2 против 2,7, р=0,002 соответственно).

Рассчитанные с помощью ROC-анализа пороговые значения АТ оказались следующими: для IgG АТ-БП>3, АТ-ЭС>3, АТ-ПГ >2; для IgM АТ-БП>3, АТ-ЭС>2, АТ-ПГ >2. Выяснилось, что у женщин с РМЖ чаще встречаются повышенные уровни IgG АТ к БП и к стероидным гормонам, чем у здоровых женщин. При этом шансы возникновения РМЖ увеличиваются в 2,4-2,7 раз (табл. 1). При анализе АТ класса М к трем гаптенам была обнаружена такая же закономерность. У женщин больных РМЖ чаще встречались АТ к БП, ЭС и ПГ выше пороговых значений, чем у женщин в группе сравнения. Но при этом шансы развития РМЖ были несколько выше (в 2,6-3,2 раза).

Далее мы исследовали зависимость уровней АТ к БП, ЭС и ПГ от стадии заболевания РМЖ. Выяснилось, что у больных РМЖ II стадии уровень IgG АТ в 1,7-2,0 раза выше, чем у здоровых женщин (медианы: АТ-БП 3,7 против 1,9, р=0,0008; АТ-ЭС 4,6 против 2,7, р=0,002; АТ-ПГ 3,4 против 1,7, р=0,0009 соответственно). Для АТ класса М наблюдалась та же закономерность: уровень АТ к БП, ЭС, ПГ был в 1,6-1,9 раз выше, чем у здоровых женщин (медианы: Ат-БП 3,9 против 2,3, р=0,0001; АТЭС 2,7 против 1,4, р=0,0002; АТ-ПГ 4,2 против 2,7, р=0,004 соответственно). У больных РМЖ III стадии уровень IgG АТ-ПГ был в 1,9 раз выше, чем в группе сравнения (медиана 3,2 против 1,7, р=0,009) и уровни IgM АТ ко всем трем гаптенам были в 1,5-1,8 раз выше по сравнению со здоровыми женщинами (медианы: АТ-БП 3,5 против 2,3, р=0,008; АТ-ЭС 2,5 против 1,4, р=0,0004; АТ-ПГ 4,6 против 2,7, р=0,01 соответственно). Статистически значимой разницы по уровням АТ ко всем трем гаптенам между больными РМЖ II и III стадии не было выявлено.

Таблица 1. Частота встречаемости повышенных уровней антител к бензо[a]пирену (АТ-БП), эстрадиолу (АТ-ЭС) и прогестерону (АТ-ПГ) у больных РМЖ и у здоровых женщин

Показатели	Группа сравнения (n=50) n / %	Больные РМЖ (n=123) n / %	Χ2, р	ОR (95% CI)	AUC
IgG
АТ-БП > 3	17/34	72/59	7,6; 0,007	2,7; (1,3-5,7)	0,87
АТ-ЭС > 3	23/46	83/67	6,0; 0,01	2,4; (1,2-5,0)	0,80
АТ-ПГ > 2	22/44	84/68	7,8; 0,006	2,7; (1,3-5,7)	0,99
IgM
АТ-БП > 3	18/36	73/59	6,9; 0,009	2,6; (1,2-5,4)	0,84
АТ-ЭС > 2	17/34	75/61	9,3; 0,003	3,0; (1,4-6,4)	0,99
АТ-ПГ > 2	31/62	103/84	8,4; 0,005	3,2; (1,4-7,1)	0,79

Таблица 2. Частота встречаемости повышенных уровней антител к бензо[a]пирену (АТ-БП), эстрадиолу (АТ-ЭС) и прогестерону (АТ-ПГ) у больных РМЖ в зависимости от стадии заболевания

Показатели	Группа сравне ния(n= 50) n / %	Больные РМЖ II стадии (n=88)			Больные РМЖ III стадии (n=32)
		n / %	Χ2, р	OR (95% CI)	n / %	Χ2, р	OR (95%; CI)
IgG
АТ-БП > 3	17/34	53/59	7,8; 0,006	2,9; (1,3-6,5)	18/56	3,1; 0,08	---
АТ-ЭС > 3	23/46	60/68	5,6; 0,02	2,5; (1,2-5,5)	19/59	3,4; 0,06	---
АТ-ПГ > 2	22/44	61/69	7,5; 0,007	2,9; (1,3-6,3)	21/66	2,8; 0,09	---
I				gM
АТ-БП > 3	18/36	53/59	6,6; 0,01	2,7; (1,2-5,9)	18/56	2,5; 0,11	---
АТ-ЭС > 2	17/34	52/59	7,1; 0,009	2,8; (1,3-6,2)	21/66	6,6; 0,01	3,7; (1,3-10,6)
АТ-ПГ > 2	31/62	73/83	6,5; 0,01	2,9; (1,3-7,2)	28/88	5,1; 0,02	4,3; (1,2-17,1)

По частоте встречаемости повышенных уровней АТ к БП, ЭС и ПГ статистически значимые различия со здоровыми женщинами были получены только у больных РМЖ II и III стадий. При РМЖ II стадии чаще встречались IgG и IgM АТ к БП, ЭС и ПГ выше пороговых значений по сравнению со здоровыми женщинами (табл. 2). При этом шанс возникновения РМЖ возрастает в 2,5-2,9 раз. У больных РМЖ III стадии чаще встречались повышенные уровни только IgM АТ к ЭС и ПГ по сравнению со здоровыми женщинами. При этом шансы возникновения РМЖ были несколько выше (в 3,7-4,3 раза). Статистически значимой разницы по уровню АТ к гаптенам между больными РМЖ I стадии и здоровыми женщинами не было выявлено ввиду, возможно, малого количества наблюдений.

Выводы: в результате исследования обнаружены антитела классов G и M к ксенобиотику БП и эндобиотикам ЭС и ПГ у больных РМЖ и у здоровых женщин. Уровни АТ к БП, ЭС и ПГ были выше у больных РМЖ, чем у здоровых женщин (р<0,05). При этом у больных РМЖ чаще встречались уровни АТ выше пороговых значений: для IgG АТ-БП>3, АТ-ЭС>3, АТ-ПГ >2; для IgМ АТ-БП>3, АТ-ЭС>2, АТ-ПГ>2. Шансы возникновения РМЖ возрастают в 2-4 раза при повышенных уровнях АТ к трем гаптенам.

Рассчитанные показатели AUC показывают, что выбранные нами маркеры (АТ к химии-ческому канцерогену и стероидным гормонам) являются отличными классификаторами. Особо следует выделить IgG АТ-ПГ и IgМ АТ-ЭС, которые демонстрируют самую высокую прогностическую значимость в оценке шансов возникновения РМЖ из всех исследованных показателей, характеризуются самым высоким значением AUC (0,99) и могут использоваться в качестве маркеров РМЖ.