Антитромбоцитарная и антитромбогенная активность фитоэстрогенов экстракта семян льна при экспериментальной овариоэктомии

Лечение климактерического синдрома является весьма актуальной медицинской и социально-экономической проблемой, поскольку в постменопаузальный период происходит увеличение частоты возникновения и тяжести сердечно-сосудистых заболеваний [5, 12]. Постменопаузальный синдром связан со снижением концентрации циркулирующих в крови эстрогенов. Для лечения синдрома дефицита эстрогенов, обусловленного искусственной или естественной менопаузой, применяют гормональную заместительную терапию (ГЗТ). Однако, учитывая повышенный риск индукции эстрогензависимого опухолевого процесса и наклонность к тромбозам при длительном применении гормонов [6, 8], успешной заменой ГЗТ, особенно для профилактики сердечно-сосудистых осложнений климактерического синдрома, могут быть фитоэстрогены – средства, содержащие в своем составе селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов (изофлавоноиды, лигнаны) [7].

Цель работы: исследование антитромбоцитарной и антитромбогенной активности экстракта семян льна, содержащего лигнан секоизоларицирезинола диглюкозид, в условиях модели эстрогенной недостаточности.

Материал и методы

Опыты проводили на 43 крысах-самках Вистар массой 250–280 г. Исследование антитромбогенной, анти-тромбоцитарной активности и эндотелийпротекторных свойств экстракта семян льна (ЭСЛ) проводили на крысах после овариоэктомии. Удаление яичников у животных контрольной и опытной групп осуществляли под эфирным наркозом согласно общепринятой методике [2]. Исследования проводили в 3 сериях опытов, крысы каждой серии опытов были разделены на 3 группы: ложно-оперированные, контрольные и опытные животные. Крысы опытной группы получали стандартизированный ЭСЛ (содержащий 42% секоизоларицирезинола диглюкозида) ежедневно внутрижелудочно в дозе 40 мг/кг в течение 2 недель, начиная с 8-х суток после моделирования овариоэктомии. Контрольные животные получали эквиобъем-ное количество 1%-й крахмальной слизи по той же схеме.

В первой серии опытов исследовали антитромбоген-ную активность ЭСЛ. Для этого через 1 ч после последнего введения препарата животных наркотизировали (уретан 1 г/кг, внутрибрюшинно), выделяли левую общую сонную артерию и воспроизводили модель внутрисосудистого тромбоза аппликацией 10%-го раствора FeCl2 на сосуд [3]. На сонную артерию накладывали манжеточный датчик и регистрировали величину кровотока по сосуду с помощью электромагнитного расходомера крови MFV-1100 (Nihon Kohden, Япония). Отмечали уровень снижения и время полной остановки кровотока в стенозированном сосуде. Через сутки проводили эвтаназию животных передозировкой эфирного наркоза, осуществляли изъятие участка сосуда, на который накладывали раствор FeCl2, тромб выделяли и взвешивали.

Во второй серии экспериментов исследовали влияние ЭСЛ на антитромбоцитарную активность сосудистой стенки по методу В.П. Балуды и И.И. Деянова [1]. У животных под эфирным наркозом проводили забор сегмента брюшной аорты (масса сегмента 3,0±0,7 мг). Сосуд отмывали от крови и в течение 3 мин инкубировали в стандартизированной богатой тромбоцитами плазме (БТП), полученной от крыс-доноров, затем сосуд удаляли и регистрировали амплитуду агрегации тромбоцитов при добавлении к плазме АДФ в концентрации 4х10–5 М.

В третьей серии опытов изучали влияние ЭСЛ на вазодилатационную активность эндотелия. Под наркозом (тиопентал-натрий, 50 мг/кг) у животных контрольной и опытной групп катетеризовали сонную артерию для регистрации артериального давления после болюсного внутривенного введения веществ, вызывающих эндоте-лийзависимую (ацетилхолин, 5 мкг/кг) и эндотелийне-зависимую (натрия нитропруссид, 30 мкг/кг) вазодилатацию. Коэффициент эндотелиальной дисфункции (КЭД) оценивали как отношение площади над кривой снижения артериального давления при введении натрия нитропруссида к величине этого показателя при введении ацетилхолина.

Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием пакета статистических программ STATISTICA 8.0. Данные представлены в виде M±m, где M – среднее значение, m – стандартная ошибка среднего значения. Для оценки достоверности межгрупповых различий использовали непараметрический критерий Mann–Whitney U test. Статистически значимыми различия считались при р<0,05.

Результаты и обсуждение

У животных контрольной группы после воздействия на сосудистую стенку 10%-м раствором FeCl2происходи-ла полная остановка кровотока в сонной артерии в среднем через 20 мин. В стенозированных сосудах формировались тромбы, и через сутки после окклюзии средняя масса тромба составляла 0,5 мг (табл. 1). При курсовом введении животным ЭСЛ зафиксировано снижение кровотока на 28% от исходного значения к 90-й мин эксперимента. На следующие сутки в просвете сонных арте-

Таблица 1

Влияние ЭСЛ (40 мг/кг, внутрижелудочно в течение 14 дней) на показатели внутрисосудистого тромбообразования (M±m)

Примечание: *– р<0,05 по сравнению с исходными значениями; +– р<0,05 по сравнению со значениями в группе контроля.

Таблица 2

Влияние ЭСЛ на амплитуду агрегации тромбоцитов до и после инкубации сегмента брюшной аорты в стандартизированной

БТП (%) и на коэффициент эндотелиальной дисфункции (КЭД, отн. ед.) крыс после овариоэктомии (M±m)

Примечание: #– р<0,05 по сравнению со значениями до инкубации с сегментами сосудов; *– р<0,05 по сравнению со значениями у ложнооперированных животных; + – р<0,05 по сравнению со значениями в группе контроля.

рий у крыс этой группы тромбов не обнаружено, что свидетельствует о выраженной антитромбогенной активности исследуемого препарата.

Формирование тромба при воздействии хлорида железа на сосуд происходит в результате инициации процессов ПОЛ и, как следствие, активации сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза [3]. Учитывая эти данные, для изучения возможных механизмов антитромбогенно-го действия ЭСЛ были проведены эксперименты по оценке его антитромбоцитарных и эндотелийпротективных эффектов.

Исследования антитромбоцитарной активности сосудистой стенки показали, что амплитуда необратимой АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов у крыс-доноров достигала 41% (табл. 2). После инкубации донорской БТП с сегментом брюшной аорты ложнооперирован-ных животных амплитуда агрегации тромбоцитов была на 53% меньше, чем без инкубации. После инкубации БТП с сегментом брюшной аорты овариоэктомированных крыс (контроль) амплитуда агрегации тромбоцитов повышалась на 18% по сравнению со значениями у ложно-оперированных животных, что свидетельствует о снижении антитромбоцитарной активности эндотелия брюшной аорты у крыс после овариоэктомии. Амплитуда АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов после инкубации с сегментом брюшной аорты овариоэктомирован-ных крыс, получавших ЭСЛ, соответствовала значениям ложнооперированных животных, что отражает способность препарата восстанавливать сниженную в условиях овариоэктомии антитромбоцитарную активность эндотелия аорты крыс.

У животных контрольной группы выявлена дисфункция эндотелия: КЭД был на 22% выше, чем у ложноопери-рованных крыс. Следовательно, эстрогенная недостаточность, вызванная овариоэктомией, как и менопауза у женщин, способствует развитию эндотелиальной дисфункции [4, 11], что проявилось ослаблением ее антиагреган- тной и эндотелийзависимой вазодилатационной активности. КЭД в группе животных, получавших ЭСЛ, снижался на 21% по сравнению со значением в контрольной группе. Величина этого показателя практически достигала соответствующего уровня у ложнооперированных крыс, свидетельствуя о способности препарата восстанавливать баланс эндотелийзависимой и эдотелийнезависи-мой вазодилатации в условиях экспериментальной овариоэктомии. Эндотелийпротективный эффект ЭСЛ, вероятно, обусловлен антиоксидантной активностью секо-изоларицирезинола диглюкозида и его способностью как модулятора эстрогеновых рецепторов обеспечивать через ER-α эстрогеновые рецепторы негеномную активацию эндотелиальной NO-синтазы [9, 10].

Заключение

ЭСЛ обладает антитромбогенным действием, одним из механизмов реализации которого является выраженная эндотелийпротективная активность препарата, выявленная у крыс после овариоэктомии. Полученные данные позволяют предполагать, что ЭСЛ может быть альтернативой ГЗТ для профилактики и лечения сердечнососудистых осложнений климактерического синдрома.